Иммунометаболические эффекты, вызываемые лизоцимом при кровопотере. Введение после кровопотери лизоцима дозозависимо снижало содержание ДК и МДА, активность АЛТ и ACT, нормализовало содержание лизоцима сыворотки крови при введении лизоцима в дозе 5 мг/кг. Введение лизоцима в дозе 1 мг/кг усиливало, а в дозе 5 мг/кг нормализовало развитие иммунного ответа на ЭБ. Обе дозы препарата индуцировали появление иммуностимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов КПК. Введение интактным крысам супернатанта спленоцитов, содержащего иммуносупрессирующий фактор, не оказывало влияния на содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в сыворотке крови. В отличие от этого, введение после кровопотери супернатанта спленоцитов, содержащего хелперный фактор, снижало величины показателей, характеризующих выраженность ПОЛ и проницаемость мембран гепатоцитов. Таким образом, антиоксидантное действие лизоцима после кровопотери опосредуется факторами, выделяющимися клетками селезенки. Вероятно, эти факторы являются элементами механизма, обеспечивающего сохранение структурного гомеостаза при острой потере значительного количества крови.
В связи с изложенным, интересно было выяснить, вызывает ли иммуностимулирующий и мембранопротекторный эффекты один и тот же фактор или их возникновение обусловлено разными соединениями. Установлено, что фракция I супернатантов прилипающих при температуре 32-37°С спленоцитов, выделенных после кровопотери, при введении КПК крысам, не получавшим лизоцим, вызывала снижение содержания ДК и МДА, активность АЛТ и ACT, а также усиливала иммунный ответ на ЭБ, фракция II была неактивной, а фракция III стимулировала иммунную реакцию на ЭБ, но не влияла на содержание продуктов ПОЛ и активность ферментов в крови реципиента (рис. 1).
Рис. 1. Активность супернатантов клеток селезенки крыс после кровопотери и введения лизоцима.
Введение ВФСС существенно повышало активность СОД и ГР, а инъекции НФСС не влияли на биохимические показатели эритроцитов. Таким образом, в составе ВФСС, полученных после кровопотери и введения лизоцима, содержится фактор, активирующий синтез антиоксидантных ферментов и ограничивающий выраженность ПОЛ клеточных мембран. Эритроциты, полученные после кровопотери и инъекций высокомолекулярной фракции, не обладали иммуносупрессирующими свойствами, а эритроциты животных, которым вводили низкомолекулярную фракцию, при аллогенном переносе супрессировали развитие иммунного ответа на ЭБ.
Отсутствие иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов, полученных у КПК и введения лизоцима, может быть объяснено блокирующим влиянием ВФСС на выделение в сосудистое русло или образованием в нем соединений, индуцирующих появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов или индуцирующим влиянием ВФСС на выход в сосудистое русло эритроцитов, резистентных к действию сывороточных субстанций, накапливающихся после кровопотери.
Результаты проведенных экспериментов позволяют считать, что иммуномодулирующее действие лизоцима при кровопотере обусловлено модификацией эритроцитов и выделением под влиянием модифицированных эритроцитов хелперных цитокинов прилипающими к стеклу клетками селезенки. Наряду с этим, лизоцим опосредованно, через цитокины спленоцитов, вызывает изменение антиоксидантного статуса эритроцитов.
Кровопотеря снижала скорость реакции окисления НАДФН в ПЯЛ крови. Введение после кровопотери увеличивало скорость и НАДФН-оксидазной реакции в ПЯЛ.
Принимая во внимание данные об участии цитокинов прилипающих к стеклу клеток селезенки в реализации модулирующего влияния лизоцима на ФМА лейкоцитов, большой интерес представлял вопрос: обусловлено ли повышение скорости реакции, катализируемой НАДФН-оксидазой, при введении лизоцима, влиянием на фермент лизоцима, или этот эффект вызывают выделяющиеся под влиянием лизоцима прилипающих к стеклу клеток? Для решения этого вопроса ПЯЛ, полученные после кровопотери, экстракорпорально примировали лизоцимом или фракциями супернатантов прилипающих и неприлипающих клеток селезенки.
Установлено, что примирование лизоцимом не влияло на скорость реакции, катализируемой НАДФН-оксидазы. В отличие от этого, низкомолекулярная фракция супернатантов прилипающих к стеклу при 32-37 ºС спленоцитов, полученных у КПК, получавших инъекции лизоцима, или тяжелых эритроцитов крыс, которым вводили лизоцим, увеличивала скорость НАДФН-оксидазной реакции ПЯЛ КПК. На основании полученных данных можно прийти к заключению о том, что активатором НАДФН-оксидазы ПЯЛ КПК является не лизоцим, а выделяющиеся под его влиянием цитокины клеток, прилипающих к стеклу при 32-37 °С.
Взаимосвязь иммуномодулирующих эффектов, вызываемых лизоцимом и жирорастворимыми витаминами после кровопотери. Лизоцим, филлохинон и менадион, введенные по отдельности, не влияли на показатели ФМА ПЯЛ и иммунологической реактивности. Лизоцим, введенный с филлохиноном или менадионом, повышал, но не нормализовал, ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность КПК. Кровопотеря приводила к появлению в крови легких эритроцитов, обладающих иммуносупрессорной активностью. Инъекции лизоцима, филлохинона или менадиона по отдельности не влияли на свойства эритроцитов крыс, подвергнутых кровопусканию. Введение КПК лизоцима с филлохиноном или менадионом не отменяло иммуносупрессирующих свойств легких эритроцитов, но индуцировало появление иммуностимулирующей активности у тяжелых клеток.
При изучении концентрации АСТ, АЛТ, ЩФ и ОБ после кровопотери выявлено повышение исследованных показателей. Введение КПК лизоцима и лизоцима в сочетании с токоферола ацетатом не влияло, а в сочетании с ретинола ацетатом или менадионом нормализовало уровень АСТ, АЛТ, ЩФ и ОБ (табл. 8).
Таблица 8.
Метаболические эффекты лизоцима и жирорастворимых витаминов у КПК.
Условия опыта | 1. | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Контроль | КПК | КПК, введение лизоцима | КПК, введение лизоцима и РА | КПК, введение лизоцима и ТА | КПК, введение лизоцима и менадиона | |
ТАГ | 3,2±0,4 | 6,8±1,0*1 | 6,4±1,1*1 | 6,6±1,1*1 | 6,4±1,0*1 | 6,9±1,2*1 |
ХОЛ | 5,8±0,3 | 11,5±1,2*1 | 12,8±1,3*1 | 12,3±1,4*1 | 11,6±1,1*1 | 12,7±1,2*1 |
ДК | 3,6±0,3 | 6,6±0,5*1 | 7,1±0,7*1 | 4,6±0,4*1-3 | 4,4±0,3*1-3 | 6,9±0,6*1,4,5 |
МДА | 2,4±0,1 | 4,3±0,3*1 | 4,7±0,4*1 | 3,5±0,2*1-3 | 3,3±0,2*1-3 | 4,6±0,4*1,4,5 |
АЛТ | 0,8±0,1 | 9,0±2,3*1 | 8,8±2,2*1 | 0,9±0,2*2-3 | 5,4±1,3*1-4 | 1,2±0,2*2-5 |
АСТ | 0,4±0,1 | 5,5±0,9*1 | 5,1±0,8*1 | 0,5±0,1*2-3 | 3,9±0,6*1-4 | 3,2±0,7*2-4 |
ЩФ | 9,8±1,4 | 21,3±2,4*1 | 23,4±2,5*1 | 10,3±1,5*2-3 | 15,2±2,1*1-4 | 17,0±1,9*2-4 |
ОБ | 8,3±0,9 | 12,3±1,3*1 | 11,5±1,0*1 | 8,6±0,8*2-3 | 9,0±1,0*2-3 | 8,7±0,9*2-4 |
ЛНП | 23,5±2,4 | 54,1±4,9*1 | 56,3±4,2*1 | 46,5±4,2*1-3 | 40,7±3,8*1-3 | 33,1±2,8*1-5 |
ГАГ | 0,23±0,02 | 0,54±0,06*1 | 0,57±0,08*1 | 0,49±0,09*1 | 0,51±0,09*1 | 0,34±0,05*2-5 |
ААП | 24,7±3,3 | 38,8±3,1*1 | 35,0±4,0*1 | 32,8±3,5*1 | 34,1±3,7*1,4 | 22,5±2,7*2-5 |
АМГ | 1,7±0,3 | 3,4±0,6*1 | 3,1±0,6*1 | 3,0±0,5*1 | 2,5±0,4*1,4 | 1,9±0,3*2,5 |
Исследована иммуномодулирующая активность стромы эритроцитов интактных крыс, включавших менадион и затем обработанных лизоцимом. Оказалось, что введение СВМОЛ животным, иммунизированным ЭБ, повышало ФМА мононуклеаров, стимулировало развитие ГИО и ГЗТ в большей степени, чем строма, включившая менадион, но не обработанная ферментом.
Результаты этих экспериментов дают основание считать, что менадион вызывает иммуностимулирующий эффект, проникая во внутрь фагоцитировавшей стромальную частицу клетки, в то время как действие лизоцима реализуется на уровне мембраны эритроцита, в которой эти соединения модифицируют структуру фосфолипидной матрицы и интегрированных в нее гликопротеидных молекул.
Принципиально важно было выяснить иммуномодулирующую эффективность сочетанного применения лизоцима и нафтохинонов, а также СВМОЛ в условиях вторичного иммунодефицитного состояния, вызванного кровопотерей 2 % от массы тела. Оказалось, что введение лизоцима и менадиона повышало, но не нормализовало, ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность КПК. В отличие от этого, инъекции КПК СВМОЛ нормализовали ФМА ПЯЛ периферической крови, а также развитие ГИО и ГЗТ на ЭБ (табл. 9).
Таблица 9
Влияние СВМОЛ на ФМА ПЯЛ, развитие ГИО и ГЗТ у КПК.
Показатели | Контроль | КПК | КПК, введение лизоцима и менадиона | КПК, инъекции СВМОЛ |
1 | 2 | 3 | 4 | |
ФЧ | 40,6 ± 4,1 | 20,3 ± 2,4*1 | 32,0 ± 3,5*1,2 | 38,7 ± 3,6*2,3 |
ФИ | 1,7 ± 0,2 | 0,7 ± 0,1*1 | 1,2 ± 0,1*1,2 | 1,4 ± 0,2*2,3 |
НСТ-сп. | 11,2 ± 0,9 | 7,3 ± 0,5*1 | 9,7 ± 0,6*1,2 | 10,7 ± 0,7*2 |
НСТ-ст. | 26,5 ± 1,9 | 14,5 ± 0,9*1 | 19,2 ± 1,2*1,2 | 28,1 ± 1,7*2,3 |
АОК | 21,6 ± 2,5 | 10,7 ± 1,2*1 | 15,4 ± 1,8*1,2 | 19,8 ± 2,2*2,3 |
РМЛ | 4,6 ± 0,4 | 2,7 ± 0,3*1 | 3,5 ± 0,4*1,2 | 4,3 ± 0,4*2,3 |
Полученные данные дают основание считать, что иммуномодулирующая активность СВМОЛ при кровопотере опосредуется цитокинами, выделяющимися макрофагальными клетками селезенки.
Иммуномодулирующее действие лизоцима и водорастворимых витаминов при кровопотере. Крысам после кровопотери по указанной выше схеме вводили лизоцим и препараты витаминов по отдельности или в парных сочетаниях. В день последнего поступления препаратов животных иммунизировали ЭБ. Установлено, что введение лизоцима с пиридоксином или фолатом не влияло на величины показателей, характеризующих ФМА ПЯЛ и иммунологическую реактивность. Выраженный иммуномодулирующий эффект наблюдался при введении лизоцима с кобаламином (табл. 10).
При введении КПК, получавшим инъекции лизоцима супернатантов спленоцитов, прилипающих при температуре 4-10ºС, установлено иммуносупрессирующее влияние на развитие ГИО, индуцированного ЭБ. Фракционирование супернатантов показало, что иммуносупрессирующей активностью обладала фракция с молекулярной массой 50-60 кД.
Введение супернатантов, прилипающих при температуре 32-37 ºС вызывало иммуностимулирующие эффекты на ГИО КПК после введения лизоцима. Фракционирование показало, что иммуностимулирующие эффекты присущи фракции с молекулярной массой 10-15 кД, а гепатопротекторные – фракции с массой >100 кД. Также иммуностимулирующие эффекты установлены у фракции неприлипающих клеток с молекулярной массой 10-15 кД.
Таблица 10.
Метаболические эффекты лизоцима и водорастворимых витаминов у КПК.
Условия опыта | 1. | 2 | 3. | 4 | 5 | 6 |
Контроль | КПК | КПК, | КПК, | КПК, | КПК, | |
ТАГ | 3,2±0,4 | 6,8±1,0*1 | 6,6±1,1*1 | 6,5±0,8*1 | 6,7±0,8*1 | 6,3±1,0*1 |
ХОЛ | 5,8±0,3 | 11,4±1,2*1 | 12,3±1,1*1 | 12,4±1,2*1 | 10,8±1,3*1 | 11,8±1,2*1 |
ДК | 3,6±0,3 | 6,7±0,5*1 | 6,4±0,6*1 | 4,8±0,6*1 | 6,6±0,4*1 | 4,2±0,4*1–5 |
МДА | 2,4±0,1 | 4,3±0,3*1 | 4,4±0,3*1 | 4,1±0,3*1 | 4,0±0,3*1 | 3,6±0,2*1–5 |
АЛТ | 0,8±0,1 | 6,1±2,6*1 | 6,7±2,4*1 | 4,7±2,1*1–3 | 5,4±2,3*1 | 2,3±1,6*1–4 |
АСТ | 0,4±0,1 | 4,4±0,9*1 | 4,1±0,8*1 | 3,2±0,6*1–3 | 3,8±0,7*1 | 1,6±0,5*1–4 |
ЩФ | 9,8±1,4 | 25,4±2,7*1 | 24,6±2,2*1 | 17,3±2,1*1–3 | 18,4±2,2*1,2 | 11,3±1,7*1–4 |
ОБ | 8,3±0,9 | 11,9±1,3*1 | 12,6±1,3*1 | 10,8±1,2*1 | 11,2±1,2*1 | 9,1±0,9*2,3 |
ЛНП | 25,8±2,7 | 57,1±4,8*1 | 54,9±5,0*1 | 52,4±5,1*1 | 56,0±5,3*1 | 37,7±3,2*1–5 |
ГАГ | 0,25±0,03 | 0,56±0,07*1 | 0,55±0,08*1 | 0,54±0,08*1 | 0,59±0,09*1 | 0,39±0,07*2–5 |
ААП | 23,4±3,2 | 38,7±3,3*1 | 36,8±4,1*1 | 35,7±3,4*1 | 37,2±3,7*1 | 31,7±3,4*1 |
АМГ | 1,7±0,3 | 3,8±0,8*1 | 3,6±0,9*1 | 3,2±0,7*1 | 3,4±0,9*1 | 2,5±0,6*1,3 |
Введение лизоцима с пиридоксином или фолатом не приводило к появлению в крови здоровых животных эритроцитов, обладающих иммуномодулирующими свойствами. В отличие от этого, лизоцим в сочетании с кобаламином обусловливали возникновение у тяжелых эритроцитов хелперной активности. Установлено, что введение ЭКПЛ животным, получавшим пиридоксин или кобаламин, повышало ФМА нейтрофилов, стимулировало развитие ГИО и ГЗТ в значительно большей степени, чем введение этих препаратов без ЭКПЛ. Введение ЭКПЛ крысам, получавшим фолат, не оказывало влияния на активность полинуклеаров и развитие иммунного ответа. Таким образом, лизоцим индуцировал появление хелперных свойств у эритроцитов только при введении с кобаламином (но не с пиридоксином или фолатом). Вместе с тем, ЭКПЛ повышали ФМА ПЯЛ и стимулировали развитие различных форм иммунного ответа при введении животным, получавшим пиридоксин или кобаламин (но не фолат).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
