Таким образом, изучение литературы показывает, что избранные цель и задачи фундаментально содержательны: для развития новой концепции органокиновой регуляции и для обоснования принципа системно-местного регуляторного равновесия, а также актуальны в прикладном отношении: для спортивной медицины, лечебной физкультуры, кардиологии, эндокринологии, ортопедии и травматологии, восстановительной медицины.
Кроме того, представляет очевидный интерес, с точки зрения изучения патогенеза НДСТ и связанных с ней расстройств, каковы особенности миокинового спектра и матаболома при НДСТ, в первую очередь – в подростковый период, когда формирование организма и, в частности, опорно-двигательного аппарата и нейроэндокринной системы еще не завершено и находится, по выражению и , в постнатальном критически-сенситивном периоде [10], еще до полного развития коморбидных с НДСТ заболеваний.
Глава 3 Материалы и методы исследования
3.1 Дизайн и методы исследования
Клиническая характеристика исследованных курсантов и объем выполненных исследований
Ввиду необходимости стандартизации дополнительных факторов, влияющих на состояние обмена и уровни биорегуляторов (пол, возраст, образ жизни, питание и др.), для исследования был избран организованный контингент с высоким и контролируемым уровнем физической активности и типовыми условиями жизни. Во время планового медицинского обследования, было с их добровольного информированного согласия исследовано 72 курсанта Суворовского училища (г. Санкт-Петербург), из них 32 учащихся 4-го курса и 40 учащихся 6 курса. Подгруппы разного возраста были выделены ввиду того, что в 14-17 лет идет интенсивный пубертатный скачок в развитии нейроэндокринной системы и локомоторного аппарата, делающий объединение всех подростков в единый контингент методологически некорректным. Все исследуемые прошли клиническое обследование с привлечением врачей-специалистов на базе училища и привлекались к исследованию только будучи практически здоровыми, без острой патологии и установленных диагнозов хронических заболеваний. У всех подростков были оценены показатели физического развития и рассчитан индекс массы тела по А. Кетле. При объективном осмотре и сборе анамнеза особое внимание обращалось на наличие стигм НДСТ: сколиоза, деформаций грудной клетки, плоскостопия, вальгусной деформации стоп, протрузии тазобедренных суставов, лицевых дизморфий, долихостеномелии, гипермобильности суставов выше критического уровня по шкале Бейтона, кожных стрий, миопии, астигматизма, межпальцевых перепонок, арахнодактилии (по критериям ВНОК - [66]).
Признаки НДСТ верифицировались с помощью клинических тестов [56], которые включали:
1. Симптом «большого пальца» (Steinberg I). Большой палец легко укладывается поперек ладони и в этом положении концевой отдел ногтевой фаланги выступает за ее ульнарный край, независимо от того достигается этот выход с помощью исследователя или без нее.
2. «Симптом запястья» (Walter-Murdoch): испытуемый легко охватывает запястье мизинцем и большим пальцем, при этом кончик большого пальца перекрывает весь ноготь пятого пальца.
Кроме того, производилось взятие крови для исследования показателей липидного и углеводного метаболизма. Были определены уровни гемоглобина, эритроцитов крови, общего холестерина, ТГ, ХС ЛПВП, ХС ЛПНП, ХС ЛПОН, фибриногена, глюкозы, С-пептида, инсулина, тестостерона.
У младщих подростков – курсантов 4 го курса было также проведено исследование методами метаболомики ключевых метаболитов плазмы крови, характеризующих разные звенья энергетического и пластического обмена (3-гидроксибутират, ацетат, аланин, бетадин, карнитин, холин, цитрат, креатин, креатинин, глутамин, глицин, изолейцин, лактат, лейцин, метанол, орнитин, фенилаланин, треонин, тирозин, валин), определен уровень в плазме миокиновых цитокинов И-6 и ИЛ-8, а также определены концентрации внутриклеточной и, раздельно, внутримитохондриальной АТФ.
У всех курсантов в период обследования были зарегистрированы результаты сдачи физкультурных нормативов. Нормативы включали в себя время, показанное в беге на 1км (скоростная выносливость), в беге на 100 м (мощность), и количество выполненных в контрольный срок подтягиваний (сила мышц плечевого пояса).
На основании анамнестических данных и данных объективного осмотра, а также положительных симптомов Штейнберга и Вальтера–Мурдоха. курсанты 4го и 6 го курса были разделены на 2 группы: группа, куда входили лица, имеющие признаки НДСТ и группа, без наличия таковых. Критериями включения в первую группу были положительные тесты Вальтера-Мурдоха и Штейнберга I, в сочетании с наличием совокупности клинико-анамнестических признаков, перечисленных выше.
Среди курсантов 4 курса в первую группу – с верифицированными клинико-анамнестическими признаками НДСТ – вошли 13 человек, во вторую группу (без ее признаков) вошло 18 человек. Среди курсантов 6 курса в первую группу вошли 20 человек, во вторую – также 20 человек.
Клинико - инструментальные методы исследования
У всех обследованных подростков проводилось измерение массы тела и роста, высчитывался индекс массы тела (ИМТ) по А. Кетле, определяемый как вес (кг)/ рост (м)2. Толщина жировой складки была измерена с помощью калипера. Окружность талии и окружность бедра измерялись стандартно при помощи металлической сантиметровой ленты. У подростков проводилось измерение артериального кровяного давления (АД) методом согласно стандартным рекомендациям.
Группы состояли только из подростков мужского пола и были практически идентичны по возрасту, который составил в младших первой и второй группах - 14-15 лет, в старших первой и второй группах - 16-17 лет.
Средние значения антропометрических характеристик курсантов 4 го и 6го курса представлены в таблице 1.1
Таблица 1.1 Общие характеристики антропометрических и показателей спортивных нормативов курсантов 4 и 6 курса
Показатель | 4 курс (N=32) | 6 курс (N=40) | ||
Среднее | Ошибка среднего | Среднее | Ошибка среднего | |
Рост, см | 171,30 | 1,09 | 176,20 | 0,85 |
Масса тела, кг | 61,20 | 1,47 | 66,20 | 1,17 |
ТЖС, см | 0,83 | 0,06 | 0,61 | 0,03 |
ОТ, см | 71,90 | 0,82 | 73,53 | 0,71 |
ОБ, см | 92,40 | 0,92 | 90,76 | 0,68 |
Бег на 1000 м, мин | 3,31 | 0,04 | 3.22 | 0,02 |
Бег на 100 м, сек | 13,80 | 0,13 | 14,02 | 0,08 |
Подтягивания, повторов | 12,20 | 0,81 | 14,43 | 0,38 |
Где ТЖС - толщина жировой складки, ОТ-окружность талии, ОБ-окружность бедра
Биохимические методы исследования
Определение липидных и липопротеиновых показателей сыворотки крови
Для исследования липидных показателей использовали венозную кровь, которую получали не менее чем черeз 12 ч после последнего приема пищи. Уровень общего ХС, ТГ, ХС ЛПВП определяли в сыворотке крови на биохимическом анализаторе Cobas Integra 400 Roche. Остальные показатели липидограммы расчетные. Содержание ХС ЛПНП и ХС ЛПОНП определяли расчетным методом по формуле Friedewald: ХС ЛПОНП= (ТГ/2,2); ХС ЛПНП= общий ХС - (ХС ЛПВП+ ХС ЛПОНП), а коэффициент атерогенности (КА) по формуле КА=( общий ХС-ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП) (по ). Все величины, кроме КА имеют размеронсть ммоль/л. КА выражен в относительных единицах. Внутрилабораторный контроль качества осуществлялся с использованием стандартных контрольных сывороток.
Определение глюкозы сыворотки крови
Определение глюкозы выполнялось гексокиназным методом на биохимическом анализаторе Cobas Integra 400 Roche.
Определение инсулина и С-пептида
Определение уровня инсулина проводилось с помощью набора для количественного определения инсулина Elecsys Insulin на биохимическом анализаторе Cobas e411. Уровень С-пептида определяли с помощью набора для количественного определения с-пептида Elecsys C-peptid на биохимическом анализаторе Cobas e411.
Определение тестостерона
Уровень тестостерона определялся с помощью ИФА на биохимическом анализаторе Alisei Q. S.
Определение фибриногена
Определение уровня фибриногена производилось на биохимическом анализаторе Trombostat Benk Electronic по стандартной технологии.
Исследование метаболитов плазмы
Для этого, количественный анализ низкомолекулярных (1 кДа) метаболитов плазмы крови будет проводиться с помощью 1Н-спектроскопии ядерного магнитного резонанса (1Н-NMRS.), фотофизических методов с применением тонкопленочных препаратов.
Пробоподготовка
Метод твердофазной экстракции
Реактивы - метанол (Burdic&Jackson, Германия), 5% водный раствор метанола; ацетонитрил (Sigma, Германия). Картриджи Agilent SampliQ Si-SAX 200, 60 Ǻ, 3 мл, 3СС (Agilent Technology, США).
В пробоподготовки было использовано осаждение белков плазмы с помощью ацетонитрила с последующей твердофазной экстракцией. К 300 мкл исследуемой плазмы прибавляли 150 мклацетонитрила, перемешивали на вортекс-шейкере в течение 3 мин, центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 мин. К супернатанту в объеме 300 мкл прибавляли 1,5 мл 5% водного раствора метанола, затем пробу (1 мл) нанесли на сорбционный патрон активированный 1 мл метанола и уравновешенный 1 мл дистиллированной воды. После этого патрон промывали 1,0 мл 5% водным раствором метанола, затем целевые компоненты элюировали 1,0 мл 5% водным раствором метанола.
Ацетонитриловая экстракция
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 |
