Фармакогнозия (стр. 9 )

В качестве подвижной фазы используют систему 95%-ный этиловый спирт — бензол— хлороформ — формамид (10:30:59:1). Систему помещают в делительную воронку и взбалтывают 10 мин, затем отстаивают 10 мин. Заливают в камеру так, чтобы верхний слой формамида не попал в камеру. Насыщение камеры идет 20—25 мин. Для лучшего насыщения камеры стенки выкладываются фильтровальной бумагой. Снаружи камера должна быть закрыта черной бумагой. Систему необходимо менять при последующем хроматографировании.

1.  Приготовление ксантгидролового реактива.

10 мг ксантгидрола растворяют в 99 мл ледяной уксусной кислоты и добавляют 1 мл концентрированной НС1.

2. 25%-ный раствор трихлоруксусной кислоты с добавлением 0,2 % хлорамина Τ — готовится непосредственно перед проявлением.

3. Проведение реакции Легаля.

Готовятся ≪ex tempore≫ 2 раствора: 1—5%-ный раствор нитропруссида натрия (готовится в мерной колбе) и 2 — 10%-ный раствор едкого натра (водный). В выпарительной чашке

3—4 капли извлечения упаривают досуха, растворяют в 0,5 мл 100%-ного метилового спирта. Растворенный сухой остаток вливают в пробирку и добавляют 1—2 капли реактива 1, затем осторожно по стенке добавляют 1—2 капли реактива 2 и, не взбалтывая, смотрят. Если есть сердечные гликозиды, то на границе 2 растворов появляется красное окрашивание в виде кольца.

4. Построение калибровочного графика.

Калибровочный график строится по стандартному раствору ланатозида С (целанида). 25 мг целанида растворяют в 25 мл смеси метиловый спирт — хлороформ (1:1) в мерной колбе. Наносят на хроматографическую пластинку в количестве от 0,01 до 0,08 мл раствора, а далее поступают как с испытуемым извлечением.

Реактивы и оборудование: метиловый спирт (метанол); четыреххлористый углерод; изопропиловый спирт (изопропанол); хлороформ; ацетон; формамид; Na2SO4 (безводн.); тальк; этиловый спирт (этанол); ксантгидрол; трихлоруксусная кислота; хлорамин Т; НС1 (конц.); уксусная кислота (лед.); бензол; NaOH 10%-ный; нитропруссид натрия 5%-ный; абицина раствор в смеси метиловый спирт — хлороформ (1:1). Склянки темного стекла с притертой пробкой вместимостью 100 мл; воронки Бюхнера; колбы Бунзена; колба с нормальным шлифом вместимостью 50 мл; воронка делительная вместимостью 200 мл; цилиндры мерные на 50 и 10 мл; колбы плоскодонные вместимостью 25, 100 и 250 мл; колбы мерные вместимостью 25 мл; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пикнометр вместимостью 3 мл; микропипетка измерительная вместимостью 0,1 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X 18 см; пробирки стеклянные; холодильник стеклянный лабораторный с нормальным шлифом; бюретка с притертым краном вместимостью 25 мл; камера хроматографическая для ТСХ; пульверизатор; игла препаровальная, фильтры бумажные; штативы лабораторные.

Задание 9. Количественное определение сердечных гликозидов в траве горицвета (Стандартизация ГФ ХI, cт. 43, стр. 300)

Запишите в лабораторный журнал схему методики количественного определения сердечных гликозидов в растительном сырье и дайте теоретическое обоснование каждому этапу работы.

Методика количественного проведения эксперимента биологическим методом.

Активность травы горицвета определяют биологическим методом на лягушках или кошках <*> по сравнению с Государственным стандартным образцом (ГСО) цимарина.

--------------------------------

<*> См. с. 163 (ГФ ХI).

Испытание на лягушках. Испытание проводят на травяных лягушках, вводя растворы в лимфатические бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка), либо на водяных, вводя растворы в сердце (в полость желудочка) или в вену.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, и сушат в сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 40-60 град. С.

Извлечение из травы горицвета готовят в зависимости от способа введения.

Для подкожного введения 5 г измельченного и высушенного сырья экстрагируют 110 мл 95% спирта в аппарате Сокслета в течение 6-8 ч.

Извлечение собирают в цилиндр вместимостью 100 мл и доводят объем 95% спиртом до метки (1:20).

Для внутрисердечного и внутривенного введения 5 г измельченного и высушенного сырья помещают в колбу с притертой пробкой вместимостью 500 мл, прибавляют 110 мл 75% спирта (по объему) и оставляют на сутки. Затем к колбе присоединяют обратный холодильник, помещают колбу на кипящую водяную баню и экстрагируют в течение 1 ч. Извлечение охлаждают, фильтруют в цилиндр вместимостью 100 мл через четырехслойный фильтр из марли и доводят объем 75% спиртом до метки (1:20). Извлечение пригодно в течение 2 суток со дня приготовления.

Стандартный и испытуемый образцы готовят в день опыта.

К 2 мл раствора ГСО цимарина 1:3333 прибавляют 6 мл воды (1:4).

20 мл спиртового извлечения (1:20) травы горицвета выпаривают на кипящей водяной бане до 2 мл и доводят объем водой до 20 мл. Образующуюся при этом муть или осадок не отфильтровывают, а прибавляют 1-2 капли 5% раствора натрия гидрокарбоната. Полученное таким путем спиртоводное извлечение (1:20) испытывают на лягушках.

Определив наименьшие дозы стандартного и испытуемого образцов, вызывающие систолическую остановку сердца у большинства лягушек (в миллилитрах на массу травяной лягушки или в миллилитрах на 1 г массы водяной лягушки), вычисляют содержание ЛЕД в 1 г травы горицвета.

Испытание на кошках. Из измельченной и высушенной травы горицвета готовят настой в соотношении 1,5:200. Для этого 1,5 г травы горицвета помещают в инфундирный аппарат, обливают 200 мл кипящей воды и настаивают в течение 25 мин на водяной бане при 90 град. С и частом взбалтывании. Затем настой охлаждают, фильтруют, к фильтрату прибавляют 1,8 г натрия хлорида и доводят объем настоя водой до 200 мл.

ГСО цимарина разводят в день опыта 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:100000.

Устанавливают смертельную дозу настоя в миллилитрах на 1 кг массы кошки (для каждого животного в отдельности) и рассчитывают активность травы горицвета в сравнении с ГСО цимарина или вычисляют содержание КЕД в 1 г травы <*>.

--------------------------------

<*> См. с. 169 (ГФ ХI).

Задание 10. Количественное определение сердечных гликозидов в траве, листьях и цветках ландыша (Стандартизация ГФ ХI, cт. 49, стр. 314)

Запишите в лабораторный журнал схему методики количественного определения сердечных гликозидов в растительном сырье и дайте теоретическое обоснование каждому этапу работы.

Методика количественного проведения эксперимента биологическим методом.

Активность цветков, травы и листьев ландыша определяют биологическим методом на лягушках или кошках <*> по сравнению с Государственным стандартным образцом (ГСО) экстракта ландыша.

--------------------------------

<*> См. с. 163 (ГФ ХI).

Испытание на лягушках. Испытание проводят на травяных лягушках, вводя растворы в лимфатические бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка), или на водяных, вводя растворы в лимфатические бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка), или в вену.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, и сушат в сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 40-60 С0; 5 г измельченного и высушенного сырья экстрагируют 110 мл 95% спирта в аппарате Сокслета в течение 6-8 ч. Извлечение собирают в цилиндр вместимостью 100 мл и доводят объем 95% спиртом до метки (1:20).

Стандартный и испытуемый образцы готовят в день опыта.

Для подкожного введения к 2 мл стандартного образца экстракта ландыша прибавляют 6 мл воды (1:4).

Для внутрисердечного или внутривенного введения к 2 мл стандартного образца экстракта ландыша прибавляют 2 мл воды, выпаривают на кипящей водяной бане до 2 мл и доводят объем водой до 8 мл.

Спиртовое извлечение (1:20) переводят в спиртоводное в соотношении 1:30 (листья), 1:40 (трава), 1:60 (цветки). Для этого 20 мл спиртового извлечения (1:20) выпаривают на кипящей водяной бане до 2 мл и доводят объем водой до 30 мл (листья), 40 мл (трава) или 60 мл (цветки). Образующуюся при этом муть или осадок не отфильтровывают, а прибавляют 1-2 капли 5% раствора натрия гидрокарбоната. Полученное таким путем спиртоводное извлечение (1:20) испытывают на лягушках.

Определив наименьшие дозы стандартного и испытуемого образцов, вызывающие систолическую остановку сердца у большинства лягушек (в мл на массу травяной лягушки или в мл на 1 г массы водяной лягушки), вычисляют содержание ЛЕД в 1 г сырья ландыша.

Испытание на кошках. Из измельченного и высушенного сырья ландыша готовят настой в соотношении 1:250 (листья), 1:300 (трава) и 1:500 (цветки). Для этого 1 г сырья помещают в инфундирный аппарат, обливают 250 мл (листья) или 300 мл (трава), или 500 мл (цветки) кипящей воды и настаивают в течение 25 мин при 90 град. С и частом взбалтывании. Затем настой охлаждают, фильтруют, к фильтрату прибавляют 2,25 г (листья) или 2,7 г (трава), или 4,5 г (цветки) натрия хлорида и доводят объем настоя водой до 250 мл (листья) или 300 мл (трава), или 500 мл (цветки).

Стандартный образец экстракта ландыша разводят в день опыта 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:35.

Устанавливают смертельную дозу настоя в миллилитрах на 1 кг массы кошки (для каждого животного в отдельности) и рассчитывают активность настоя в сравнении со стандартным образцом экстракта ландыша или вычисляют содержание КЕД в 1 г сырья <*>.

--------------------------------

<*> См. с. 169 (ГФ ХI).

Методика количественного определения главных сердечных гликозидов в листьях ландыша (Folium Convallariae) хроматографическим методом.

Методика основана на хроматографическом разделении и последующем спектрофотометрическом определении сердечных гликозидов. В круглодонную колбу вместимостью 250 мл, снабженную обратным холодильником, помещают 50 мл 70%-ного этилового спирта и нагревают до кипения. Затем быстро вносят 5 г измельченных (сито с диаметром отверстий 3 мм) сухих листьев ландыша и кипятят 30 мин.