Научная новизна. Впервые выявлена цикличность синтеза провоспалительных (IL-1β, IL-6, TNFα, IFNγ), противовоспалительных (IL-4 и IL-10) цитокинов и белков острой фазы, у практически здоровых женщин репродуктивного возраста изменяющаяся в зависимости от фазы менструального цикла.
Впервые показана активация процесса апоптоза в лютеиновой фазе МЦ, что имеет немаловажное значение в обратном развитии антральных фолликулов.
Показано, что при действии инфекции, гормональных нарушений и различных экологических неблагоприятных факторов, происходит нарушение системы иммунитета, которое влияет на репродуктивную функцию женщин детородного возраста.
Впервые дана иммунологическая характеристика физиологического течения беременности с учетом изменения содержания цитокинов и белков острой фазы в динамике гестации. Показано, что в I триместре физиологической беременности наблюдается повышенный синтез IL-1β, IL-4, IL-8, IL-6, IL-10, TNFα. ВоII триместре регистрируется снижение продукции IL-4 и дальнейшее повышение синтеза IL-1β, IL-10, IL-6 и TNFα. III триместр характеризуется повышенным уровнем провоспалительных цитокинов и резко сниженным уровнем IL-4. Выявлено, что концентрация С3 компонента комплемента, С-реактивного белка (СРБ) и лактоферрина (ЛФ) возрастает по мере развития гестационного процесса.
Впервые изучены количественные показатели клеточного, гуморального и цитокинового статуса у женщин с физиологически родовой деятельностью. Показано, что в этот период резко снижается продукция противовоспалительных и повышается уровень провоспалительных цитокинов.
Выявлено, что важную роль в поддержании иммунологической толерантности во время беременности играет соотношение противо - и провоспалительных цитокинов. Показано, что при воздействии неблагоприятных факторов развивается дисбаланс про - и противовоспалительных цитокинов, который приводит к нарушению состояния иммунологической толерантности во время беременности и началу отторжения плода.
На основании полученных результатов был выведен коэффициент напряженности показателей иммунитета в группах риска при беременности в зависимости от повреждающего фактора. Показана высокая напряженность иммунитета в группе женщин с ГВИ и НБ в анамнезе.
Выведен диагностический индекс прогноза беременности, основанный на определении соотношения уровня IL-8 и противовоспалительного цитокина IL-4. Установлено, что при неосложненной беременности индекс меньше 0,5. Индекс больше 0,5 является диагностическим критерием неблагоприятного течения беременности.
Научная и практическая значимость результатов исследования. Обнаруженные закономерные изменения работы системы иммунитета в течение как менструального цикла, так и беременности позволят практикующим врачам акушер-гинекологам и иммунологам своевременно оценить степень отклонения от нормального течения менструального цикла и гестационного процесса. Выявленная ключевая роль IL-1β, IL-6, TNFα и процесса апоптоза позволит прогнозировать патологию фолликулогенеза.
Определение уровня IL-4 и IL-8 позволяет не только оценить состояние беременной женщины в момент обследования, но и является высокоинформативным прогностическим критерием нарушения течения гестационного процесса.
Реализация результатов. Результаты исследования внедрены в работу консультативной поликлиники РСНПЦ АиГ МЗ РУз, лаборатории и клинического отделения Института иммунологии АН РУз.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на 3-м съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2000); 7-мI Международном конгрессе по иммунореабилитации и реабилитации в медицине (Нью-Йорк, 2001); 5-м съезде иммунологов и аллергологов СНГ (СПб, 2003); 2-м Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2004); на заседании Общества иммунологов и аллергологов Узбекистана (Ташкент, 2004); на Юбилейной конференции, посвященной 20-летию Института иммунологии (Ташкент, 2005); на научно-практической конференции «Факторы, влияющие на состояние здоровья населения в регионе Приаралья» (Нукус, 2006); на 2-й конференции «Иммунология репродукции» (Сочи, 2007); на конференции «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» (Ташкент, 2008); на 13-м научном форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», (2009). Диссертация обсуждена на заседании учёного совета Института иммунологии АН РУз (2008-2009.); на межвузовском научном семинаре при Институте иммунологии АН РУз (2010).
Опубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 43 научных работ, в том числе 16 статей в отечественных изданиях, 3 – за рубежом, 1- в англоязычном журнале, 3 методические рекомендации и 20 тезисов докладов.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 253 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 354 источника, из них – 175 иностранных. Диссертация иллюстрирована 39 таблицами и 33 рисунками.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
Во введении раскрыты актуальность темы, цель и задачи исследования, научная новизна и научно-практическая значимость, сформулированы положения, выносимые на защиту, обосновано практическое внедрение полученных результатов.
Первая глава «Обзор литературы» посвящена анализу современной литературы по проблеме иммунологии репродукции. В ней описаны клеточные и молекулярные основы иммунных реакций в женских половых органах, современные представления об иммунобиологии неосложненной беременности, а также факторы, влияющие на иммунную систему и являющиеся причиной осложнений беременности.
Во второй главе «Материалы и методы исследования» дана характеристика 512 женщинам в возрасте от 20 до 35 лет, которых обследовали в 2002 – 2007 гг.: 177 женщин репродуктивного возраста вне беременности, 307 беременных женщин и 28 женщин с физиологически протекающей родовой деятельностью. Из 177 небеременных - 28 практически здоровых женщин составили контрольную группу, у 75 имела место герпесвирусная инфекция, у 35 - гормональные нарушениями (гипотиреоз и гиперпролактинемия), которые состояли на учете в поликлинике «Инфарммадат» г. Ташкента – [гл. врач, к. м.н. Э.]. Диагноз выставлялся на основании результатов клинико-лабораторных исследований и заключения соответствующих специалистов. 39 практически здоровых женщин проживали в экологически неблагоприятном регионе, каковым является Республика Каракалпакстан. Из 307 беременных женщин физиологическое течение наблюдалось у 94. В роддоме №1 г. Ташкента обследованы 28 женщин во время развития физиологической родовой деятельности. Осложненная герпесвирусными инфекциями беременность наблюдалась у 74 женщин, НБ в анамнезе – у 70 женщин, которые находились на учете в консультативной поликлинике РНПМЦ акушерства и гинекологии. 69 беременных женщин, проживающих в Каракалпакстане, состояли на учете в консультативных поликлиниках №1, №2, №4 г. Нукуса. Определение в периферической крови содержания популяционного состава лимфоцитов с фенотипом CD3, CD4, CD8, СD16, CD20, СD25, CD95, CDHLADR проводили с помощью моноклональных антител серии LT [ОО Сорбент, Москва) по методу Ф. Ю. Гариба и соавт. (1995). Уровень иммуноглобулинов G, A, M в сыворотке крови определяли по методу Manchini (1969). Фагоцитарную активность нейтрофилов изучали по способности поглощения латексных частиц [ П., 1983]. Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови определяли методом нефелометрии (ПЭГ-6000) (Нихол). Содержание С3 определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА), концентрацию СРБ - в реакции агглютинации латекса (РАЛ). Уровень лактоферрина определяли методом ИФА (Вектор-Бест), а цитокинов IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, TNFα, IFNγ в сыворотке крови также методом ИФА (Цитокин НИИ ОЧБП, СПб).
Полученные результаты обрабатывали на персональном компьютере IBM – AT с помощью программы Excel пакета MS office и программы Statistica 6. Статистически значимыми считали различия при Р<0,05.
В третьей главе представлены данные иммунологического обследования 28 практически здоровых женщин репродуктивного возраста в разные фазы менструального цикла. Кровь для исследования брали на 3-5-й (фолликулиновая фаза) и 21-й (лютеиновая фаза) дни менструального цикла. Исследования показали, что у женщин в периферической крови в фолликулиновой фазе МЦ число Т - лимфоцитов и Т-хелперов было достоверно выше, чем в лютеиновой ( Р< 0,01) (рис.1). В фолликулиновой фазе МЦ уровень CD8+ был почти в 2 раза выше, чем с лютеиновой (25,7 ± 0,8 против 13,6± 0,4%, P<0,001).
Рис. 1. Параметры иммунной системы у женщин в разные фазы МЦ
Уровень В-лимфоцитов (CD20+) в фолликулиновой фазе был в 1,2 раза ниже, чем в лютеиновой фазе – 24,7 ± 0,59 против 28,6 ± 0,8% (P<0,01). Концентрации иммуноглобулинов G, A и M в фолликулиновой фазе была достоверно ниже, чем в лютеиновой (P<0,01). В наших исследованиях NK-клетки были представлены CD16+-лимфоцитами. Оказалось, что в фолликулиновой фазе уровень этих клеток был ниже, чем в лютеиновой фазе в 1,7 раза (10,5 ±0,25% против 18,3 ± 0,5%), (P<0,001).
Изучение лимфоцитов с маркером активации показало, что для фолликулиновой фазы характерно снижение уровня CD25+-клеток (P<0,05). Однако, уровень лимфоцитов с рецептором к Главному комплексу гистосовместимости (CD HLA-DR+) и трансферрину (CD71+) был достоверно выше в лютеиновой фазе (P<0,01). Уровень лимфоцитов с рецептором к апоптозу (CD95+) в лютеиновой фазе был в 1,5 раза выше, чем в фолликулиновой. Возможно, это связано с процессом атрезии примордиальных фолликулов посредством апоптотической гибели клеток. Одним из механизмов гуморальной защиты является система комплемента и белки острой фазы, в том числе С-реактивный белок. СPБ обладает митогенной активностью и способностью усиливать функции NK-клеток. Уровень СРБ в фолликулиновой фазе (9,8 ± 0,2 нг/мл) оказался в 2,6 раза выше, чем в лютеиновой фазе (Р<0,05), а содержание компонента комплемента С3 был выше в фазе усиленного синтеза лютеинизирующего гормона (57,8 ± 2,5 против 48,3 ± 1,18 нг/мл, Р<0,05). Эти цифры свидетельствуют о том, что ответные и компенсаторные реакции в различные фазы МЦ имеют более широкий спектр и амплитуду.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 |
Основные порталы (построено редакторами)