Морфофизиологическое обоснование применения биостимуляторов для свиней в биогеохимической провинции с недостаточностью йода (стр. 2 )

Для качественного исследования микрофлоры носовой полости и кишечника проводили посевы на ряд элективных и дифференциальных сред. Стрептококки выделяли на среде Гарро и КАМП-методом. Для выделения стафилококков использовали кровяной солевой МПА. Из чистой культуры, выращенной на МПА, ставили реакции на плазмокоагуляцию, фибринолизин, лецитиназу, ДНК-азу и скрытую гемолитическую активность. Из биохимических свойств определяли разжижение желатины, коагуляцию молока, ставили реакции на маннит, лактозу, сахарозу, аммиак, сероводород. Клостридии культивировали на мясо-пептонно-печеночном бульоне (МППБ) Китта-Тароцци, плотной среде Вильсона Блера, глюкозо-кровяном агаре Цейслера. Выделение бифидобактерий проводили посевом больших разведений фекалий в среду Блаурокка. Лактобациллы определяли на среде МРС. Для выделения бактерий семейства кишечных материал засевали на среды Эндо, Левина, МПА, МПБ. Чистую культуру эшерихий типировали в реакции агглютинации. Для выделения протея материал засевали в конденсационную воду свежескошенного агара. Выделение микроскопических грибов осуществляли на средах Сабуро и Чапека. Результаты переводили (при посеве из кишечника) в десятичные логарифмы и устанавливали относительное соотношение различных групп микроорганизмов.

Содержание трийодтиронина (Т3), свободного тироксина (сТ4) и тиреотропного гормона (ТТГ) определяли иммуноферментным методом с использованием стандартных тест-наборов в соответствии с прилагаемыми инструкциями фирмы «Алкор-Био». С этой целью применяли соответствующие наборы реагентов: для Т3 –«Тироид ИФА-трийодтиронин-01», сТ4 - «Тироид ИФА-свободный Т4», ТТГ - «Тироид ИФА-ТТГ-1».Содержание йода определяли на атомно-абсорбционном спектрометре «Квант-ZЭТА» по стандартной методике.

Полученный цифровой материал подвергнут статистической обработке методами вариационной статистики с проверкой достоверности результатов с помощью критерия Стьюдента с использованием соответствующих стандартных компьютерных программ (,1980).

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Естественная резистентность, фагоцитоз свиней при йодной недостаточности и разных методах ее коррекции

В сыворотке крови животных 2-8-й опытных групп, с йодной недостаточностью в организме, бактерицидная активность к началу опытов была снижена.

Показатель бактерицидной активности сыворотки крови свиней второй группы в процессе опыта, имел тенденцию к дальнейшему снижению. На 10, 30, 60 и 120-ые дни он понизился, по сравнению с контрольным уровнем, в 1,7; 2,08; 2,41и 2,63 раза. Введение йодида калия per os и аэрозольно (третья и четвертая группы) способствовало умеренной активизации ее. Более выраженным этот процесс был в организме животных четвертой группы. Значительная активизация бактерицидной активности сыворотки крови отмечалась у животных пятой и шестой групп. Максимального уровня бактерицидная активность сыворотки крови достигла у поросят седьмой и, особенно, восьмой групп. Она превысила фоновый уровень к 10, 30, 60 и 120-ым дням опыта по седьмой группе соответственно в 1,17;1,42; 1,54 и 1,47 раза, по восьмой – в 1,3; 1,65; 1,82 и 1,73 раза. До конца опыта описываемый показатель в сыворотке крови поросят восьмой группы был выше их значения в контрольной и других опытных группах.

Результаты исследований фагоцитарной активности лейкоцитов крови представлены на рисунке 2.

Данные по изучению динамики лизоцимной активности сыворотки поросят приведены в таблице 2.

 

Рисунок 2 Динамика фагоцитарной активности лейкоцитов крови поросят при йодной недостаточности и разных методах ее коррекции

2.2.2 Т – и В - системы иммунитета свиней при йодной недостаточности и разных методах ее коррекции

Содержание Т-Е-РОК - лимфоцитов в крови поросят с выраженной йодной недостаточностью было снижено на 8,9 – 11,0% и на 0,4 – 0,7*109 /л. Т-Е-РОК-лимфоциты в крови животных 2-ой группы имели тенденцию к дальнейшему снижению и к 120- му дню опыта эта разница была на 22,6%. Т-Е-РОК - лимфоциты в крови поросят 3-8-й опытных групп, в процессе эксперимента, постепенно повышались, по сравнению с фоновым показателем. Умеренным этот процесс был в крови животных 3 и 4-ой групп. Количество Т-Е-РОК-лимфоцитов в крови поросят 5 и 6-ой групп имело более выраженную степень повышения. Самого высокого показателя Т-Е-РОК - лимфоциты достигли в крови поросят 7 и, особенно, 8-ой групп. Здесь их содержание было выше, по сравнению с фоновым уровнем, к 10, 30, 60 и 120-ым дням опыта на 5,9; 8,8; 12,8; 10,5% и на 8,4; 12,4; 16,9 и 12,5%.

Таблица 2 Динамика изменения лизоцимной активности сыворотки

крови поросят (M±m, в %)

Группа животных	Фон	Сроки исследований в днях от начала опытов
10	30	60	120
1	19,80±0,73	20,20±0,80	21,70±0,73	20,60±1,08	20,90±0,87
2	15,40±0,51*	14,30±0,66**	12,80±0,66***	10,60±0,40***	8,70±0,30***
3	16,80±0,58*	17,80±0,86*	18,40±0,51*	19,30±0,62	18,70±0,62
4	15,90±1,03*	18,60±0,51	19,60±0,75	20,10±0,71	19,20±1,02
5	16,80±0,66*	19,40±0,51	20,60±0,68	21,60±0,93	20,00±0,71
6	16,20±0,37*	19,90±0,46	21,00±0,95	22,00±0,71	20,50±0,92
7	16,40±1,08*	20,60±0,93	22,30±1,16	25,60±1,03**	24,80±0,97**
8	16,00±1,05*	21,20±0,73	24,50±0,89**	27,00±0,71***	25,20±1,02**

Примечание: при Р<0,05 - *, Р<0,01 - *, Р<0,001 - *** - разница достоверна.

Йодная недостаточность способствовала снижению продукции В-ЕАС - клеток в организме свиней. Фоновый уровень В - лимфоцитов в крови поросят 2-8-ой групп был ниже, чем в контроле, на 6,8 – 7,8%.У животных 2-ой группы регистрировалось дальнейшее снижение уровня В - клеток в крови: к 10, 30, 60 и 120-ым дням опыта на 7,2; 8,2; 7,9 и 8,7%.Содержание В-ЕАС-лимфоцитов в крови свиней опытных групп повышалось по срокам опыта. Максимальная реакция В - лимфоцитов отмечалась в крови свиней 7 и 8-ой групп.

Содержание Т-Е-РОК-клеток в лимфоузле поросят 2-8-й опытных групп, к началу опытов (фон), было снижено. В лимфатическом узле поросят 2-й группы процесс затормаживания активности Т-Е-РОК-лимфоцитов прогрессировал по периодам опыта. К 10, 30, 60 и 120-ым дням эксперимента их уровень был ниже контрольного показателя на 3,5; 10,6; 12,0; и 14,4%. Т-Е-РОК-лимфоциты в лимфоузле животных 3 и 4-й групп до 30-го дня умеренно повышались в количестве и достигли к этому сроку контрольного уровня. В лимфатическом узле свиней 5 и 6-й групп количество Т-Е-РОК - лимфоцитов достигло контрольного значения к 10-му дню опыта. Максимальный уровень Т-Е-РОК-лимфоцитов регистрировался в лимфоузле животных 8-й группы. Они превысили фон и контроль к 10,30 60 и 120-ым дням на 6,3 и 4,1%; 13,4 и 9,4%; 15,0 и 11,4%; 12,7 и

9,3%. Незначительно уступали им показатели животных 7-ой группы.

Данные по исследованию динамики Т - супрессоров и Т-хелперов в крови поросят приведены на рисунке 3.

 

Рисунок 2 Динамика содержания Т-супрессоров (а) и Т-хелперов (б) в крови поросят при йодной недостаточности и разных методах коррекции

Рис.3 Динамика Т-супрессоров и Т-хелперов в крови поросят

(обозначения те же, что и на рис.1)

Данные по изучению динамики В-ЕАС-лимфоцитов в лимфоузле и селезенке животных приведены на рисунке 4.

Фоновый уровень иммунокомпетентных Т - клеток в селезенке свиней, с нарушенным йодным обменом был снижен на 6,7 – 8,0 млн. и 13,6 – 17,6 млн.

В органе животных 2-й группы процесс снижения активности Т - лимфоцитов, по сравнению с фоновым и контрольным показателями, прогрессировал по срокам опыта. Умеренная активизация Т-лимфоцитов наблюдалась в селезенке свиней 3 и 4-й групп. Более выраженным этот процесс был в селезенке животных 5 и 6-й групп. Самый интенсивный процесс активизации Т-Е-РОК-лимфоцитов отмечался в селезенке свиней 7 и 8-й групп. Их уровень повысился, по сравнению с контролем, к 10, 30, 60 и 120-ым дням опыта на 4,0 и 6,8%; 9,9 и 14,1%; 10,1 и 12,5%; 8,8 и 11,2%.

Фоновый уровень Т-Е-РОК - лимфоцитов в тимусе поросят с йодной недостаточностью был снижен на 159,7-170,2 млн. Изменения в тимусе животных 3-8-й опытных групп были направлены на повышение их уровня. Этот процесс имел не одинаковую степень выраженности по группам. Показатели животных 3 и 4-й групп не достигали контрольного уровня. Интенсивнее увеличение Т-Е-РОК - клеток наблюдалось в тимусе поросят 5 и 6-й групп. Однако здесь они также не достигли контрольных цифр. Содержание Т-Е-РОК - лимфоцитов в тимусе поросят 7 и 8-й групп с 30-го дня опыта было выше, чем в контроле.

 

Рисунок 4 Динамика В-ЕАС-лимфоцитов в глубоком паховом лимфатическом узле (а) и селезенке (б) поросят (обозначения те же, что и на рис.1)

2.2.3 Мононуклеарные клетки периферической крови,

иммунофенотипированные моноклональными антителами,

иммуноглобулины сыворотки крови поросят при йодной

недостаточности и разных методах ее коррекции

В крови животных с нарушенным йодным балансом в организме наблюдалось снижение МКА серии ИКО - 124. Их значение в крови поросят 2-й группы, в процессе опыта, имело тенденцию к дальнейшему снижению. У животных 3-8-й опытных групп происходили изменения в сторону их повышения. Максимальное содержание лимфоцитов, реагирующих с МКА серии ИКО - 124 выделялось из крови поросят 7-й и, особенно, 8-й групп. Здесь их уровень увеличился, по сравнению с исходным фоновым показателем, на 10, 30, 60 и 120-ые дни опыта на 4,9 и 6,0%; 7,3 и 8,9%; 8,2 и 11,1%; 7,7 и 10,3%. Подобным образом изменялась динамика МКА серии ИКО- 10.

Результаты исследования изменения содержания в сыворотке крови свиней иммуноглобулинов класса G представлены в таблице 3.

Фоновый уровень Ig А в сыворотке крови животных с йодной недостаточностью был снижен на 0,9 – 1,03 мг/мл. У свиней 2-й группы они уступали контролю к 10, 30, 60 и 120-ым дням на 1,08; 0,96; 1,08 мг/мл и 1,46 мг/мл. В сыворотке крови поросят 3-8-й групп, в процессе опытов, наблюдалось динамичное повышение Ig А. Самый высокий уровень Ig А регистрирован в сыворотке крови свиней 7 и, особенно, 8-й групп.

Таблица 3 Динамика изменения содержания Ig G в сыворотке крови поросят

(M±m, в мг/мл)

Группа животных	Фон	Сроки исследований в днях от начала опытов
10	30	60	120
1	20,80±0,58	21,20±0,86	21,90±0,87	22,00±1,18	21,80±0,80
2	18,60±0,75*	17,60±1,17*	17,20±0,73**	15,30±0,77***	15,40±0,68***
3	17,90±0,56*	18,80±0,37*	19,20±0,46	20,30±0,77	20,00±0,32
4	18,40±0,99*	18,90±0,71*	19,90±0,64	21,20±1,02	20,20±1,16
5	18,50±0,50*	19,20±0,41*	20,80±0,86	21,70±0,86	21,20±0,58
6	17,60±0,93*	19,50±0,74*	21,40±0,60	22,00±0,61	21,60±0,97
7	18,00±0,71*	19,80±0,66*	22,90±0,90	23,90±0,68*	23,30±0,37**
8	17,80±0,73*	20,10±0,51*	23,40±0,68*	25,00±1,10***	24,60±0,53***

Примечание: при Р<0,05 - *, Р<0,01 - **, Р<0,001 - *** - разница достоверна.

2.2.4 Иммуноморфологические перестройки в структурах лимфоидных органов свиней при йодной недостаточности и разных методах ее коррекции

В лимфатическом узле животных контрольной группы на долю коркового плато приходилось 18,4 -20,6%, лимфатических узелков без светлых центров 7,2 – 7,9%, со светлыми центрами 2,9 – 3,7%, мякотных тяжей 17,9-18,9%, паракортикальной зоны 14,9-16,0%. Площадь коркового плато у поросят 2-8-й групп, к началу опытов, была расширена на 4,9-5,9%. В лимфатическом узле животных 2-й группы в процессе опыта наблюдалось дальнейшее ее расширение. У поросят 3-8-й групп в ходе экспериментов отмечалось уменьшение площади коркового плато. Максимальным тот процесс был в лимфоузле поросят седьмой и восьмой групп. Она уступала фону к концу опыта на 6,0 и 6,3%.

При йодной недостаточности отмечалось уменьшение площади лимфатических узелков без светлых центров. В лимфоузле животных 2-й группы данный процесс активно прогрессировал. В опытных группах отмечалось расширение площади лимфоузелков без светлых центров. Максимальной описываемая площадь была у животных 7 и 8-й групп. Данные по исследованию динамики изменения площади, занимаемой лимфатическими узелками со светлыми центрами и паракортикальной зоной глубокого пахового лимфатического узла представлены на рисунке 5.

В лимфатическом узле животных 2-й группы регистрировалось уменьшение площади мякотных тяжей. К 10, 30, 60 и 120-ым дням этот показатель уступал контрольному уровню на 2,9; 5,7; 7,4 и 10,2%. Во всех опытных группах регистрировалось расширение площади мякотных тяжей органа. Максимального показателя они достигли у поросят 7 и 8-й групп.

Результаты морфометрических измерений структурных компонентов тимуса показали, что фоновый показатель площади коркового вещества у поросят 2-8-й групп в начале опытов был меньше, чем в контроле, на 22,2-24,2%. Площадь коркового вещества тимуса поросят 2-й группы подвергалась в процессе опытов дальнейшему уменьшению: она уступала контрольному показателю на 10, 30,

Рисунок 5 Динамика изменения соотношения площади лимфатических узелков со светлыми центрами (а) и паракортикальной Т-зоны (б) в глубоком паховом лимфатическом узле поросят (обозначения те же, что и на рис.1)

60 и 120-ые дни исследований на 24,2; 28,9; 34,2 и 37,3%. Описываемый показатель в тимусе поросят 3-8-й групп, в процессе опытов имел тенденцию к увеличению. Более значительное расширение площади коркового вещества регистрировалось у поросят пятой, шестой, и особенно седьмой и восьмой групп. Максимального значения она достигла у животных этих групп к 60-му дню, превысив фоновое значение на 19,5; 21,0; 23,7 и 26,4%.

Данные морфометрических исследований реакции селезенки представлены в автореферате только по 1, 2 и 8-й группам (таблица 4).

2.2.5 Иммуноцитологические реакции в лимфоидных органах свиней при йодной недостаточности и разных методах ее коррекции

Уровень нейтрофилов в костном мозге свиней 2-й группы к началу опытов был увеличен на 16,09%. При этом показатель миелоцитов превышал контрольную цифру на 2,49%, метамиелоцитов на 5,7%, палочкоядерных нейтрофилов на 5,8%, сегментоядерных на 2,1%. К 60-му дню исследований нейтрофилия в миелограмме свиней 2-й группы прогрессировала. Показатели содержания нейтрофилов в костном мозге свиней 3, 4, 7 и 8-й опытных групп, к 60-му дню опыта, имели тенденцию к снижению в сторону физиологических норм. Однако, они продолжали превышать значение животных 1-й группы, по 3 и 4-й группам на 2,92 и 2,0%, а по 7 и 8-й группам - приблизилось контрольному уровню.

Уровень метамиелоцитов к 60-му дню исследований понизился в 3 и 4-й

Таблица 4 Изменения морфометрических показателей селезенки поросят

Сроки исследований, в днях	Красная пульпа (M±m, в %)	Белая пульпа (лимфатические узелки) (M±m, в %)
Т-зона	В-зона
периваскулярная муфта	без светлых центров	со светлыми центрами
1 группа – контроль, здоровые животные
10	57,40±0,87	12,80±0,42	14,90±0,49	3,60±0,06
30	58,50±1,04	11,90±0,49	15,60±0,26	3,90±0,25
60	58,00±2,37	13,40±0,87	15,00±1,15	4,50±0,21
120	57,90±1,36	13,00±1,15	14,70±0,65	4,30±0,15
2 группа – контроль, больные
10	63,20±1,56**	9,40±0,70**	10,10±0,59***	3,00±0,29
30	66,70±2,43***	8,20±0,57***	9,00±0,58***	2,20±0,21**
60	72,60±2,35***	6,60±0,55***	7,30±0,15***	1,50±0,15***
120	79,90±1,73***	4,20±0,17***	6,20±0,21***	-
8 группа - KI аэрозольно + сапропель + пробиотик + прополис
10	63,70±2,33***	9,03±0,52***	9,80±0,31***	2,33±0,15**
30	58,60±0,40	11,40±0,31	14,60±0,31*	4,50±0,12
60	56,00±1,53	12,90±1,12	15,60±0,87	4,80±0,12
120	53,50±1,26*	15,70±1,11**	17,50±1,04**	5,20±0,23*

Примечание: при Р<0,05 - *, Р<0,01 - *, Р<0,001 - *** - разница достоверна.