. Репликация генома (стр. 9 )

На N-конце ДНК-полимеразы a расположен домен (остатки 1-330), не существенный для полимеразной активности и сборки гетеротетрамерного комплекса. Этот домен может участвовать во взаимодействиях с другими белками и ассоциируется, например, с большим Т-антигеном вируса SV40. Взаимодействие Pola со связывающим онДНК белком RP-A (см. 2.2) стабилизирует связывание Pola с 3’-концом затравки РНК и повышает процессивность и точность синтеза ДНК. С-концевой домен (остатки 1300-1465) не нужен для каталитической активности, но участвует во взаимодействиях с праймазными субъединицами. В нем находится мотив цинковых пальцев, связывающий Zn2+.

Вторая по величине субъединица В (р86 у дрожжей и р68 у млекопитающих) комплекса Pola-праймаза не обладает какой-либо ферментативной активностью, но играет важную роль формировании и поддержании структуры всего гетеротетрамерного комплекса. Ген POL12, кодирующий эту субъединицу у дрожжей, абсолютно необходим для жизнеспособности клеток. Более того, субъединица В требуется для каталитической активности Pola. Известно также, что субъединица В может стимулировать экспрессию субъединицы А. Кроме того, субъединица В фосфорилируется циклин-зависимыми протеинкиназами на стадии митоза во время клеточного цикла. Эта модификация может играть регуляторную роль, например, ингибировать активность Pola при инициации репликации.

У млекопитающих субъединица р68 непосредственно контактирует с праймазным гетеродимером р55/p48, в котором субъединица р55 ассоциируется также с субъединицей р180. Праймазный субкомплекс р55/p48 может самостоятельно транслоцироваться в ядро, благодаря наличию сигнала ядерной локализации NLS у субъединицы р55. Субъединица А также имеет последовательность NLS (на N-конце у дрожжей и на С-конце млекопитающих). Тем не менее, при экспрессии порознь белки р180 и р68 остаются в цитоплазме. Для их ядерной транслокации требуется взаимодействие друг с другом. Вероятно, гетеродимер р180/р68 собирается в цитоплазме, транслоцируется в ядро и там соединяется с праймазным гетеродимером р55/p48 с образованием тетрамерного комплекса Pola-праймаза.

1.3.2. ДНК-полимераза b

ДНК-полимераза b (Polb) млекопитающих является самой маленькой из известных эукариотических ДНК-полимераз и относится к семейству Х, к которому принадлежит, например, и терминальная нуклеотидилтрансфераза. Polb имеет длину 335 остатков (мол. масса 39 кД) и состоит из двух доменов, соединенных чувствительным к протеазам линкером. Короткий N-концевой домен (8 кД) может связываться с онДНК и с 5’-концом нити ДНК в ОР или однонитевой бреши. Этот домен обладает 5’-дезоксирибозофосфатазной активностью, т. е. способен удалять с 5’-конца нити ДНК остатки 5’-дезоксирибозофосфата (без присоединенного к сахару основания) или 5’-дезоксирибонуклеотидфосфата. Эта реакция идет по механизму b-элиминации, а не гидролиза. На промежуточной стадии отщепляемый 5’-дезоксирибозофосфат ковалентно связывается с остатком лизина в домене 8 кД.