На правах рукописи

ВОРОНИНА

Евгения Игоревна

МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ В ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЛИМФОМАХ ПРИ ПРОЯВЛЕНИИ ОПУХОЛЕВОЙ ПРОГРЕССИИ В УСЛОВИЯХ ПОЛИХИМИОТЕРАПИИ

  (экспериментально-клиническое исследование)

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

14.03.02 – патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Новосибирск –2014

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ и в ФГБУН «Институт химической биологии и фундаментальной медицины» Сибирского отделения РАН (г. Новосибирск)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор                        АГЕЕВА Татьяна Августовна

доктор биологических наук, профессор                        ЗЕНКОВА Марина Аркадьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

зав. лабораторией структурных основ

патогенеза социально значимых

заболеваний ФГБУ «НЦКЭМ» СО РАМН                ПОТАПОВА Оксана Валентиновна

доктор медицинских наук,

профессор кафедры патологической анатомии

ГБОУ ВПО «Сибирский государственный

медицинский университет» МЗ РФ                        ВТОРУШИН Сергей Владимирович

Ведущая организация: ФГБУ "Научно-исследовательский институт региональной патологии и патоморфологии" СО РАМН

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Защита состоится «____»__________2014 г. в ___ часов  на заседании диссертационного совета Д 001.048.01 при ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» Сибирского отделения РАМН (630117, ; (383) 333- 64-56)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» СО РАМН и на сайте (http://centercem. ru/)

Автореферат разослан «____»__________2014 г.

Ученый секретарь 

диссертационного совета,

доктор биологических наук                        

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Основным методом лечения гемобластозов является многокурсовая полихимиотерапия, что определяет особую важность мониторирования и оценки изменяющихся под воздействием цитостатиков молекулярно-биологических характеристик именно данного вида опухолей и приближает к основной идее персонализированной медицины – индивидуализации подходов диагностики и лечения злокачественных опухолей (Jain K. K. 1998, 2002,2003,2009; Foussard C. et al., 2005;  Bosly A. et al., 2008).

Это делает необходимым понимание процессов опухолевой прогрессии после химио-лучевого воздействия (Hanahan D. et al., 2000). Полученные сведения помогут оптимизировать схемы лечения каждого пациента индивидуально и сделают возможным проведение более успешной таргетной терапии гемобластозов (Miura K. et al., 2011).

Существует ряд проблем, не позволяющих полноценно и эффективно использовать химиотерапию: развитие опухолевой прогрессии в результате накопления мутаций и генетической нестабильности, отбор клонов с максимальными возможностями к пролиферации, развитие множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) (, 2009; Foulds L., 1969). Все эти качества опухолевой клетки направлены на выживание и рост неоплазмы и нередко в ней включается сразу несколько механизмов защиты от воздействия химиотерапии. Отдельные свойства опухоли прогрессируют независимо друг от друга, а непредсказуемость количества и качества вторичных мутаций делают эту прогрессию уникальной и индивидуальной для каждой опухоли, что требует определения исходного и меняющегося под воздействием лечения генотипа каждого злокачественного новообразования.

Кроме того, существенным недостатком противоопухолевых препаратов является их токсическое воздействие на органы и ткани. Все цитостатики подвергаются биотрансформации в печени с помощью системы микросомальных оксигеназ и в результате образуются токсические метаболиты, которые  вызывают развитие гепатотоксичности  и повреждение гепатоцитов. Это в свою очередь является фактором ограничивающим проведение многократных курсов полихимиотерапии (, 2012; Donepudi I., 2012; Amacher D. E., 2013).

Степень разработанности темы исследования. В научной литературе приводится крайне мало данных об изменениях в ткани печени при  проведении многократных курсов терапии цитостатиками, это обстоятельство делает необходимым изучение морфологических изменений ткани печени в условиях цитотоксической нагрузки, а так же изменений уровней ферментных систем, отвечающих за метаболизм ксенобиотиков.

Кроме того, большой проблемой является моделирование схем лечения опухолей в эксперименте на животных, приближающееся по продолжительности курсов полихимиотерапии у пациентов, что существенно ограничивает исследование процессов, формирующихся в опухоли под воздействием химиотерапии.

Вышеизложенные обстоятельства указывают на очевидную недостаточность данных по обсуждаемой проблеме опухолевой прогрессии под воздействием цитостатиков и необходимость уточнения существующих сведений, что и определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования: изучить молекулярно-клеточные и патоморфологические особенности проявлений опухолевой прогрессии в злокачественных лимфомах в условиях полихимиотерапии: в эксперименте на резистентной лимфоме мышей RLS и в опухолевой ткани пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой.

Задачи исследования:

1. На экспериментальной модели лимфомы мышей RLS исследовать динамику роста опухоли и соотнести её с показателями уровней некрозов и апоптозов в ткани опухоли под воздействием курсов полихимиотерапии.

2. Исследовать экспрессию генов, участвующих в формировании множественной лекарственной устойчивости и инициации программы апоптоза, в клетках опухоли мышей RLS без лечения и после проведения курсов полихимиотерапии.

3. Иммуногистохимическим методом изучить динамику изменения экспрессии Ki-67, р53, caspase 3, bcl2 и Р-гликопротеина в клетках опухоли RLS под воздействием курсов полихимиотерапии.

4. Провести патоморфологическое изучение структурных изменений в печени мышей с лимфомой RLS и изучить экспрессию цитохрома P450 в гепатоцитах в динамике курсов полихимиотерапии.

5. Исследовать морфологические и молекулярно-биологические особенности проявлений опухолевой прогрессии в диффузной В-крупноклеточной лимфоме у пациентов до и после проведения многократных курсов полихимиотерапии.

Научная новизна исследования

Впервые разработана оптимальная доза имплантирования опухолевых клеток резистентной лимфомы мышей RLS, позволяющая провести четырехкратное введение комплекса цитостатиков, что сделало возможным изучить спектр молекулярно-биологических изменений, происходящих в изначально резистентной к химиотерапии опухоли RLS поэтапно, после каждого из 4-х курсов химиотерапии.

Впервые в резистентной лимфоме RLS на фоне четырехкратного введения комплекса цитостатиков установлено изменение экспрессии ключевых генов, регулирующих апоптоз и участвующих в формировании МЛУ, что в совокупности с данными о динамике экспрессии соответствующих белков позволило сделать вывод об особенностях опухолевой прогрессии изначально резистентной к цитостатикам опухоли RLS.

Впервые в лимфоме RLS после четырехкратного воздействия цитостатиков установлено нарушение процессов апоптоза, которые характеризовались повышением количества клеток, экспрессирующих белок bcl-2, снижением количества р53-позитивных клеток при невысоком числе клеток, синтезирующих каспазу 3 в течение всех 4 курсов полихимиотерапии. Впервые показано, что пролиферативная активность опухолевых клеток RLS до лечения и на этапах полихимиотерапии нарастает в совокупности с увеличением количества опухолевых клеток, экспрессирующих Р-гликопротеин, участвующий в формировании множественной лекарственной устойчивости.

Впервые у животных с лимфомой RLS исследована динамика нарастания структурных изменений в паренхиме печени на фоне воздействия опухолевого процесса и 4 курсов полихимиотерапии, а так же впервые на  основании изменений количества гепатоцитов, экспрессирующих цитохром Р450, показано «истощение» системы микросомального окисления в зависимости от нагрузки цитостатиками и нарастания деструктивных изменений паренхимы печени.

Впервые у пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой на основании исследования уровней экспрессии ряда белков, характеризующих опухолевую прогрессию (Ki-67, bcl-2, р53, Р-гликопротеин), установлены изменения молекулярных характеристик опухолевых лимфомных клеток под воздействием многократных курсов полихимиотерапии в процессе лечения заболевания в сравнении с впервые диагностированной диффузной В-крупноклеточной лимфомой.

Научно-практическая значимость работы

Полученные новые данные дополняют сведения о молекулярно-клеточных механизмах формирования опухолевой прогрессии и множественной лекарственной устойчивости в изначально резистентных к химиопрепаратам опухолях под воздействием многократных курсов полихимиотерапии, что зачастую наблюдают в клинике у пациентов с агрессивными формами лимфом.

Данное исследование продемонстрировало особенности структурных изменений в печени при проведении многокурсовой химиотерапии свидетельствующих об «истощении» системы цитохрома Р450 в течение курсов введения цитостатиков, что сопряжено с нарушениями метаболизма цитостатиков и, как следствие, снижению их воздействия на опухолевую ткань, что следует учитывать в процессе длительного лечения онкологических больных химиопрепаратами.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. На фоне многократных введений комплекса цитостатических препаратов животным с лимфомой RLS, которая характеризуется изначально лекарственно-резистентным фенотипом, продолжала нарастать степень злокачественности опухоли, как отражение опухолевой прогрессии. Это выражалось в нарушениях механизмов гибели опухолевых клеток апоптозом, усилении множественной лекарственной устойчивости, наращивании пролиферативной активности опухолевых клеток. В итоге наблюдали снижении чувствительности опухоли к цитостатикам и прогрессирующий рост опухолевого узла на фоне курсов химиотерапии.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5