Титр реакции – это максимальное разведение сыворотки, при котором РА положительная.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
Эта реакция более чувствительна, чем реакция агглютинации. Для ее постановки используются эритроцитарные диагностикумы: эритроциты барана или человека О (1) группы, на которых адсорбированы известные реагенты – антигены или антитела. Например, чумный антигенный эритроцитарный диагностикум, холерный антительный эритроцитарный диагностикум и др. Образование комплекса АГ+ АТ влечет за собой и склеивание эритроцитов. Эритроциты, сами не участвуя в образовании комплекса, служат его индикатором.
Рис. 4. Схема РНГА с целью серодиагностики.
(http://nsau. edu. ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/immun/rnga. htm)
Рис. 5. Схема РНГА с целью сероидентификации
(http://nsau. edu. ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/immun/rnga. htm)
Реакция преципитации (РП)
Это серологическая реакция, в которой участвует растворенный антиген – преципитиноген и антитела к нему - преципитины. В результате образуется преципитат – осадок.).
Рис. 6. Реакция кольцепреципитации по Асколи с целью ретроспективной диагностики сибирской язвы (http://medicine-live. ru/atlas/micro/immunol/rp. htm)
РП можно проводить в жидкой среде и в геле. В первом случае используют узкие пробирки, в которые вносят жидкость, содержащую один из реагентов, например преципитирующую сибиреязвенную сыворотку, и на нее наслаивают прозрачный экстракт из микробных клеток (приготовленный из образца шкур, шерсти животных
В положительных случаях на границе соприкосновения жидкостей образуется серо-белое кольцо. (Рис.6)
Особенностью реакции преципитации в геле (иммунодиффузии) является то, что встреча и взаимодействие коллоидных АГ и АТ приводит к образованию в агаровом геле видимых зон преципитата. Примерами могут быть методы двойной иммунодиффузии по Оучтерлони, радиальной иммунодиффузии по Манчини. (Рис. 7)
Рис.7. Механизм реакций преципитации в агаре.
(http://intranet. tdmu. /data/kafedra/internal/distance/classes_stud. htm)
Разновидностью РП является реакция нейтрализации. Она применяется как в бактериологии, так и в вирусологии. В бактериологии сутью реакции является взаимодействие токсина или анатоксина с антителами – антитоксинами. Продукт реакции называется флоккулят, поэтому второе название этой реакции – флоккуляция.
Примеры
Определение токсигенности дифтерийных палочек.
На питательную среду в чашку Петри помещают полоску фильтровальной бумаги, смоченной диагностическим дифтерийным антитоксином. Затем засевают культуры дифтерийных палочек. После инкубации у токсигенных культур в месте взаимодействия токсина и антитоксина образуются линии преципитата. (Рис.8.)
Рис. 8.Определение токсигенности дифтерийных палочек.
(http:///guide/microbiology/reakciya-precipitacii)
Реакция иммунного лизиса – это серологическая реакция, в которой происходит растворение микробных клеток под действием антител – бактериолизинов и комплемента. В этом случае результат реакции невооруженным глазом не виден.
Если в качестве АГ взять эритроциты, например, барана, в качестве АТ - гемолитическую сыворотку кролика, полученную иммунизацией эритроцитами барана, добавить комплемент – сыворотку морской свинки, то произойдет гемолиз, результат которого отчетливо виден: «лаковая кровь».
Реакция связывания комплемента – РСК - предложена в 1906 году Борде и Жангу. Как правило, ее применяют с целью серодиагностики коклюша, гонореи, токсоплазмоза и других заболеваний.
Она состоит из 2 систем:
1 - реакция бактериолиза: известный АГ, сыворотка больного, комплемент
2 - гемолитическая система: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка
Результаты читают, смотря по тому, в какой из систем связался комплемент. Если комплемент связался в 1 системе, то гемолиза не будет (реакция положительная) (Рис.9), а если он в 1 системе не связался, то произойдет гемолиз (реакция отрицательная) (Рис.10).
Рис.9. Схема РСК с сывороткой больного
(http://nsau. edu. ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/immun/pict/rsk. gif)
Рис. 10. Схема РСК с сывороткой здорового
(http://nsau. edu. ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/immun/pict/rsk2.gif)
В контроле всегда должен быть гемолиз, так как в 1 систему не вносится АГ, и, независимо от присутствия АТ в исследуемой сыворотке, комплемент свяжется со второй, гемолитической системой.
Реакции с применением
меченых АТ или АГ
К таким методам относятся реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и радиоиммунный анализ (РИА). Общие принципы заключаются в использовании конъюгатов АТ или АГ с легко обнаруживаемой меткой – флюорохромом, ферментом, радиоактивным изотопом.
Реакция иммунофлюоресценции(РИФ)
В прямой РИФ используют специфические люминесцирующие сыворотки, например: чумная люминесцирующая, сибиреязвенная люминесцирующая и др. Они содержат специфические антитела, меченные светящимися веществами - флюорохромами. (Рис.11)
Рис.11. Схема прямой РИФ
(http://nsau. edu. ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/immun/rif. htm)
Для постановки прямой РИФ берут исследуемый материал, готовят мазок, обрабатывают его люминесцирующей сывороткой и просматривают в люминесцентном микроскопе. Если АГ соответствует известным АТ, то в мазке обнаружат светящиеся микробы.
Непрямая РИФ может быть использована как с целью сероидентификации, так и с целью серодиагностики. На первом этапе реакции микробы взаимодействуют со специфической сывороткой, а на втором этапе применяют антиглобулиновую люминесцирующую сыворотку. (Рис.12) Образуется светящийся комплекс, который обнаруживают в люминесцентном микроскопе.
Рис.12. Схема непрямой РИФ.
(http://nsau. edu. ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/immun/rif. htm)
Иммуноферментный анализ (ИФА)
ИФА – иммунологический метод диагностики, который может использоваться для обнаружения как антигенов, так и антител. Он основывается на определении комплекса антиген-антитело за счет введения в один из компонентов реакции ферментативной метки. Фермент, расщепляя добавляемый соответствующий субстрат, изменяет его окраску, что фиксируется спектрофотометрически. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. (Рис.13)
Рис.13. Схема ИФА с целью серодиагностики.
(http://www. u-hiv. ru/gloss_i_ifa-elisa. htm)
1- АГ, сорбированный на твердой поверхности; 2 - сыворотка, содержащая АТ; 3- антитела к Ig человека, слитые с ферментом (коньюгат); 4 – хромоген, вещество способное окрашиваться. Если образуется комплекс - "пирог" (Б), то хромоген под действием фермента расщепляется и появляется окраска. Результат тестирования антител положительный.
Радиоиммунологический анализ (РИА)
Высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген-антитело с применением антигенов или антител, меченых радионуклидом (125J, 14С, 3H и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета - или гамма-излучение): интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антитела.
Метод представляет определенную экологическую опасность.
Демонстрации
1. Развернутая реакция агглютинации с целью серодиагностики брюшного тифа.
2. РНГА.
3. Чашка Петри с определением токсигенности дифтерийных палочек.
4. РСК.
5. Стеклянные пластины с результатами реакций по Оучтерлони и Манчини.
6. Агглютинирующие сыворотки, диагностикумы, комплемент, гемолитическая сыворотка, люминесцирующие сыворотки.
Задание для самостоятельной работы студентов
1. Прочитать и оценить результаты демонстрационной реакции Видаля (3 варианта), определить титр реакции, сделать выводы.
2. Поставить реакцию кольцепреципитации.
3. Оценить демонстрационную РСК (2 варианта).
Контрольные вопросы для самостоятельной
внеаудиторной работы студентов
1. Дайте определение серологических реакций, приведите примеры.
2. Назовите основные свойства серологических реакций.
3. Что такое сероидентификация и серодиагностика? Приведите примеры реакций, поставленных с целью сероидентификации или серодиагностики.
Тестовые задания по пройденному материалу
1. Свойства иммунологических реакций:
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 |
