Из отобранной из нескольких кранов воды по 1 литру (не менее чем из трех источников) готовят среднюю пробу в количестве 300 мл. От нее стерильной пипеткой берут 1 мл раствора и совершают пересев на среду (рис. 1).
Рис 1. Схема посева микроорганизмов исследуемого объекта по методу счета колоний
|
Этой же пипеткой берут еще 1 мл смывного раствора и переносят его в первую пробирку с 9 мл физиологического раствора - получают первое разведение. Эту пипетку нельзя вносить в раствор, находящийся в пробирке и дотрагиваться до ее стенок. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают.
После этого второй стерильной пипеткой берут по 1 мл раствора из первого разведения и вносят его сначала во вторую чашку Петри, а затем во вторую пробирку с 9-ю мл стерильного физиологического раствора и получают второе разведение. Аналогичным образом получают третье и если нужно четвертое разведение, проводя параллельные посевы на чашки Петри (рис.1).
В каждую чашки Петри приоткрыв ее крышку (полностью открывать крышку нельзя) наливают расплавленный и остуженный до 45-50 градусов С мясо-пептонный агар так, чтобы он почти покрывал дно чашки. После этого чашки сразу же закрывают и тщательно перемешивают, чтобы пробы равномерно распределились во всем объеме питательной среды. Перемешивать надо осторожно, легкими вращательными движениями закрытой чашки, чтобы агар не попал на края чашки и ее крышку. Долго вращать чашки нельзя, т. к. агар может застыть комками. Затем чашки поставить на горизонтальную поверхность до застудневания питательной среды.
После желирования питательной среды, чашки переворачивают верх дном и в таком положении ставят в термостат, предварительно проверив наличие на них номера. Термостатирование проводят при температуре 36 ± 1 градусов С в течение 24 часов.
Подсчет выросших колоний.
|
,
где N - общее количество микроорганизмов в чашке Петри;
А, В и С - количество микроорганизмов выросших на каждом из сегментов на которых ведут подсчет;
8 - количество сегментов, на которые разделена чашка Петри;
3 - число сегментов, на которых ведут подсчет микроорганизмов.
Подсчет выросших колоний ведут на всех чашках Петри.
Результаты необходимо отразить в лабораторном отчете.
Вопросы для внеаудиторной самостоятельной
подготовки:
1. Требования к питьевой воде, используемой на предприятиях молочной промышленности.
2. Где используется техническая вода?
3. Микробиологический состав воды.
4. Продолжительность выживания микроорганизмов в воде.
5. Методы контроля качества воды
Занятие №7
Санитарный контроль инвентаря и рук рабочих
На предприятиях молочной промышленности большое внимание уделяется соблюдению личной гигиены сотрудников и обработке помещений и инвентаря.
|
Руки моют с мылом теплой водой до локтевого сгиба дважды: первый раз с помощью щетки, которой тщательно с большим количеством мыльной пены оттирают ладони и тыльную часть, обращая особое внимание на подногтевые пространства, второй раз-без применения щетки. Лучше при этом использовать жидкое мыло или специальные моющие препараты, к которым относится средство «Вега».
«Вега» представляет собой смесь катионных и неионогенных поверхностно-активных веществ и бентонитовых глин. Она не токсична, негорюча, содержит 25% ПАВ, 10% катамина АБ, 10% моноэтаноламидов, 5% окиси алкилдиметиламина, 14% бентонитовых глин, 6% глицерина, 0,3% отдушки и воду.
Для обеззараживания рук применяют дезинфицирующий раствор с содержанием активного хлора 100 мг/л. Для сушки рук применяют электросушители, индивидуальные полотенца или бумажные салфетки. Чистоту рук на предприятиях проверяют йодкрахмальной пробой (сине-бурый цвет после воздействия дезинфицирующего средства). Смывы с рук проверяет микробиолог один раз в декаду.
Для определения общей обсемененности рук используют среды Кесслера, Хейфица, МПА, КМАФАнМ.
Наиболее быстрым способом определения БГКП является следующий: из пробы стерильной пипеткой набирают 1 мл смыва и переносят его в пробирку со средой Хейфица. После чего термостатируют 24 часа при температуре 37 градусов С. При наличии кишечной палочки цвет среды изменяется с красно-фиолетового на желто-зеленый.
Задание 1. Провести микробиологический контроль смывов с рук на среде КМАФАнМ.
Методика проведения анализа.
|
Обработайте тампонами свои руки согласно вышеуказанной последовательности. Перемешайте содержимое колбы.
Отберите стерильной пипеткой 1 мл раствора и совершите пересев на среду КМАФАнМ согласно рис.1. на стр. 25 данных методических указаний.
Количество микроорганизмов на единице площади (МАФАнМ, КОЕ/кв. см) исследуемого объекта вычисляется по формуле:
,
где К - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов на единице площади объекта, КОЕ/кв. см;
а - количество микроорганизмов выросших на чашке Петри, КОЕ;
б - разведение, по посеву из которого велся подсчет микроорганизмов, выросших на чашке Петри;
с - объем смывной воды, мл;
d - площадь смыва, кв. см.
Определение обсемененности объекта вычисляют по каждой чашке Петри отдельно. Затем рассчитывают величину его средней обсемененности.
Задание 2. Провести микробиологический контроль смывов с рабочих столов.
Методика выполнения задания.
|
Трафарет и пинцет обжигают в пламени спиртовки и охлаждают на воздухе, не допуская попадания на них микроорганизмов. Охлажденный трафарет прикладывают к определенному участку поверхности, ограничивая тем самым участок смыва. Охлажденным пинцетом берут стерильный ватный тампон и вносят в колбу со стерильным физиологическим раствором (пробку, которой была закрыта колба, на стол не класть!). Тампон слегка смачивают, так чтобы жидкость с него не стекала, достают из колбы (колбу после этого сразу же закрывают пробкой) и тщательно протирают ограниченную трафаретом площадь, плотно прижимая трафарет к поверхности, чтобы он на ней не перемещался. После чего тампон переносят в колбу с физиологическим раствором.
Пинцетом (больше его не обжигать) берут второй ватный тампон, вытирают им смоченную поверхность и помещают его в туже колбу. Аналогичным образом делают смывы еще с трех выбранных участков поверхности. Все тампоны помещают в одну и туже колбу. После этого содержимое колбы перемешивается в течение не менее чем 5 мин, чтобы микроорганизмы смылись с ваты и равномерно распределились в физиологическом растворе. При перемешивании надо следить за тем, чтобы жидкость с микроорганизмами не попала на пробку. (При анализе мелких предметов (ножей, стаканов и т. д.) смыв проводят со всей их поверхности). Далее из колбы делается посев и подсчет колоний (методика описана в задании 1) данной работы. Посевы выдерживают в течение 72 часов при температуре 30оС.
Задание 3. Провести анализ посевов и идентифицирование выросших колоний (после инкубации и появления колоний).
Методика выполнения.
|
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 |
Основные порталы (построено редакторами)