Стандартизация лекарственных средств (стр. 5 )

,

где: А - оптическая плотность испытуемого раствора;

С - концентрация рабочего стандартного раствора, в процентах;

d - толщина слоя, см.

С целью проверки подчиненности закону Ламберта - Бугера -Бера приготовили серию из 7 эталонных растворов рибофлавина с интервалом концентраций 0,005 - 0,0035%. Предварительный расчет концентраций для диапазона оптических плотностей 0,2 - 1 ,0 показал, что минимальная (Сmin = 0,2/286,5) составляет 0,0007%, а максимальная (Сmax = 1,0/286,5) - 0,0035%. Для приготовленной серии эталонных растворов проводили измерения оптических плотностей в трех повторностях, результаты которых приведены в табл. 2.1

Таблица 2.1

Оптические плотности эталонных растворов

Концентрация, %	Объем стандартного раствора, мл	Общий объем, мл	Оптическая плотность, измерения
1	2	3	Среднее
0,0005	0,25	10	0,163	0,165	0,167	0,165
0,0010	0,50	10	0,293	0,294	0,292	0,293
0,0015	0,75	10	0,425	0,426	0,426	0,426
0,0020	1,00	10	0,573	0,573	0,573	0,573
0,0025	1,25	10	0,691	0,693	0,692	0,692
0,0030	1,50	10	0,793	0,794	0,794	0,794
0,0035	1,75	10	0,946	0,950	0,948	0,948

2. Расчет параметров линейной зависимости и статистическая оценка.

Расчет метрологических характеристик линейной зависимости проводился по результатам аналитической информации, приведенной в табл. 3.1

Таблица 3.1

Параметры линейной зависимости

№	С	D	С2	C·D	D2	Dp	Dp-Dn	(Dp-Dn)
1	0,0005	0,165	2,5·10-7	8,25·10-5	0,0272	0,169	0,004	1,6·10-5
2	0,0010	0,293	10·10-7	29,3·10-5	0,0858	0,298	0,005	2,5·10°-5
3	0,0015	0,426	22,5·10-7	63,9·10-5	0,1815	0,428	0,002	0,40·10-5
4	0,0020	0,573	40·10-7	114,6·10-5	0,3283	0,557	0,016	25,6·10-5
5	0,0025	0,692	62,5·10-7	173·10-5	0,4789	0,686	0,006	3,6·10-5
6	0,0030	0,794	90·10-7	238·10-3	0,6304	0,815	0,021	44,1·10-5
7	0,0035	0,948	122·10-7	331,8·10-3	0,8987	0,944	0,004	1,6·10-5
Σ	0,014	3,891	3,5·10-5	0,00959	2,6308	-	-	0,000794

Коэффициент корреляции (r), вычисленный по уравнению:

позволяет сделать заключение о жесткости изучаемой линейной зависимости между концентрациями и величинами оптических плотностей растворов рибофлавина.

Угловой коэффициент (b) и свободный член (а) линейной зависимости, вычисленные по уравнениям:

использовали для расчетов исправленных значений оптических плотностей (Dр) по формуле:

Dр =Cb + a, или: Dр =Cх 258,4 + 0,039.

Рассчитанные величины заносили в табл. 3.1 и на основании вновь полученных данных строили график (рис.2) линейной зависимости оптических плотностей (Dp) от концентраций (Сn).

Рис. 2. График линейной зависимости оптической плотности от концентрации раствора рибофлавина.

2. Формулирование и апробация методики количественного анализа лекарственной формы.

Для фотометрирования готовили растворы рибофлавина 0,002% концентрации в расчете на то, что наименьшее отклонение оптических плотностей от истинных значений обычно наблюдается в окрестностях центра графика. Для этого лекарственную форму «раствор рибофлавина 0,01%» следует разбавить в 5 раз (0,01/0,002 = 5). При использовании кюветы с толщиной слоя 1см следует приготовить не менее 10 мл фотометрируемого раствора.

Итак, рабочая методика количественного анализа рибофлавина для лекарственной формы «Раствор рибофлавина 0,01%» формулируется следующим образом: к 2 мл (пипетка ГОСТ 20922 - 74; 2 мл) лекарственной формы добавили 8 мл (пипетка ГОСТ тот же, 10 мл) воды очищенной. Перемешали. Полученный раствор фотометрировали при тех же условиях (светофильтр с длиной волны 440 нм, толщина слоя кюветы 1 см). Готовили три раствора рибофлавина для фотометрирования. Результаты испытаний приведены в табл. 4. Расчет содержания рибофлавина (х) в лекарственной форме в граммах проводили по формуле:

D - оптическая плотность;

-удельный показатель поглощения;

а - объем лекарственной формы, взятый на анализ;

l - толщина слоя кюветы, см;

V - объем фотометрируемого раствора, мл;

100 - пересчет в граммы. Результаты расчетов приведены в табл. 4.

Таблица 4.

Аналитические данные

количественного определения рибофлавина

№ опыта	Оптическая плотность	Содержание рибофлавина, г
1	0,579	0,000988
2	0,578	0,000986
3	0,579	0,000988

Статистическая обработка результатов эксперимента

Определение среднего значения ():

Определение стандартного отклонения (S):

Определение доверительного интервала () при доверительной вероятности 95%:

Определение ошибки метода (%):

Полученная величина содержания рибофлавина укладывается в допустимые пределы отклонений (согласно инструкции по оценке качества лекарств от 16.10.97 , приказ МЗ РФ № 000), что составляет ± 20% , т. е. 0,008 - 0,012 г. Окончательная формулировка методики анализа приводится в проекте ФСП 42-2-01 в соответствии с ОСТ 91500.001-00.

Разработчик, студент ______ группы

Фамилия, имя, отчество (подпись).

Вопросы, задания, упражнения для самоконтроля.

1.  Дайте сравнительную характеристику гравиметрическим, титриметрическим и фотометрическим методам анализа по следующим критериям: чувствительность, достоверность, специфичность.

2.  Почему для этинилэстрадиола не предусмотрено количественное определение (ФС 36, ГФ X, с. 74)?

3.  Почему фотометрические методы применяются в основном для количественного определения лекарственных форм, а не для лекарственных субстанций?

4.  Какие из оптических методов анализа относятся к абсорбционным (по характеру взаимодействия с лучистой энергией):

а) люминисцентный;

б) турбидиметрический;

в) фотоколориметрический;

г) флуориметрический;

д) нефелометрический;

е) спектрофотометрический.

5.  Что понимают под оптической плотностью? Зависит ли она от концентрации анализируемого вещества?

6.  Что понимают под УФ - спектром вещества?

7.  От чего зависит величина удельного показателя поглощения?