Выпускная квалификационная работа бакалавра Изменение биохимических показателей при инфекционном мононуклеозе, осложненного вирусом ЭБШТЕЙН-БАРРА (стр. 4 )

Расчет: результаты расчета в больших квадратах суммировались, и производилось вычисление количества в 1 мкл крови [Камышников, 2009].

2.2.6 Подсчет лейкоцитарной формулы

Подсчет лейкоцитарной формулы производился в окрашенных мазках периферической крови.

Приготовление мазка: чистым обезжиренным предметным стеклом прикасались к куполу капли крови на расстоянии 1,5 – 2 см от его края (стекло держат за ребра). Затем стекло клали на стол каплей вверх и вправо. Шлифовальное стекло с ровным краем и срезанными углами, прикладывали перед каплей под углом 45 градусов и делали небольшие движения вправо, влево, назад к капле с тем, чтобы она растеклась по ребру шлифовального стекла равномерно. Затем проводили ребром шлифовального стекла вдоль предметного стекла, чтобы капля тянулась за шлифовальным стеклом и кровь распределилась по нему равномерно.

После приготовления мазка крови производилась его фиксация и окрашивание. Фиксация мазка осуществлась метиловым спиртом (время фиксации три-пять минут) или смесью Никифорова (96-градусный этиловый спирт с эфиром 1:1) в течение десяти минут. Зафиксированные мазки вынимались из фиксатора и сушились на воздухе. Для окраски стекла укладывались мазками вверх параллельно на расположенные над четырехугольной кюветой стеклянные палочки, скрепленные, резиновыми трубками, строго горизонтально.

Окраска мазков по Романовскому – Гимзе: краска (имеющую в составе азур II, водорастворимый желтый эозин, метиловый спирт и глицерин) наливалась на мазки пипеткой. На окраску одного мазка нужно 3-4 мл краски. Продолжительность окраски происходила 30-40 минут. После этого мазки промывались водой и высушивались на воздухе в вертикальном положении.

Методика подсчета лейкоцитарной формулы: окрашенный мазок изучался под микроскопом. Лейкоциты располагались в мазке неравномерно: более тяжелые из них (эозинофилы, моноциты) встречались чаще по краю мазка, а более легкие (лимфоциты) – в середине. Поэтому подсчет производился следующим образом: половина клеток считалась в верхней части мазка, а половина в нижней. Счет производился по зигзагу: три-четыре поля вдоль мазка, три-четыре поля под прямым углом к середине мазка, затем три-четыре поля в сторону параллельно краю, вновь под прямым углом вверх и так далее по направлению к нижней части мазка.

Учитывались все виды лейкоцитов в рассматриваемых полях зрения раздельно. Подсчитывалось не менее двухсот клеток. Затем выводилось процентное содержание отдельных форм лейкоцитов от общего их числа пропорцией [Смолянинов, 2009; Бурмистов, 2005].

2.3 Статистическая обработка данных

Статистическая обработка полученных данных проводилась автоматически [medstatistic. ru] и с помощью программы Microsoft Office Excel 2007. Определялось среднее арифметическое (X). Достоверность различий (P) определяли при уровне значимости меньше или равно 0,05 (p ≤ 0,05).

Сравнивались данные внутри подгрупп и с контрольной группой.

Расчет t-критерия Стьюдента для 5% уровня значимости  показал, что полученная разница внутри подгрупп и при сравнении с контрольными значениями не везде является достоверной.

3 Изменение биохимических показателей при инфекционном мононуклеозе, осложненного вирусом Эбштейн-Барра

Исследование проведено на базе клинико-диагностической лаборатории. В исследование были включены 40 человек с Эбштейн-Барра вирусным мононуклеозом. Диагноз устанавливался на основании лабораторных методов исследования. Проводилось определение ряда биохимических показателей сыворотки крови (активности АЛТ, АСТ, уровня билирубина,  ЛДГ-5), общий анализ крови (лимфоциты, атипичные мононуклеары), а так же использовался экспресс-тест латекс агглютинации для выявления гетерофильных антител.

Данные показатели были выбраны, так как в клиническом анализе крови при мононуклеозе обнаруживается умеренный лейкоцитоз, значительное увеличение числа лимфоцитов, моноцитов и атипичных мононуклеаров (которые характерны только для ИМ). Общий анализ крови необходим в связи с существованием мононуклеозоподобного синдрома – комплекса клинических и гематологических признаков, свойственных инфекционному мононуклеозу и имеющихся при других инфекциях (ВИЧ, ЦМВИ, иерсиниоз, токсоплазмоз), а так же при лимфогранулематозе, лейкозе, ревматоидном артрите, СКВ. Что касается биохимического анализа крови, то при данной патологии  отмечается увеличение активности АСТ и АЛТ, повышение количества связанной фракции билирубина. Функциональные пробы печени могут нормализоваться к пятнадцатому-двадцатому дню болезни, но могут оставаться измененными в течение трех-шести месяцев.

3.1  Распределение контингента

Все больные были разделены на две группы по полу, их возраст колебался от 18 до 35 лет.

В первую группу вошло 22 мужчины, а во вторую группу – 18 женщин.

Таблица 2 – Характеристика контингента

40 человек	Контрольная группа
Мужчины – группа 1	Женщины – группа 2
22 чел.	18 чел.	10 чел.

Контрольную группу составили 10 человек, которые проходили плановое медицинское обследование.

3.2 Динамика изменения гематологических показателей

Основными проявлениями инфекционного  мононуклеоза служат изменения в периферической  крови, которые возникают в первые дни болезни  и  достигают максимума в ее разгар.

3.2.1 Лейкоциты

При исследовании в общем анализе крови в первый день в группах средний показатель лейкоцитов был повышен. Наибольшее его значения отмечается в группе женщин, и составляет 11,66 ± 1,56 109/л. В группе мужчин, на первый день, концентрация лейкоцитов в крови составила 11,44 ± 0,93109/л (рисунок 1).

На шестой день значения лейкоцитов в обеих группах достигают верхних границ нормы. Наибольшее значение лейкоцитов наблюдается в группе женщин, и составляет 9,75 ± 1,48 109/л (рисунок 1).

На двенадцатый день уровень лейкоцитов в группе мужчин и группе женщин находился в пределах референсных хначений.

Для инфекционного мононуклеоза характерен умеренный лейкоцитоз  9-10 10 ·109/л, иногда больше (Лобзин, 2000), что хорошо согласуется с полученными данными.

Рисунок 1 – Динамика изменения лейкоцитов

Таким образом, данный показатель лейкоцитов, который был получен при анализе крови в течение контрольных дней, согласуется с данными, приводящимися  (2000) и которые характерны для данной патологии.

3.2.2 Лимфоциты

Повышение лимфоцитов в крови можно объяснить тем, что лимфоциты, являясь главным элементом иммунной системы при попадании вируса, начинают активно функционировать. Главная функция лимфоцитов состоит в узнавании чужеродного антигена и участии  в адекватном иммунологическом ответе организма. Лимфоциты при инфекционном мононуклеозе приобретают морфологическое разнообразие.

В первый день средний показатель количества лимфоцитов в обеих группах был повышен. Наибольшее его значение наблюдается у мужчин и составляет 6,55 ± 0,71 109/л (рисунок 2). У женщин количество лейкоцитов в первый день составило 6,03 ± 1,11 109/л (рисунок 2).

На шестой день их число в группах уменьшилось. Наибольшее количество лимфоцитов было у мужчин – 5,63 ± 0,44 109/л, наименьшее у женщин –  5,49 ± 1,21 109/л (рисунок 2).

На двенадцатый день концентрация лимфоцитов в крови у обеих групп находится в пределах нормальных значений.

Рисунок 2 – Динамика изменения лимфоцитов

При инфекционном мононуклеозе характерно изменение лимфоцитов от 12 до 25 10 ·109/л [Венгеров, Ющук, 2009]. Однако полученные данные ниже приведенных, но выше нормальных значений.

Следовательно, исходя из показателей лимфоцитов, полученных при анализе крови в контрольные дни, за основу берется не теоретическое характерное изменение, а повышение их количества относительно их нормальных значений. Поэтому, можно считать, что полученные данные при практическом исследовании являются характерными для данного заболевания.

3.2.3 Моноциты

Возрастание содержания моноцитов в крови следует рассматривать как ответную защитную реакцию организма, отражающую увеличение функциональной активности особых клеток, участвующих в поглощении болезнетворных бактерий. Это очень активные клетки, присутствующие в периферической крови, лимфатических узлах, тканях селезенки, печени, костного мозга.

Моноцитоз обнаружился уже в первые дни заболевания болезни.

В первый день обеих группах было отмечено повышенное содержание в крови моноцитов. Наиболее высокие значения данного гематологического показателя наблюдаются в группе женщин – 1,43 ± 0,36 109/л, наименьшие у мужчин – 1,38 ± 0,16 109/л (рисунок 3).

На шестой день отмечается постепенное уменьшение моноцитов. Наибольшее количество моноцитов на шестой день было в группе мужчин и составило 1,11 ± 0,13 109/л. Наименьшее в группе женщин – 1,09 ± 0,2 109/л (рисунок 3).

На двенадцатый день наблюдается дальнейшее понижение числа моноцитов. Их значения находятся в верхних границах нормы.

Рисунок 3 – Динамика изменения моноцитов

Обычно, при мононуклеозе число моноцитов может увеличиваться более 1,00 10 ·109/л (Камышников, 2009), что согласуется с полученным результатами.

3.2.4 Атипичные мононуклеары

Самый характерный признак инфекционного мононуклеоза – это атипичне мононуклеары, которые появляются в разгар болезни и сохраняются две-три недели. В норме мононуклеары полностью отсутствуют в крови. Единственным заболеванием, при котором вироциты (мононуклеары) всегда будут обнаруживаться в крови, является инфекционный мононуклеоз.

В первый день в анализируемых группах были обнаружены атипичные мононуклеары. Наиболее высокое среднее процентное содержание мононуклеаров в крови было в группе мужчин – 14, 54 ± 2,19 %, немного меньше отмечается у женщин – 14 ±2,87 % (рисунок 4).