Материалы по токсико–гигиенической оценке биологически активной добавки к пище эпоэкстрин (стр. 6 )

ЛД50(остр.) – средняя смертельная доза вещества при однократном введении

ЛД50(кратн.)- средняя смертельная доза вещества при кратном введении

Поскольку ЛД50(кратн.) субстанции Эпотек, рассчитанная по методу Миллера-Тейнтера, составляет 2000,0 ± 46,1мг/кг, то Икум = 0,79.

Таким образом, тестируемое вещество – субстанция Эпотек обладает кумулятивными свойствами.

На основании полученных результатов по изучению специфической активности и токсичности субстанции Эпотек, можно сделать следующие выводы:

1. Субстанция Эпотек является не токсичным соединением и может быть использована как компонент биологически активной добавки.

2. Субстанция Эпотек обладает более выраженным антигипоксическим эффектом, чем у препарата сравнения Гипоксен, проявляющимся на основных моделях гипоксических состояний

3. Субстанция Эпотек обладает актопротекторной активностью на модели истощающих физических нагрузок. При введении субстанции Эпотек в дозе 32 мг/кг актопротекторный эффект проявляется более выражено, чем у препарата сравнения Гипоксен. Однако, субстанция Эпотек уступает по активности другому препарату сравнения настойке листьев женьшеня Фолигин.

4. Материалы, полученные при исследовании влияния субстанции Эпотек при двухнедельном введении на органы и системы органов крыс, свидетельствуют о безопасности исследуемого объекта.

5. Исследуемый образец субстанции Эпотек обладает кумулятивными свойствами. Индекс кумуляции составляет 0,79.

3. Скрининговые исследования образцов ЭпоТЕК и комбинаций на его основе

Для скрининговых исследований были предоставлены 10 образцов пищевого антиоксиданта Эпотек (образцы А-К). Скрининговые исследования проводили на модели истощающих физических нагрузок. Образцы вводили перорально в дозе 32 мг/кг. При выборе дозы руководствовались данными исследований субстанции Эпотек (см. раздел 2): животные, получавшие субстанцию в этой дозе, наиболее длительное время справляться с физической нагрузкой. В качестве препарата сравнения использовали настойку листьев женьшеня Фолигин в дозе 0,84 мл/кг. Результаты представлены в таблице 14.

Таблица 14.

Влияние образцов Эпотек на физическую выносливость крыс самцов

(пероральное введение однократно, n=10)

Группа, препарат	Доза, мг/кг	Время плавания, М ± m, мин.	Прирост времени плавания по отношению к контрольным данным, %
Крнтроль (вода очищенная)	2 мл/кг	20,03±10,05	-
Фолигин	0, 84 мл/кг	20,06±1,79	0,15
Образец А	32	25,41±5,23	26,7
Образец Б	32	19,00±,24	-5,2
Образец В	32	22,45±8,02	12,1
Образец Г	32	21,72±8,46	8,4
Образец Д	32	18,63±12,12	- 6,9
Образец Е	32	19,00±14,27	- 5,3
Образец Ж	32	7,53±2,26	- 62,5
Образец З	32	53,78±15,57	168
Образец И	32	45,57±12,31	127
Образец К	32	67,50±0,77	236

В результате проведенных исследований установлено, что представленные заказчиком образцы Эпотека существенно отличаются друг от друга по степени влияния на актопротекторную активность животных. Максимальный результат, как продолжительности плавания, так и прироста времени плавания по отношению к контрольным показателям, был получен у животных, получавших образец К. Этот образец был выбран для дальнейших исследований.

На следующем этапе скрининговых исследований определяли наиболее эффективную комбинацию для будущей БАД. С этой целью на модели истощающих физических нагрузок исследовали комбинации Эпотека с водными экстрактами листьев подорожника большого и растений-адаптогенов, производства : корня и корневища элеутерококка колючего, левзеи, плодов лимонника китайского, корня женьшеня, аралии манджурской. Дозы водных экстрактов из растений, которые вводили экспериментальным животным, определяли путем пересчета терапевтических доз для человека с учетом того, что суточная доза БАД не должна превышать разовой лечебной дозы. Были выбраны следующие дозы водных экстрактов:

сухой экстракт женьшеня – 10 мг/кг, 1 мг/кг;

сухой экстракт элеутерококка – 12 мг/кг, 1,2 мг/кг

сухой экстракт лимонника – 13 мг/кг, 1,3 мг/кг

сухой экстракт левзеи – 13 мг/кг, 1,3 мг/кг

сухой экстракт аралии – 18 мг/кг, 1,8 мг/кг

сухой экстракт подорожника – 60 мг/кг (растения-адаптогены вводили также в дозе равной 1/10 от рассчетной – 2-ая цифра).

Скрининг проводили на модели истощающих физических нагрузок, результаты теста приведены в таблице 15. В качестве препарата сравнения использовали Фолигин в дозе 0,84 мл/кг, контрольные животные получали воду очищенную. Введение однократное.

Таблица 15

Влияние комбинаций на основе Эпотека на физическую выносливость крыс (n=10 в каждой группе)

Группа, препарат	Доза, мг/кг	Время плавания, М ± m, мин.	Прирост времени плавания по отношению к контрольным данным, %
Крнтроль (вода очищенная)	2 мл/кг	9,51±2,28	-
Фолигин	0, 84 мл/кг	10,63±1,64	11,8
Эпотек (Э)	32	12,53±1,51	31,7
Э+П	32+60	11,80±0,61	24,08
Э+П+А1	32+60+1,8	7,54±1,72	-20,8
Э+П+А2	32+60+18,0	13,33±0,83	40,2
Э+П+Л1	32+60+1,3	15,87±0,26	66,8
Э+П+Л2	32+60+13,0	11,78±1,59	23,9
Э+П+Ле1	32+60+1,3	10,43±3,11	9,7
Э+П+Ле2	32+60+13,0	8,30±1,24	-12,8
Э+П+Э1	32+60+1,2	8,90±1,59	-6,4
Э+П+Э2	32+60+12,0	22,32±8,73	134,7
Э+П+Ж1	32+60+1,0	16,05 ±2,07	68,8
Э+П+Ж2	32+60+10	2,93±1,01	141,1

Примечание: П – подорожник в дозе 60 мг/кг; А1 – аралия в дозе 1,8 мг/кг; А2 – аралия в дозе 18 мг/кг; Л1- лимонник в дозе 1,3 мг/кг; Л2 – лимонник в дозе 13 мг/кг; Ле1 – левзея в дозе 1,3 мг/кг; Ле2 – левзея в дозе 13 мг/кг; Э1- элеутерококк в дозе 1,2 мг/кг; Э2- элеутерококк в дозе 12 мг/кг; Ж1 – женьшень в дозе 1,0 мг/кг; Ж2 – женьшень в дозе 10 мг/кг.

Из анализа полученных данных следует, что наибольшую актопротекторную активность проявляют комбинации Эпотека с элеутерококком ( в дозе 12 мг/кг) и женьшенем (в дозе 10 мг/кг) – длительность плавания составляет 22,3-22,9 мин, прирост времени плавания по отношению к контролю 134,7 – 141,1 %. Продолжительность плавания животных, получавших комбинации Эпотека с лимонником (в дозе 1,5 мг/кг) и женьшенем (в дозе 1,0 мг/кг) составляет 15,9 и 16,05 мин соответственно, что также превышает показатели, полученные у контрольных животных.

С учетом полученных данных, а также характеристик отдельных растений-адаптогенов (кумулятивные свойства аралии, трудности закупки сырья элеутерококка) для дальнейших исследований были выбраны композиции с лимонником и женьшенем в низких дозах. Так как новую БАД предполагается позиционировать как БАД общеукрепляющего действия и источник янтарной кислоты, в композицию ввели янтарную кислоту в дозе 50 мг/кг.

4. Исследования безопасности и эффективности выбранных комбинаций.

4.1. Результаты оценки острой токсичности

Острую токсичность выбранных композиций оценивали на белых беспородных мышах самцах массой г. Использовали 10 групп тест-объектов, по 10 животных в каждой. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 дней. Исследуемые композиции вводили перорально. ЛД50 рассчитывали по методу Миллера-Тейнтера. В результате исследований получили следующие результаты: ЛД50 комбинации с лимонником составила 7075 мг/кг; ЛД50 комбинации с женьшенем - 8204 мг/кг.

В результате исследований установлено, что выбранные композиции являются нетоксичными.

Влияние выбранных комбинаций на переносимость гипоксии

Традиционно эффективность препаратов, обладающих адаптогенными свойствами, оценивается при гипоксических нагрузках в силу универсальности данного состояния при различных экстремальных воздействиях и патологических состояниях.