“Spinreact” Испания. Экспресс-диагностикумы (стр. 2 )

РЕАГЕНТЫ

Реагент 1 Белая крышка	Реагент RPR Carbon. Суспензия кардиолипинового антигена, азид натрия 0,1%.
Реагент 4 Красная крышка	Положительный контроль. Человеческая сыворотка, содержащая реагины. Содержит 0,1% азид натрия.
Реагент 5 Голубая крышка	Отрицательный контроль. Нормальная человеческая сыворотка. Содержит 0,1% азид натрия.

Человеческая сыворотка, используемая в качестве контролей, прошла тестирование и дала отрицательный результат на HBsAg и ВИЧ. Однако с контролями следует обращаться с необходимыми предосторожностями.

ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ

Тщательно перемешайте реагент 1 (RPR Carbon) перед использованием до гомогенной суспензии без видимых сгустков.

Реагент следует дозировать через иглу, наполнив флакон-капельницу, входящую в комплект, или с помощью дозатора на 20 мкл. Чувствительность теста зависит от объема капли. Не используйте другую капельницу, держите капельницу вертикально, перпендикулярно поверхности слайда. Любые отклонения от этих правил будут изменять результаты реакции.

Реагент и контроли хранить при 2-8°C. Не замораживать. При этих условиях компоненты остаются стабильными до указанного на упаковке срока.

ПРОБЫ

Используйте свежую сыворотку, полученную центрифугированием свернувшейся крови. Пробы могут храниться в течение 48 ч при 2-8°C перед выполнением теста. Для более продолжительного хранения пробы необходимо заморозить. Гемолизированные, липемические или загрязненные сыворотки не должны использоваться.

ПРОЦЕДУРА

Качественный тест

1.  Выдержать все контроли и реагент при комнатной температуре перед использованием.

2.  Осторожно перемешать реагенты до гомогенной суспензии.

3.  Проверьте реагент с положительным и отрицательным контролями.

4.  Внести по 1 капле (50 мкл) неразведенных сывороток в соответствующие ячейки слайда.

5.  Добавьте по капле реагента 1 (RPR Carbon) через иглу из флакона-капельницы или с помощью дозатора на 20 мкл, вслед за каплей сывороток.

6.  Перемешать содержимое ячеек, распространив по всей поверхности ячеек, осторожно покачивая планшет во все четыре стороны.

7.  Поворачивайте слайд вручную или, поместив на механический ротатор при 100 об./мин, в течение 8 мин. По окончании инкубации сразу же считать результаты на наличие или отсутствие видимых агглютинатов. При более позднем считывании возможна неспецифическая агглютинация.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

·  Присутствие черных агрегатов на чистом основном фоне является положительным результатом.

·  Отсутствие агрегации в виде гомогенной серой смеси считается отрицательным результатом.

Полуколичественный тест

Полуколичественным методом исследуются пробы, давшие положительный результат при качественном исследовании. Тест выполняется, как и указано выше, только пробы предварительно разводятся физраствором (0,9% NaCl) или глициновым буфером. Титр получают серией двукратных разведений в разбавителе (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и т. д.). Титром пробы считается наибольшее разведение, дающее положительный результат.

НОРМАЛЬНЫЕ УРОВНИ

Сифилис является заболеванием, передающимся половым путем, которое вызывается Treponema pallidum.

Положительный результат свидетельствует о присутствии «сифилитических реагинов», которые определяются с помощью нетрепонемных серологических тестов. Окончательная постановка диагноза возможна только на основании комплекса клинических и лабораторных данных.

ПРИМЕЧАНИЯ

Результаты должны учитываться в сравнении с тем, что наблюдается в ячейках с контролями:

·  Отрицательный контроль должен давать отсутствие видимой агрегации в виде гомогенной серой суспензии.

·  Положительный контроль должен давать отчетливые агрегаты.

·  Несмотря на то, что тест высоко специфичен, ложно положительные результаты наблюдались у пациентов, страдающих лепрой, инфекционным мононуклеозом и заболеваниями соединительной ткани.

ЛИТЕРАТУРА

1.  Portnoy J., Brewer H. and A. D. Harris. U. S. Public. Health Report 77,

2.  Huber T., Storns S. et al. Jour. Clin. Microbiol.

3.  McGrew, B. E. et al. Amer. J. Clin. Path., 50

4.  Stevens, R. W. and Stroebel, E. Amer. J. Clin. Path., 32

VDRL Тест для серодиагностики сифилиса (VDRL)

VDRL антиген – нетрепонемный тест для серодиагностики сифилиса методом флоккуляции на слайде.

Код: 1200тестов):	Код: 1200тестов):
3 мл	0,3 мл	VDRL антиген
30 мл	3 мл	Буфер
1мл	1мл	Положительный контроль
1мл	1мл	Отрицательный контроль

ПРИНЦИП

VDRL антиген – это нетрепонемный антиген, специально подготовленный для быстрого и полуколичественного определений методом коагуляции на слайде реагинов плазмы – группы антител против тканевых компонентов, продуцируемых у всех пациентов, инфицированных Treponema pallidum.

Реагент как антиген, представляющий собой ассоциацию 0,2% лецитина, 0,03% кардиолипина и 0,9% холестерина, взаимодействует с антителами неизвестных проб. Наличие или отсутствие видимой флоккуляции или агглютинации обозначает присутствие или отсутствие циркулирующих антител в тестируемых пробах.

РЕАГЕНТЫ

Реагент 1 Реагент 2	VDRL-буфер. Азид натрия 0,1%. VDRL антиген. Азид натрия 0,1%. 0,2% лецитина, 0,03% кардиолипина и 0,9% холестерина
Реагент 4 Красная крышка	Положительный контроль *. Человеческая сыворотка, содержащая реагины. Содержит 0,1% азид натрия.
Реагент 5 Голубая крышка	Отрицательный контроль *. Нормальная человеческая сыворотка. Содержит 0,1% азид натрия.

*) Человеческая сыворотка, используемая в качестве контролей, прошла тестирование и дала отрицательный результат на HBsAg и ВИЧ. Однако с контролями следует обращаться с необходимыми предосторожностями.

ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ

Реагенты готовы к использованию.

Тщательно перемешайте реагент перед использованием до гомогенной суспензии.

Реагент и контроли остаются стабильными до указанного на упаковке срока при 2-8°C. Не замораживать.

ТРЕБУЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ИНСТРУМЕНТЫ

Дозаторы, таймер, чистые стеклянные слайды, механический ротатор (до 150 об./мин), микроскоп 10Х.

ПРОБЫ

Свежая прозрачная не инактивированная сыворотка или плазма. После того как отделена чистая сыворотка, пробы перед выполнением теста могут храниться в течение 48ч при 2-8°C. Для более продолжительного хранения пробы необходимо заморозить. Пробы плазмы перед тестированием могут храниться в течение 48ч при 2-8°C. Гемолизированные и загрязненные пробы не должны быть использованы.

ПРОЦЕДУРА

Подготовка антигена

ПОДГОТОВКА для ТЕСТА НА СЛАЙДЕ

1.  Поместите 0,4 мл VDRL-буфера в серологическую пробирку.

2.  Используя дозатор, добавьте 0,5 мл VDRL антигена каплей за каплей, одновременно осторожно встряхивая пробирку. Произойдет преципитация VDRL антигена. После добавления встряхивайте пробирку в течение 30с.

3.  Добавьте 4,1 мл VDRL-буфера в эту же пробирку. Закройте пробирку. Перемешивайте переворачиванием в течение 30с.

Оставьте на 5 мин перед использованием. VDRL антиген готов к использованию в течение 24ч.

При необходимости можно приготовить больше или меньше антигена, но всегда соблюдайте указанные пропорции.

ПОДГОТОВКА для ТЕСТА В ПРОБИРКЕ

Повторите предыдущую процедуру для приготовления 5 мл реагента и добавьте 20 мл физраствора (0,9% NaCl). Перемешайте, тщательно встряхивая. Через 5 мин реагент готов к использованию.

ТЕСТ НА СЛАЙДЕ

1.  Выдержите реагент и пробы при комнатной температуре.

2.  Поместите 50мкл пробы на стеклянный слайд.

3.  Встряхните осторожно эмульсию антигена и добавьте 20 мкл.

4.  Смешайте обе капли палочкой.

5.  Поворачивайте слайд вручную или на механическом ротаторе (150 об./мин) в течение 4 мин.

6.  По окончании инкубации сразу же считайте результаты на наличие или отсутствие видимых агглютинатов при интенсивном искусственном или дневном освещении. Подтвердите результаты под микроскопом при 10-кратном увеличении.

Интерпретация результатов

Положительный результат: четкая и интенсивная видимая агрегация. Реактивная сыворотка.

Слабоположительный результат: легкие четкие небольшие агрегаты. Слабо реактивная сыворотка.

Отрицательный результат: смесь остается однородной эмульсией без видимых агрегатов. Нереактивная сыворотка.

ТЕСТ В ПРОБИРКЕ

1.  Выдержите реагент и пробы при комнатной температуре.

2.  Поместите 0,5мл пробы в серологическую пробирку.

3.  Добавьте 0,5мл преципитирующей антигенной эмульсии.

4.  Смешайте содержимое пробирки в течение 5 мин.

5.  Центрифугируйте при 2000 об./мин в течение 10 мин.

6.  Ожидайте 1 мин и сразу же считайте результаты на наличие или отсутствие видимых агглютинатов при интенсивном искусственном или дневном освещении. Подтвердите результаты под микроскопом при 10-кратном увеличении.

Интерпретация результатов

Отрицательный результат: прозрачный супернатант без видимых агрегатов.

Положительный результат: любые видимые агрегаты.

ПРИМЕЧАНИЕ И ОГРАНИЧЕНИЯ

Чувствительность теста снижается при низкой температуре. Лучшие результаты достигаются при температуре 23 – 29°С.

Ложноотрицательные результаты могут быть в раннем периоде первичной инфекции и на поздней латентной стадии заболевания.

Ложноположительные реакции с кардиолипиновым антигеном могут быть при таких заболеваниях и состояниях, как инфекционный мононуклеоз, красная волчанка, вирусная пневмония, беременность, наркотическое отравление и аутоиммунные заболевания.

Данный тест является скрининговым (ориентировочным) и должен быть подтвержден трепонемным тестом.

ПРИЧИНЫ ОШИБОК И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ

Возможны ошибки при использовании плазмы, содержащей избыток антикоагулянтов.

Со всеми материалами, использующимися в тесте и имеющими человеческое происхождение, следует обращаться с необходимыми предосторожностями, как с потенциально инфекционными.

Не используйте реактив с использованным сроком годности.

Только для использования в диагностике in vitro.

ЛИТЕРАТУРА

1.  Portnoy, J., Brewer, H. And A. D. Harris, U. S. Public Health Report, 77,

2.  Huber, T., Storns, S. et al., Jour. Clin. Microbiol.

3.  McGrew, B. E. et al., Amer. J. Clin. Path., 50

4.  Stevens, R. W. and Stroebel, E., Amer. J. Clin. Path., 32

АНТИСТРЕПТОЛИЗИН О (АСЛО) (aso Latex)

Латексный тест на слайде для качественного и полуколичественного определения антистрептолизина-О. Без разведения проб.

Код: 1200тестов)	Код: 1200тестов)	Белый латекс
Код: 1200тестов)	Код: 1200тестов)	Красный латекс
2,5 мл	5 мл	АСЛО латексный реагент
1мл	1мл	положительный контроль
1мл	1мл	отрицательный контроль
8 х 6	16 х 6	Одноразовые слайды

ПРИНЦИП

Латексный реагент АСЛО (aso Latex) является суспензией полистироловых латексных частиц, покрытых стабилизированным стрептолизином О. Этот набор основан на иммунологической реакции между стрептококковыми экзоэнзимами, связанными с биологически инертными латексными частицами, и антистрептококковыми антителами в тестовых пробах. Видимая агглютинация при смешивании с латексным реагентом наблюдается, когда в сыворотке присутствует уровень АСЛО выше 200 МЕ/мл.

РЕАГЕНТЫ

Реагент 1 Белая крышка	АСЛО латексный реагент в виде суспензии. Азид натрия 0,1%.
Реагент 4 Красная крышка	Положительный контроль, содержащий не менее 200 МЕ/мл АСЛО. Человеческая сыворотка. Содержит 0,1% азид натрия.
Реагент 5 Голубая крышка	Отрицательный контроль, содержащий менее 200 МЕ/мл АСЛО. Нормальная человеческая сыворотка. Содержит 0,1% азид натрия.

Человеческая сыворотка, используемая в качестве контролей, прошла тестирование и дала отрицательный результат на HBsAg и ВИЧ. Однако с контролями следует обращаться с необходимыми предосторожностями.

ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ

Тщательно перемешайте реагент 1 (aso Latex) перед использованием до гомогенной суспензии без видимых сгустков.

Чувствительность теста зависит от объема капли (50 мкл). Не используйте другую капельницу, держите капельницу вертикально, перпендикулярно поверхности слайда.

Реагент и контроли хранить при 2-8°C. Не замораживать. При этих условиях компоненты остаются стабильными до указанного на упаковке срока.

ПРОБЫ

Используйте свежую сыворотку, полученную центрифугированием свернувшейся крови. Пробы могут храниться в течение 48 ч при 2-8°C перед выполнением теста. Для более продолжительного хранения пробы необходимо заморозить. Гемолизированные, липемические или загрязненные сыворотки не должны использоваться.

ПРОЦЕДУРА

Качественный тест

1.  Выдержать все контроли и реагент при комнатной температуре перед использованием.

2.  Осторожно перемешать латексный реагент до гомогенной суспензии.

3.  Проверьте реагент с положительным и отрицательным контролями.

4.  Внести по 1 капле (50 мкл) неразведенных сывороток в соответствующие ячейки слайда.

5.  Добавьте по капле латексного реагента вслед за каплей сывороток.

6.  Перемешать содержимое ячеек, распространив по всей поверхности ячеек.

7.  Поворачивайте слайд вручную или, поместив на механический ротатор при 100 об./мин, в течение 2 мин. По окончании инкубации сразу же считать результаты на наличие или отсутствие видимых агглютинатов. При более позднем считывании возможна неспецифическая агглютинация.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

·  Присутствие агглютинатов является положительным результатом и обозначает присутствие АСЛО в пробе более чем 200 МЕ/мл.

·  Отсутствие агглютинации считается отрицательным результатом и свидетельствует о том, что уровень АСЛО в пробе ниже 200 МЕ/мл.

Полуколичественный тест

Полуколичественным методом исследуются пробы, давшие положительный результат при качественном исследовании. Тест выполняется, как и указано выше, только пробы предварительно разводятся физраствором (0,9% NaCl) или глициновым буфером. Титр получают серией двукратных разведений в разбавителе (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и т. д.).

Определение соответствующей концентрации АСЛО:

Разведение	Концентрация (МЕ/мл)
1:2	400
1:4	800
1:8	1600
1:16	3200

НОРМАЛЬНЫЕ УРОВНИ

Взрослые < 200 МЕ/мл

Повышение уровня АСЛО выше нормы случается при инфекции b–гемолитическим стрептококком группы А, продуцирующем стрептолизин-О.

ЛИТЕРАТУРА

1.  Plotz and Singer, Am. J. Med.

2.  Adams, L. E., Hess, E. J. Amer. Technol.

3.  Normausell, D. Immunochemistry 9 (1972).

4.  Dito, W. Am. Soc. Clin. Path.,

С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК (C-Reactive Protein (CRP) – Latex)

Латексный тест на слайде для качественного и полуколичественного определения С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке человека. Без разведения проб.

Код: 1200тестов)	Код: 1200тестов)
2,5 мл	5 мл	СРБ латексный реагент
1мл	1мл	положительный контроль
1мл	1мл	отрицательный контроль
8 х 6	16 х 6	Одноразовые слайды

ПРИНЦИП

Латексный реагент СРБ (crp Latex) является суспензией полистироловых латексных частиц, покрытых гамма-глобулиновой фракцией антител к человеческому СРБ специфической сыворотки. Если СРБ присутствует в тестовых пробах, наблюдающаяся агглютинация говорит о содержание СРБ около или выше, чем 6мг/л, без предварительного разведения проб.

РЕАГЕНТЫ

Реагент 1 Белая крышка	СРБ латексный реагент в виде суспензии. Азид натрия 0,1%.
Реагент 2 Красная крышка	Положительный контроль, содержащий не менее 6мг/л СРБ. Человеческая сыворотка. Содержит 0,1% азид натрия.
Реагент 3 Голубая крышка	Отрицательный контроль, содержащий менее 6мг/л СРБ. Нормальная человеческая сыворотка. Содержит 0,1% азид натрия.

Человеческая сыворотка, используемая в качестве контролей, прошла тестирование и дала отрицательный результат на HBsAg и ВИЧ. Однако с контролями следует обращаться с необходимыми предосторожностями.

ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ

Тщательно перемешайте реагент 1 (crp Latex) перед использованием до гомогенной суспензии без видимых сгустков.

Чувствительность теста зависит от объема капли (50 мкл). Не используйте другую капельницу, держите капельницу вертикально, перпендикулярно поверхности слайда.

Реагент и контроли хранить при 2-8°C. Не замораживать. При этих условиях компоненты остаются стабильными до указанного на упаковке срока.

ПРОБЫ

Используйте свежую сыворотку, полученную центрифугированием свернувшейся крови. Пробы могут храниться в течение 48 ч при 2-8°C перед выполнением теста. Для более продолжительного хранения пробы необходимо заморозить. Гемолизированные, липемические или загрязненные сыворотки не должны использоваться.

ПРОЦЕДУРА

Качественный тест

1.  Выдержать все контроли и реагент при комнатной температуре перед использованием.

2.  Осторожно перемешать латексный реагент до гомогенной суспензии.

3.  Проверьте реагент с положительным и отрицательным контролями.

4.  Внести по 1 капле (50 мкл) неразведенных сывороток в соответствующие ячейки слайда.

5.  Добавьте по капле латексного реагента вслед за каплей сывороток.

6.  Перемешать содержимое ячеек, распространив по всей поверхности ячеек.

7.  Поворачивайте слайд вручную или, поместив на механический ротатор при 100 об./мин, в течение 2 минут. По окончании инкубации сразу же считать результаты на наличие или отсутствие видимых агглютинатов. При более позднем считывании возможна неспецифическая агглютинация.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

·  Присутствие агглютинатов является положительным результатом и обозначает присутствие СРБ в пробе более 6мг/л.

·  Отсутствие агглютинации считается отрицательным результатом и свидетельствует о том, что уровень СРБ в пробе ниже 6мг/л.

Полуколичественный тест

Полуколичественным методом исследуются пробы, давшие положительный результат при качественном исследовании. Тест выполняется, как и указано выше, только пробы предварительно разводятся физраствором (0,9% NaCl) или глициновым буфером. Титр получают серией двукратных разведений в разбавителе (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и т. д.).

Определение соответствующей концентрации СРБ:

Разведение	Концентрация (МЕ/мл)
1:2	12 (6х2)
1:4	24 (6х4)
1:8	48 (6х8)
1:16	96 (6х16)

НОРМАЛЬНЫЕ УРОВНИ

Взрослые < 6мг/л

СРБ является белком острой фазы и его уровень повышается при различных тканевых поражениях. Он был описан также как белок у здоровых людей в концентрации не превышающем 6 мг/л. Однако его повышение не специфично и происходит при различных состояниях таких, как злокачественные опухоли, ревматическая лихорадка, инфаркт миокарда, ожоги и др.

ЛИТЕРАТУРА

1.  Warworth, E. Wadswoth, Ch. Clin. Acta

2.  Pepys, M. B., Dash, A. C., Ashly M. J., Clin. Exp. Immunol., 30, 32

3.  Deyo, R. A., Pope, R. M., Persellin, R. H., J. Rheumatol.

РЕВМАТОИДНЫЙ ФАКТОР (Rheumatoid Factors (RF) – Latex)

Латексный тест на слайде для качественного и полуколичественного определения ревматоидного фактора (РФ) в сыворотке человека. Без разведения проб.

Код: 1200тестов)	Код: 1200тестов)
2,5 мл	5 мл	РФ латексный реагент
1мл	1мл	положительный контроль
1мл	1мл	отрицательный контроль
8 х 6	16 х 6	Одноразовые слайды

ПРИНЦИП

Латексный реагент РФ (rF Latex) является суспензией полистироловых латексных частиц, покрытых специально подготовленными (для предотвращения неспецифической агглютинации) человеческими IgG к ревматоидному фактору. Чувствительность латексного реагента РФ (rF Latex) установлена для определения от минимального уровня 8 МЕ/мл РФ по Международному стандарту ВОЗ, без предварительного разведения проб.