Материалы по токсико–гигиенической оценке биологически активной добавки к пище эпоэкстрин (стр. 9 )

Изменений в лейкоцитарной формуле у животных, получавших Эпоэкстрин в дозе 7,075 мг/кг не выявлено, тогда как у животных из опытных групп, наблюдалось статистически значимое увеличение количества базофилов и эозинофилов. Количество базофилов превышало норму, установленную для крыс. Количество лимфоцитов в этих группах находилось на верхней границе нормы, а количество нейтрофилов на нижней границе нормы для крыс. Результаты исследования представлены в таблице 23.

Таблица 23

Влияние длительного введения Эпоэкстрин на лейкоцитарную формулу крови крыс самцов

(n=10 в каждой группе)

Группа, доза	Сроки нед	Нейтрофилы палочкоядер.,%	Нейтрофилы сегментояд. %	Эозино-филы%	Моно- циты%	Лимфо- циты %	Базо-филы,%
Интактные животные	1 2 3 4 6	4,7±1,90 6,4±0,62 4,9±0,54 6,5±1,3 3,3±0,4	20,0±7,1 21,6±1,2 12,9±1,15 18,5±1,3 18,3±2,8	0 0 0,8±0,10 0 0	0 0 2,2±0,18 0 1,9±0,5	75,3±3,5 72,0±6,5 78,3±3,4 75,0±9,5 76,3±3,9	0 0 1±0 0 0
контроль	1 2 3 4 6	5,0±0,6 7,7±1,2 7,5±1,5 6,4±0,8 7,2±1,5	20,3±1,6 22,3±1,9 20,5±3,0 20,3±2,4 19,4±3,0	3,0±0,9 2,8±1,2 0 0 1,8±0,4	0,3 0,2 0 0 0	71,4±2,9 67,0±3,9 72,0±8,0 73,3±3,2 71,6±5,2	0 0 0 0 0
Эпоэкстрин 7,075	1 2 4 6	5,7±1,9 6,5±3,3 5,5±1,1 5,5±1,5	21,8±1,3 21,2±6,3 17,5±1,3 17,2±1,6	2,0±0,6 3,0±0,7 3,0±2,8* 2,9±2,0	0,3 0 0 0	69,5±1,3* 69,0±2,1 73,5±3,3 73,9±0,8	0,3 0 0 0
Эпоэкстрин 70,75	1 2 3	4,5±1,1 6,0±1,1* 4,8±2,2*	20,5±1,4 20,3±2,9 11,6±2,5*	1,5±0,9 2,3±0,4 2,1±0,8*	0 0 0,75±0,2	73,5±2,4 70,7±3,4 78,6±3,9	0 0,7±0,2 2,1±0,4*
Эпоэкстрин 707,5	1 2 3	4,0±0,5 5,4±0,4 4,5±1,1	16,0±3,4 17,5±3,2 13,2±1,8*	3,0±2,0 1,5±0,3 3,3±0,3*	0 0,2 0,2	76,5±2,0 75,4±4,2 77,3±2,1	0,5±0,1 0 1,5±0,4*

Примечания - * - отличия от контроля статистически значимы

В результате биохимических исследований установлено, что у всех опытных животных наблюдалось увеличение количества мочевины по сравнению с контрольной и интактной группой. При этом, уровень мочевины в сыворотке крови превышает физиологическую норму для крыс. Данные биохимических исследований приведены в таблице 24.

В результате исследования длительного введения БАД установлено, что масса внутренних органов животных, получавших исследуемый препарат, не отличается от таковой у животных из группы контроля и интактной группы (табл. 25).

По окончании эксперимента было произведено вскрытие животных для проведения гистологического исследования. Ниже приведены результаты визуального осмотра органов и патоморфологических исследований внутренних органов крыс самцов, получавших Эпоэкстрин внутрь в дозах 7,075; 70,75 и 707,5 мг/кг.

ИНТАКТНЫЕ ЖИВОТНЫЕ. При вскрытии брюшной и грудной полостей следующие признаки: легкие, сердце, печень, почки, надпочечники без изменений, нормальной консистенции, нормального цвета. При вскрытии желудка по большой кривизне у 2 животных наблюдали слабо выраженную гиперемию слизистой в пилорическом отделе.

КОНТРОЛЬНАЯ ГРУППА. Легкие, сердце, почки, селезенка, печень, почки, надпочечники без изменений. В области пилорического отдела желудка у 2 животных наблюдали язвы коричневого цвета, занимающие примерно 5% слизистой.

ГРУППА ЖИВОТНЫХ, ПОЛУЧАВШИХ ЭПОЭКСТРИН ПЛЮС, В ДОЗЕ 7,075 МГ/КГ. При вскрытии наблюдали у всех животных гиперемию легких, увеличение размеров сердца, незначительное уменьшение массы печени и селезенки. У одного животного отмечена гиперемия почек, у трех – кровоизлияния. У всех животных имели место кровоизлияния слизистой желудка, а у одного – язвенные поражения пилорического отдела.

ГРУППА ЖИВОТНЫХ, ПОЛУЧАВШИХ ЭПОЭКСТРИН ПЛЮС В ДОЗЕ 70,75 МГ/КГ. У одного из 4 выживших животных наблюдали увеличение размеров сердца, легкие с многочисленными кровоизлияниями, серого цвета. Почки нормального размера, серого цвета. У остальных животных внутренние органы без патологии.

ГРУППА ЖИВОТНЫХ, ПОЛУЧАВШИХ ЭПОЭКСТРИН ПЛЮС В ДОЗЕ 707,5 МГ/КГ. У двух из 3 выживших животных наблюдали увеличение размеров сердца, синюшного цвета. Многочисленные кровоизлияния в легких и почках. Остальные органы без видимой патологии.

СЕРДЦЕ. На препаратах сердца крыс из контрольной и опытных групп различимы эпикард, миокард и эндокард. У животных из опытных групп в миокарде отмечена очаговая зернистая дистрофия. Соединительная ткань в миокарде выражена незначительно. Кровенаполнение капилляров умеренное. Кардиомиоциты типичного строения содержат овальные ядра с мелкодисперсным хроматином и хорошо различимыми ядрышками. В цитоплазме кардиомиоцитов выявляется поперечная исчерченность.

ЛЕГКИЕ. Микроструктура органа крыс из опытных групп в целом не отличается от обнаруживаемой в контроле. У опытных животных имеет место очаговые кровоизлияния в альвеолах. У животных, получавших Эпоэкстрин в высоких дозах эти кровоизлияния обширные. На срезах хорошо заметен эпителий бронхиального дерева нормального строения. Паренхима легких типична. Вокруг артериол иногда встречаются лимфоидноклеточные инфильтраты в виде муфт.

ПЕЧЕНЬ. У контрольных и интактных животных, а также у животных, получавших Эпоэкстрин в дозе 7,075 мг/кг печень типичного дольчатого строения. Центральные вены окружены трабекулами из гепатоцитов. Желчные канальцы и щелевидные синусоиды отделены от трабекул щелями Диссе. Соединительнотканные перегородки выражены слабо. Сосуды портальных трактов и центральные венулы умеренного кровенаполнения. Гепатоциты имеют ядра, содержащие мелкодисперсный хроматин, выявляются ядрышки. У жиовтных, получавших препарат в высоких дозах в печени имеется множество эритроцитов в синусоидах.

ПОЧКИ. Строение почек типично у контрольных и интактных животных. Соотношение коркового и мозгового вещества нормальное. Канальцы в корковом слое имеют узкие просветы, в мозговом – относительно более широкие. Эпителий канальцев по всей их длине сохранен. Сосуды коркового и мозгового вещества умеренного кровенаполнения. В опытных группах отмечено очаговое венозное полнокровие, гиперемия, очаговые скопления эритроцитов в капиллярах коркового слоя.

ЖЕЛУДОК. На срезах желудка крыс самцов опытных и контрольной групп хорошо различимы отделы желудка. Слизистая оболочка без патологических изменений. Железы типичного строения, структура и распределение обкладочных клеток не изменены. Сосуды слизистой спавшиеся.

ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА. Без изменений. Видно дольчатое строение. Сосуды слабого кровенаполнения. Эпителий ацинусов не изменен. Островки небольшие, имеют различную форму. Существенных отличий в архитектонике органа у опытных и контрольных животных не выявлено.

СЕЛЕЗЕНКА. На срезах органа видны капсула и трабекулы. Отмечается преобладание красной пульпы. Ее синусы умеренного кровенаполнения. В белой пульпе можно видеть периартериальные лимфоидные влагалища и фолликулы, иногда – реактивные центры. В опытных группах имеет место резкая гиперемия красной пульпы..

ТИМУС. Без изменений. У животных из контрольной и опытных групп тимус типичного дольчатого строения. Видны три типа эпителия, единичные тельца Гассаля. Имеется множество малых лимфоцитов, наблюдаются единичные лимфобласты и макрофаги.

НАДПОЧЕЧНИКИ. Без изменений. Надпочечники крыс из разных групп имеют типичное строение. Соотношение коркового и мозгового слоя нормальное. В корковом веществе хорошо определяется типичная для надпочечников зональность. Клетки клубочковой зоны светлые. Клетки пучковой зоны базофильные, с мелкими вакуолями. Клетки сетчатой зоны в основном эозинофильные, в них обнаруживаются более крупные вакуоли. Венозные синусы мозгового вещества имеют умеренное кровенаполнение.

Таким образом, у всех опытных животных имеются морфологические признаки расстройства кровообращения в виде острого венозного полнокровия. В миокарде имеет место очаговая зернистая дистрофия.

6. Изучение кумулятивной активности Эпоэкстрин

(подострой токсичности по тесту Лима)

При энтеральном (внутрижелудочном) введении ЛД50 субстанции составляла 7075,0± 155,2мг/кг, поэтому в первые четыре дня животным вводили исследуемую субстанцию в дозе 707,5 мг/кг. Полученные результаты представлены в табл. 26 и 27. Они позволяют определить как ЛД50 субстанции при кратном энтеральном введени по методу Миллера-Тейнтера, так и оценить индекс кумуляции.

Таблица 26

Результаты теста Лима (n = 10 в группе) для субстанции Эпотек.

Дни введения	1-4	5	6-8
Ежедневная доза г/кг	0,7075	1,061	0
Суммарная доза по перио- дам введения*, г/кг	2,830	3,891	0
Кол-во погибших за каждые 4 дня введения	6	4	0

Примечание: * - под периодом введения подразумевается временной интервал с 1-го дня введения по последний день введения соответствующей четырехдневки.

Таблица 27

Результаты определения средних смертельных доз

при кратном введении

Препарат	Путь введния	ЛД 16 мг/кг	ЛД50 мг/кг	ЛД84 мг/кг
Эпоэкстрин Плюс	П/о	1200,0	4500,0	6000	Р<0,05

Икум = ЛД50(остр.)/ЛД50(кратн.), где

ЛД50(остр.) – средняя смертельная доза вещества при однократном введении

ЛД50(кратн.)- средняя смертельная доза вещества при кратном введении

Поскольку ЛД50(кратн.) субстанции Эпотек, рассчитанная по методу Миллера-Тейнтера, составляет 4500, то Икум = 1,79.

Таким образом, тестируемое вещество – Эпоэкстрин Плюс обладает кумулятивными свойствами.

На основании полученных результатов по изучению специфической активности и токсичности Эпоэкстрин можно сделать следующие выводы:

1. Эпоэкстрин является не токсичным соединением в дозе 7,075 мг/кг и может быть использована как биологически активная добавка.

2 Эпоэкстрин обладает выраженным антигипоксическим эффектом, проявляющимся на основных моделях гипоксических состояний

3. Эпоэкстрин обладает актопротекторной активностью на модели истощающих физических нагрузок.

4. Материалы, полученные при исследовании влияния БАД при длительном введении на органы и системы органов крыс, свидетельствуют о безопасности исследуемого объекта при использовании его в низкой дозе (7,075 мг/кг) и не более 3 недель.. Применение высоких доз Эпоэкстрин у опытных животных наблюдаются гемодинамические расстройства..

5. Исследуемый образец обладает кумулятивными свойствами.

Литература

1. Методические указания по доклиническому (экспериментальному) исследованию новых лекарственных средств МЗ РФ. – Москва, 2001.

2. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств. М.,1990

3. Пастушенков методы оценки протекторного действия антигипоксантов в эксперименте и особенности их влияния на обменные процессы в клетке //Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. - М., 1989. - С. 118-124.

4. , , Лимаренко свойства настойки листьев Panax gineng C. A. Mey // Растительные ресурсыТ.19. - Вып.3. - С. 297-307.

5. Беленький количественной оценки фармакологического эффекта. – Л., 1963. – 162 с.

6. , Гречко В. Ф. и др. Общие принципы фармакологической оптимизации работоспособности организма в обычных и осложненных условиях.- В кн.: Фармакологическая регуляция физической и психической работоспособности. М., 1980, с.3.

7. , Генкин непараметрических критериев статистики в медико-биологическихисследованиях. Л.: Медицина, 1973 – С. 137-141.

8. Денисенко работоспособности фармакологическими средствами медиаторного и немедиаторного действия в обычных и экстремальных условиях.-В кн.: Фармакологическая регуляция физической и психической работоспособности. М., 1980, с.5.