Морфофункциональное обоснование применения пробиотиков при субклиническом мастите у коров (стр. 3 )

При осмотре молочной железы определяли состояние кожных покровов, форму вымени, степень развития долей, величину и форму симметричных долей вымени, величину и расположение сосков.

Пальпацией определяли наличие болезненности, местную температуру на симметричных участках молочной железы, консистенцию органа до и после доения. При пальпации надвымянных лимфоузлов учитывали их величину, подвижность, консистенцию, болевую чувствительность.

Суклинический мастит у лактирующих коров диагностировали с помощью мастидинового и KerbaTest, лопаток для мастит-теста (проба Шальма). С целью исключения диагностических ошибок не исследовали молоко коров первые 4 дня лактации и в период запуска. Раздражение вымени исключали путём повторного исследования секрета через 3 дня после предыдущего исследования.

Субклинический мастит в период сухостоя диагностировали с помощью 5,0% мастидинового теста. В сухостойный период обследование животных и молочной железы проводили на 10-15 день от начала сухостоя и за 10-15 дней до предполагаемого отела (при переводе их в родильное отделение). Для выявления клинических признаков заболевания проводили пробное сдаивание. О наличии или отсутствии мастита судили по объему выделяемого секрета и его внешнему виду.

С целью изучения возможности применения пробиотиков на основе Bacillus amyloliquefaciens (Ветом-2, Ветом-3, Ветом-4) для лечения коров, больных субклиническим маститом в период сухостоя, проведено несколько серий опытов. При этом определялась оптимальная доза более эффективного испытуемых пробиотиков на основе Bacillus amyloliquefaciens на 30 коровах, больных субклиническим маститом, исходя из того, что в 1,0 г сухого препарата содержится 1Ч106 КОЕ (колониеобразующих единиц) живых микробных клеток штамма бактерий  Bacillus amyloliquefaciens. Доза препарата смешивалась с 5,0 мл теплым стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. Препарат вводился однократно интрацистернально с соблюдением правил асептики с помощью одноразового шприца. Результаты учитывались через семь суток после назначения препарата.

Для изучения действия пробиотиков на основе Bacillus amyloliquefaciens на состав микрофлоры кишечника телят в норме и при диспепсии провели опыты на здоровых и больных телятах. Животные первой группы служили контролем, здоровым животным второй группы и больным животным третьей группы выпаивали молоко, от коров прошедших лечение пробиотиками на основе Bacillus amyloliquefaciens. Действие препарата на состав микрофлоры кишечника телят контролировали с помощью общепринятых в микробиологии методик определения морфологических и культуральных свойств микроорганизмов.

На заключительном этапе исследований сопоставляли терапевтическую эффективность пробиотиков при субклинических маститах и послеродовых эндометритах у новотельных коров в сравнении с традиционно применяемыми схемами лечения в хозяйствах, провели производственную апробацию способа лечения коров при сочетанной патологии с применением пробиотиков.

Гематологические исследования проведены по общепринятым методам, а биохимические – в соответствии с «Методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях» [1981].

Количественное содержание соматических клеток в 1,0 мл секрета определяли по методу Прескотта-Брида [, 1991], морфологический состав молока - по методике , [1971].

Материалом для морфологических исследований молочной железы служили образцы (0,05-1,0 см3) срединной части органа от 3 здоровых, 5 больных клиническим и 4 субклиническим маститом коров. Кроме того, для проведения морфологических исследований образцы молочной железы и эндометрия были отобраны у 7 коров, убитых в период пика у них послеродового эндометрита и субклинического мастита и образцы молочных желез от 5 лактирующих коров, убитых на убойных пунктах по производственной необходимости.

Материал для световой микроскопии фиксировали в 10,0% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, обезвоживали в спиртах, хлороформе, заливали в парафин, готовили срезы на микротоме МПС-2 толщиной 5-7 мкм, депарафинировали и окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизон и толлуидиновым синим.

Приготовление гистопрепаратов, исследование гистоструктуры молочной железы и лимфатических узлов, морфометрия их структур, статистическая обработка полученных данных и их корреляционный анализ проводились в соответствии методического пособия «Методы морфологических исследований» [ с соавт., 2012].

Ультраструктурные исследования осуществлялись на базе лаборатории электронной микроскопии НИИ нейрокибернетики им. Академии биологии и биотехнологии Южного федерального университета (г. Ростов-на-Дону). Ультратонкие срезы толщиной 50 нм изготавливались на ультрамикротоме Ultracut-E (Leica, Германия) с использованием алмазного ножа Diamont (Швейцария), контрастировались уранилацетатом и цитратом свинца и просматривались в трансмиссионном электронном микроскопе Jem 1011 (Jeol, Япония).

Цифровой материал обработан с использованием методов вариационной статистики [, 1980], при помощи программы «Microsoft Office Excel» на персональных компьютерах Intel Celeron D и компьютере АМВ Athlon(tm) ХР 1800+ в операционной среде Windows XR Profess.

2. Результаты исследований

2.1 Морфология молочной железы и клеточный состав молока у здоровых коров в период лактации

У лактирующих коров железистая ткань вымени представляла систему многократно ветвящихся трубчатых альвеол, внутридольковых выводных протоков и связывающей их внутридольковой соединительной ткани. Паренхима молочной железы была неоднородной и состояла из крупных, средних и мелких альвеол, диаметр которых варьировал от 90,2 до 198,8 мкм. Альвеолы на 50,0-70,0% были заполнены секретом. Стенка альвеол была выстлана плоским, кубическим и цилиндрическим эпителием. Высота клеток в среднем составляла 6,2 ± 0,3 мкм, ширина - 8,2 ± 0,3 мкм.

В альвеолах, содержащих незначительное количество секрета, лактоциты преимущественно имели кубическую форму. Они имели одинаковую высоту и ширину в пределах 8,9 ± 0,2 мкм, а ядро – овальную форму.

В целом молочная железа у лактирующих коров характеризовалась развитой железистой тканью, а структура долек была неоднородной, так как отражала различную степень функциональной активности молочной железы. Размеры и формы секреторных клеток находились в прямой зависимости от активности и стадии секреторного цикла (Рисунок 1).

а)	б)	в)	г)	д)

Рис. 1. Структурная организация молочной железы у коров в период лактации:

а) неоднородная трубчато-альвеолярная структура; б) альвеолы с умеренным содержанием секрета; в) переполненные альвеолы с высокими эпителиями; г) гиперемия межальвеолярной стенки с миоэпителиями; д) секретирующие альвеолы с лимфоидно-клеточными инфильтратами.

В ультраструктурной организации молочной железы у коров в период лактации наблюдались эпителиальные и стромальные клетки в различных функциональных состояниях (Рисунок 2).

а)	б)	в)	г)	д)

Рис. 2. Ультраструктура клеток молочной железы у коров в период лактации:

а) секретирующие лактоциты с различными ядрами; б) кровеносный капилляр с эритроцитом в стенке альвеолы; в) секреторные гранулы в цитоплазме клеток; г) плазматическая клетка с развитой ГЭС; д) выраженные контакты клеток с десмосомами.

У здоровых лактирующих коров количественное содержание соматических клеток в 1,0 мл секрета молочной железы определялось по методу Прескотта-Брида (, 1991), морфологический состав молока - по методике , (1971). Окраска мазков молока проводилась по Паппенгейму в модификации .

В секрете молочной железы, полученном от здоровых коров, содержание соматических клеток в 1,0 мл варьировало от 182 тыс. до 277 тыс., при этом преобладали малые эпителиальные клетки (58,0%) и лимфоциты (38,70%). Фагоциты отсутствовали.

За период наблюдения произошло снижение содержания средних эпителиальных клеток и повышение нейтрофилов с 22,50 до 42,0%. Повысилось (Р<0,05) относительное содержание разных клеток. На протяжении опыта содержание лимфоцитов в секрете долей вымени оставалось на одном уровне. Эти изменения были недостоверны (Рисунок 3).

Рис. 3. Динамика клеточного состава секрета из долей вымени у здоровых коров в 1, 3, 5, 7 и 10 дни лактации.

2.2 Степень распространения субклинического мастита

у коров

Распространение субклинического мастита среди лактирующих коров выяснялось на протяжении 2007-2011г. С этой целью исследовано 4649 проб молока от 1172 коров, обследовано 1055 коров «Агротех-Гарант Березовский» и 117 - учхоза «Донское» в различные сезоны года на разных стадиях лактации.

Субклинический мастит был выявлен у 487 коров, что составило 41,50% к обследованному поголовью (Таблица 2). У них установлено заболевание 913 долей вымени (19,60%). В «Агротех-Гарант Березовский» заболевание отмечено у 42,0%, а в учхозе «Донское» - у 37,60% из числа обследованных коров. В первом хозяйстве выявили также большую частоту поражения долей вымени у обследованных коров (21,05 против 14,50%).