Клинико-диагностическое значение определения антител к аденозиндезаминазе у больных ревматоидным артритом с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента (стр. 1 )

На правах рукописи

НЕГМЕТЗЯНОВА

Елена Сергеевна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К АДЕНОЗИНДЕЗАМИНАЗЕ

У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННОЙ

ФОРМЫ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМОГО СОРБЕНТА

14.00.39 – ревматология

А в т о р е ф е р а т

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Волгоград – 2006

Работа выполнена в ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

ЗБОРОВСКАЯ Ирина Александровна

Научный консультант:

кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник

АЛЕКСАНДРОВ Андрей Вячеславович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

ЧИЖОВ Петр Александрович

доктор медицинских наук ЛЕМПЕРТ Борис Аркадьевич

Ведущая организация:

Оренбургская государственная медицинская академия

Защита состоится «__» декабря 2006 г. в ___ часов на заседании
Специализированного Совета Д 208.008.02 Волгоградского государственного медицинского университета (400066, г. Волгоград,
пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО
«Волгоградский государственный медицинский университет».

Автореферат разослан «___» ноября 2006 г.

Ученый секретарь

Специализированного Совета

доктор медицинских наук БАБАЕВА А. Р.

Актуальность проблемы

Медико-социальные проблемы заболеваний костно-суставно-мышечного аппарата, к которым относится и ревматоидный артрит (РА), актуальны для всего мира, так как их значимость определяется не только широкой распространённостью особенно в промышленно развитых странах (14-15% всех хронических заболеваний, регистрируемых в Российской Федерации), но и большими экономическими потерями (Tavernier C., 1995; и соавт., 2001; Pincus T., 2005).

Среди воспалительных заболеваний суставов РА занимает первое место по распространённости и регистрируется с частотой от 0,6 до 1,8%, а для некоторых возрастных групп и выше (Alballa S. R., 1999; , 2001; 2005; Amit M. et all., 2006). Согласно эпидемиологическим исследованиям по Российской Федерации регистрируется ежегодно около 300 тыс. больных РА, а заболеваемость по данным статистики составляет 2,75 на 1000 лиц 18 лет и старше (, 2000).

РА характеризуется поражением людей преимущественно рабо­тоспособного возраста, что приводит к значительным временным и стойким трудовым потерям, необходимости постоянного длительного обращения за медицинской помощью ( и соавт., 1999; и соавт., 2001; Richards A. J., 2003; Pincus T., 2005), а в ряде случаев прогрессирующая деструкция суставов и тяжесть висцеральных поражений могут угрожать и жизни больных (Symmons D., 2002).

Поэтому изучение проблемы РА, в частности поиск новых методов эффективной и своевременной диагностики, важно не только с точки зрения практической медицины, но и имеет огромное социально-экономическое значение.

Постоянное совершенствование клинико-лабораторных и инструментальных методов диагностики РА способствует формированию всё более полного и объективного представление о причинах, возможных механизмах развития и путях лечебного воздействия на ревматические болезни в целом и на РА в частности.

Патогенез РА представляется весьма сложным, включающим в себя разнообразные звенья: иммунологические, воспалительные, дистрофические, аллергические, генетические и т. д. Клиническая и иммуногенетическая гетерогенность РА не вызывает сомнений. Иммунная система обладает определенной автономностью в распознавании и удалении чужеродных клеток, антигенов и других веществ, но, наряду с этим, она находится под строгим гомеостатическим контролем, участие в котором принимает и множество биохимических реакций (, Ф, 2004). Существующая биохимическая гетерогенность РА очевидно обусловлена наличием конституциональной биохимической индивидуальности человека и зависит от нарушений именно надмолекулярного порядка, затрагивающих клеточные, тканевые, системные уровни.

В последнее время в литературе обсуждается вопрос об участии в патогенезе аутоиммунных заболеваний различных нарушений, связанных с метаболическими процессами, происходящими на клеточном или субклеточном уровнях, медиаторами которых являются ферменты. Биохимические реакции, составляя материальную основу всех функциональных процессов организма, несут адаптационную, гомеостатическую миссию. Хорошо известно, что с активностью аденозиндезаминазы (АДА), являющейся ключевым ферментом пуринового метаболизма (ПМ), тесно связаны иммунологические процессы в организме. От активности данного фермента зависит внутриклеточная концентрация аденозина и дезоксиаденозина – пуриновых метаболитов, играющих важную роль в процессах кооперативных взаимодействий клеток иммунной системы. Снижение активности АДА и следующие за этим многочисленные изменения, являющиеся результатом накопления в клетке токсических концентраций аденозина, дезоксиаденозина и соответствующих нуклеотидов, а также блокады рибонуклеотидредуктазы, приводят, в конечном счете, к остановке биосинтеза РНК, ДНК и гибели клеток.

Серьезные нарушения в активности АДА наблюдается при иммунодефицитных заболеваниях различной этиологии. Данные об изменении энзиматической активности АДА в сыворотке крови при ревматических заболеваниях немногочисленны и противоречивы, а изучению иммунологической активности фермента посвящены единичные работы (Lee J. Y. и соавт., 2002).

Учитывая характерные иммунологические нарушения при РА и участие ПМ в патогенезе этого заболевания, можно предположить, что снижение энзиматической активности ряда ферментов пуринового метаболизма, в том числе и АДА, может быть обусловлено как гиперпродукцией антител (АТ) к этим ферментам, так и влиянием метаболических нарушений.

Определение антител к АДА и выяснение их влияния на активность этого фермента у больных РА как с позиций диагностики активности и формы патологического процесса, изучения отдельных звеньев патогенеза заболевания, так и возможности коррекции, контроля эффективности проводимой терапии представляет собой актуальную задачу.

Цель работы

Целью настоящего исследования является усовершенствование иммунологической диагностики, дифференциальной диагностики и объективизация контроля эффективности проводимой терапии у больных ревматоидным артритом путем исследования антителообразования к аденозиндезаминазе с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента.

Основные задачи исследования

1.  Получить иммобилизированную форму аденозиндезаминазы, изучить ее физико-химические свойства.

2.  Адаптировать иммуноферментный метод анализа с использованием аденозиндезаминазы к изучению образования антител к этому ферменту.

3.  Изучить содержание антител к аденозиндезаминазе и активность фермента в сыворотке крови больных ОА и здоровых людей в зависимости от пола и возраста.

4.  На основе иммуноанализа изучить содержание антител к аденозиндезаминазе и активность фермента в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности, стадии и характера течения заболевания.

5.  Изучить динамику антителообразования к аденозиндезаминазе у больных РА в процессе стационарного лечения; оценить возможность использования антител к аденозиндезаминазе в качестве объективных критериев эффективности проводимой терапии.

Научная новизна работы

Впервые для иммунодиагностики РА разработан и применен в предложенном варианте иммуноферментного анализа метод с использованием иммобилизированной формы аденозиндезаминазы, подобраны оптимальные условия его постановки. В сыворотках крови больных РА обнаружены антитела к аденозиндезаминазе. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных АТ в сыворотке крови здоровых лиц и больных остеоартрозом.

Выявлено, что концентрация антител к АДА у больных РА коррелирует с активностью патологического процесса, а наличие висцеральных проявлений сопровождается максимальными значениями исследуемых АТ. Динамика уровней АТ к АДА позволяет прогнозировать клиническое течение РА и судить об эффективности проводимой терапии.

Практическая ценность

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к АДА на основе иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента. Выявление антител к АДА в предложенной модификации ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста в комплексной диагностике РА для характеристики активности патологического процесса, особенно на ранних стадиях заболевания, и прогнозирования клинических форм РА. Определение антител к аденозиндезаминазе в динамике дает возможность судить об эффективности и адекватности проводимой терапии.

Основные положения, выносимые на защиту

На защиту выносится положение о возможности использования определения антител к АДА иммуноферментным методом с помощью иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента в качестве дополнительного теста для диагностики степени активности, характера течения, формы, серологического варианта РА, оценки эффективности проводимой терапии.

Внедрение в практику

Методы определения антител к аденозиндезаминазе у больных РА иммуноферментным методом с помощью иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда, государственного учреждения здравоохранения «Волгоградский областной клинический госпиталь ветеранов войн», муниципального учреждения здравоохранения «Городская больница №1 им. » г. Волжского.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, из которых 3 – в центральной, 2 – в местной, 1 – в зарубежной печати.

Апробация работы

Основные положения диссертации были представлены на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета (2005, 2006 гг.), научных конференциях ГУ НИИ КиЭР РАМН (2005, 2006 гг.), на IV Съезде ревматологов России (Казань, 2005), на симпозиуме EULAR (Амстердам, Нидерланды, 2006 г.), Российском медицинском форуме – 2006 «Фундаментальная наука и практика» (Москва, 2006 г.), I Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2006).