Иммуногистохимическое исследование биоптатов эндомиокарда при миокардите (стр. 1 )

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

«СИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЕДИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ КОЛЛЕДЖ

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА

Иммуногистохимическое исследование биоптатов эндомиокарда при миокардите

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ: 31.02.03 « ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА»

КВАЛИФИКАЦИЯ - МЕДИЦИНСКИЙ ЛАБОРАТОРНЫЙ ТЕХНИК

Дипломная работа   студентки 3 курса, группы 83-41   Неупокоева Евгения   Владимировна   _________________________   Руководитель дипломной работы:     _________________________   Защита дипломной работы состоялась   «___»____________201__ г.   Оценка _________________

2017 г.

СОДЕРЖАНИЕ

Введение…………………………………………………………….. .................. 3 

Глава I. Теоретические аспекты миокардита и основы иммуногистохимии........................................................................................4

1.1 Миокардит. Виды миокардита.……………………………………………4

1.2 Кардиотропные  вирусы – возбудители  миокардита………………......5 

1.3 Диагностика миокардитов…………………………………………………9

1.4 Антитела……………………………………………………………………...11

1.5 Методы выявления комплекса антиген-антитело на  гистологических препаратах…………………................................................12

1.6 Методы окраски……………………………………………………………14

Глава II. Материалы и методы иммуногистохимического исследования биоптатов эндомиокарда …………………………………………………….19

2.1 Взятие и фиксация биологического материала………………………….19

2.2 Проводка  материала………………………………………………………20

2.3 Заливка в парафин…………………………………………………………21

2.4 Техника приготовления и наклеивание срезов……………………….....22

2.5 Окрашивание и заключение срезов в бальзам…………………………..24

Глава III.  Результаты исследований и обсуждение полученных результатов.....................................................................................................25

Заключение…………………………………………………………………….26

Список использованной литературы………………………………………27

Приложение 1………………………………………………………………….28

Введение

Миокардиты включают большую группу заболеваний сердечной мышцы  воспалительного генеза, проявляющихся поражением и нарушением функций миокарда. Частой причиной миокарда являются различные инфекционные заболевания: вирусные ( вирусы Коксаки, гриппа, аденовирусы, герпеса, гепатита В и С); бактериальные ( каринобактерии дифтерии, стафилококки, стрептококки и т. д); грибковые ( аспергиллы, кандиды); паразитарные (трихинеллы, эхинококки). Миокардит диагностирован в 34.7% взрослых аутопсий в случаях внезапной смерти и в 30-40% образцов биопсии миокарда пациентов с расширенной кардиомиопатией. Самый частый клинический сценарий миокардита - аритмии и сердечная недостаточность. Высокой кардиотропностью обладают вирусы, вызывающие миокардит в 50% случаев. Важную роль в противовирусной защите и патогенезе воспаления играют макрофаги – основные клетки системы врождённого иммунитета - играют важную роль в противовирусной защите, в патогенезе воспаления и развитии фиброза. , большая часть причины вероятности болезни. Поэтому кажется важным изучить и сравнить морфологические изменения и профиль выражения вирусных антигенов в миокарде в наиболее распространенных клинических вариантах миокардита.

Иммуногистохимическое исследование при миокардите проводится для : 1) выявления маркеров воспаления и активации иммунитета с антителами к ICAM-1, ICAM-3, IgA, IgG, IgM, C3- компоненту комплемента, C1q - компоненту комплимента, C4d - компоненту комплемента ( экспрессия последних 3 антигенов свидетельствует об активации гуморального иммунитета), HLA - DR - антигену гистосовместимости  II класса; 2) финотепирование лимфоцитов и макрофагов с антителами к CD-3, CD-4, CD8, CD-68; 3) определение возбудителя вирусной инфекции с антителами к VP-1энтеровируса, LMP вируса Эпстайна - Барра, парвовирусу В19, аденовирусу, цитомегаловирусу, вирусу гепатита С, вирусам простого герпеса 1и 2 типа, вирусу герпеса 6 типа.

Цель: Проанализировать статистические данные иммуногистохимического исследования миокарда, проводимого в патологоанатомическом отделении НИИ кардиологии Томского НИМЦ.

Задачи:

1. Познакомиться с методами иммуногистохимического

окрашивания.

2. Оценить значимость иммуногистохимического исследования в диагностике  миокардита.

3. Оценить частоту выявления миокардитов по данным исследования эндомиокардиальных биоптатов.

Глава I. Теоретические аспекты миокардита и основы иммуногистохимии

1.1 Миокардит. Виды Миокардита.

  Миокардит - это поражение сердечной мышцы, миокарда. Обычно поражение носит воспалительный         характер.

  В зависимости от источника возникновения миокардиты разделяют на несколько видов:

  Чаще всего встречается инфекционно-аллергический миокардит, который может быть осложнением гриппа или ангины.

- Ревматический миокардит - следствие ревматизма

- Неинфекционные миокардиты появляются в результате травм, ожогов, вследствие приема некоторых лекарств и так далее.

- Идиопатические, природа которых неизвестна.

Диффузный миокардит характеризуется дилатацией камер сердца и сердечной недостаточностью.

  При инфекционном миокардите обычно доминируют симптомы инфекционного заболевания ( лихорадка). Наиболее часто встречающиеся симптомы — слабость, утомляемость, одышка, сердцебиение, нарушения ритма сердца. Так же часто встречаются дискомфорт и разнообразные боли в грудной клетке. Инфекционный миокардит также может протекать бессимптомно.

  Инфекционно-аллергический миокардит (наиболее распространенная форма неревматического миокардита) начинается в отличие от ревматического, как правило, на фоне инфекции или вскоре после неё.

Отмечается недомогание, боль в области сердца, иногда упорная, сердцебиение и «перебои», одышка, в ряде случаев умеренная боль в суставах. Температура тела чаще субфебрильная или нормальная.

  Начало заболевания может быть малосимптомным или скрытым. Степень выраженности симптомов в значительной мере определяется распространенностью и остротой прогрессирования процесса. При диффузных формах сравнительно рано увеличиваются размеры сердца.

  Важными, но не постоянными признаками миокардита являются нарушения сердечного ритма (тахикардия, реже брадикардия, эктопические аритмии) и внутрисердечной проводимости, а также пресистолический, а в более поздних стадиях протодиастолический ритм галопа.

  Идиопатический миокардит отличается более тяжелым, иногда злокачественным течением с развитием кардиомегалии (вследствие резко выраженной дилатации сердца), тяжелых нарушений ритма и проводимости, сердечной недостаточности.

  Нередко образуются пристеночные тромбы в полостях сердца с тромбоэмболиями по большому и малому кругам кровообращения.

  При миокардитах, связанных с коллагеновыми заболеваниями, вирусной инфекцией (вирусы группы Коксаки и др.), нередко развивается сопутствующий перикардит.

Течение миокардита может быть острым, подострым, хроническим (рецидивирующим).

Кардиотропные  вирусы – возбудители миокардита

  По данным СПб ГУЗ «ГПАБ» , 2010 года, у жителей Северо - западного региона России среди вирусных возбудителей миокардита преобладает энтеровирус. На втором месте – парвовирус В19 , на третьем – аденовирус, на четвертом – герпес 6 типа, на пятом - вирус гепатита С. Цитомегаловиру и вирус Эпстайна - Барр они наблюдали только в миокарде трансплантированного сердца. В большинстве случаев (71%) выявляется сочетание инфекционных агентов: энтеровирусов с вирусом гепатита С или сразу трех вирусов.

  Парвовирус В19 - ( от латинского parvum – маленький) был открыт в 1975 году. Состоит из одноцепочной ДНК, заключенной в белковый капсид. Вирус патогенен только для человека. Клеточный мембранный рецептор для парвовируса – Р - антиген или Gb4- агликосфинголипид. Gb4 экспрессируется на эритроцитах, тромбоцитах, лейкоцитах, синовиальной оболочке, коже, эндотелии, гладкомышечных клетках, альвеолоцитах, гепатоцитах, кардиомиоцитах. Он реплецируется в клетках с быстрым делением, например,  в клетках костного мозга и переферической крови, и персистирует в эритробластах, мегокариоцитах, гранулоцитах, лимфоцитах, макрофагах, гепатоцитах, синовеальной оболочке, эндотелиоцииах. Парвовирус19 вызывает аутоиммунные реакции, является триггером аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, доказана перекрестная аутоиммунная реакция с аутоантителами к коллагену II типа, кератину, тиреоглобулину, кардиолипину. Последний является ингибитором ДНК - полимеразы, регулирует активность РНК-полимеразы. Кардиолипин содержится в мембранах метохондрии, в ядре - в ДНК и ядерном матриксе. Это фосфолипид, контролирующий синтез белка. При его ингибировании ДНК – полимераза перестает подавляться. Что ведет к гипертрофии миокарда.

  Парвовирус В19 вызывает: 1) « синдром пощечин» или « пятую  болезнь» у детей с характерной эритематозной сыпью и  «заразным  апластическим кризом», особенно при иммунодефиците и  гемолитической анемии; 2) миокардит, 3) васкулит, 4) пневмонию,5) фульминантный гепатит, 6) менингоэнцефалит. При миокардитах вирус локализуется на мембране саркоплазмы, мембране ядер и в самих ядрах кардиомиоцитов, в эндотелии сосудах и в клетках инфильтрата. К особенностям парвовирусного миокардита относят очаговые кровоизлияния и мелкоочаговые инфаркты миокарда вследствие поражения эндотелия с последующим некрозом сосудистой стенки и тромбозом. Вирус может вызывать диффузный и очаговый миокардит, является триггером реакции отторжения при пересадке сердца. Очаговый миокардит чаще  выявляют в субэпикардиальных отделах заднебоковой стенки левого желудочка при магнитно - резонансной томографии. Вирус может вызывать перикардит и пилисерозит. Его нередко обнаруживают в перикардиальной жидкости. NS1 – протеин парвовируса В19 считается основным белком, играющим лидирующую роль в патогенезе миокарда. Он активирует вирусную репликацию, экспрессию интерлейкина 6, фактора некроза опухоли a, инициирует апоптоз через активацию каспаз 3 и 9, VP1- через активацию цитотоксических Т - лимфоцитов.