Способ получения антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, в растении, антитело, полученное этим способом, и его применение (стр. 7 )

Группа, показатель эффективности	Кратность увеличения опухолевых узлов
Vo/Vt1	Vo/Vt2	Vo/Vt3
Сутки после лечения/имплантации
1/22	7/28	10/31
КРО, физ. р-р	20,7	31,9	41,5
Фитотрастузумаб	9,3	18,9	27,7
Фитотрастузумаб + АПДД HER2/neu	4,2	11,2	16,9

Таким образом, вышеописанные примеры иллюстрируют разработанный авторами способ продукции в растительной клетке МА против домена димеризации HER2/neu, позволяющий получать функционально активный препарат МА против РМЖ для использования в комплексной терапии.

Конкретные гены, векторы, виды растений, применения, используемые материалы и методы, описанные здесь, относятся к предпочтительным вариантам осуществления, приведены в качестве примеров и не предназначены для ограничения объема данного изобретения. При изучении этого описания другие объекты, аспекты и воплощения будут приходить в голову специалистам в данной области, и они охватываются рамками данного изобретения. Специалистам в данной области будет понятно, что различные замены и модификации могут быть произведены в отношении описанного здесь изобретения без отклонения от его объема и рамок, которые определяются прилагаемой формулой изобретения.

Цитированная литература

, , (2012). Интенсивный синтез зеленого флуоресцирующего белка ведет к формированию Y-тел включения в растительной клетке. Биохимия, 77, №6, 742-749.

Ahmed, S., Sami, A., Xiang, J., 2015. HER2-directed therapy: current treatment options for HER2-positive breast cancer. Breast Cancer Tokyo Jpn. doi:10.1007/s12282-015-0587-x

An, Y. Q., McDowell, J. M., Huang, S., McKinney, E. C., Chambliss, S., Meagher, R. B., 1996. Strong, constitutive expression of the Arabidopsis ACT2/ACT8 actin subclass in vegetative tissues. Plant J. Cell Mol. Biol. 10, 107–121.

Arce, A. L., Cabello, J. V., Chan, R. L., 2008. Patents on plant transcription factors. Recent Pat. Biotechnol. 2, 209–217.

Barthélémy, P., Leblanc, J., Wendling, F., Wissler, M.-P., Bergerat, J.-P., 2014. Pertuzumab and solid tumors: perspectives. Bull. Cancer (Paris) 101, 1114–1121. doi:10.1684/bdc.2014.2026

Chung, C., Lam, M. S.H., 2013. Pertuzumab for the treatment of human epidermal growth factor receptor type 2-positive metastatic breast cancer. Am. J. Health-Syst. Pharm. AJHP Off. J. Am. Soc. Health-Syst. Pharm. 70, 1579–1587. doi:10.2146/ajhp120735

Dorokhov YuL, null, Ivanov, P. A., Novikov, V. K., Agranovsky, A. A., Morozov SYu, null, Efimov, V. A., Casper, R., Atabekov, J. G., 1994. Complete nucleotide sequence and genome organization of a tobamovirus infecting cruciferae plants. FEBS Lett. 350, 5–8.

Fleck, L. M., 2006. The costs of caring: Who pays? Who profits? Who panders? Hastings Cent. Rep. 36, 13–17.

Giritch, A., Marillonnet, S., Engler, C., van Eldik, G., Botterman, J., Klimyuk, V., Gleba, Y., 2006. Rapid high-yield expression of full-size IgG antibodies in plants coinfected with noncompeting viral vectors. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 14701–14706. doi:10.1073/pnas.0606631103

Harries, M., Smith, I., 2002. The development and clinical use of trastuzumab (Herceptin). Endocr. Relat. Cancer 9, 75–85.

Hudis, C. A., 2007. Trastuzumab--mechanism of action and use in clinical practice. N. Engl. J. Med. 357, 39–51. doi:10.1056/NEJMra043186

Hudziak, R. M., Lewis, G. D., Winget, M., Fendly, B. M., Shepard, H. M., Ullrich, A., 1989. p185HER2 monoclonal antibody has antiproliferative effects in vitro and sensitizes human breast tumor cells to tumor necrosis factor. Mol. Cell. Biol. 9, 1165–1172.

Hu, S., Sun, Y., Meng, Y., Wang, X., Yang, W., Fu, W., Guo, H., Qian, W., Hou, S., Li, B., Rao, Z., Lou, Z., Guo, Y., 2014. Molecular architecture of the ErbB2 extracellular domain homodimer. Oncotarget.

Kawajiri, H., Takashima, T., Kashiwagi, S., Noda, S., Onoda, N., Hirakawa, K., 2015. Pertuzumab in combination with trastuzumab and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer. Expert Rev. Anticancer Ther. 15, 17–26. doi:10.1586/14737140.2015.992418

Komarova, T. V., Baschieri, S., Donini, M., Marusic, C., Benvenuto, E., Dorokhov, Y. L., 2010. Transient expression systems for plant-derived biopharmaceuticals. Expert Rev. Vaccines 9, 859–876. doi:10.1586/erv.10.85

Komarova, T. V., Kosorukov, V. S., Frolova, O. Y., Petrunia, I. V., Skrypnik, K. A., Gleba, Y. Y., Dorokhov, Y. L., 2011. Plant-made trastuzumab (herceptin) inhibits HER2/Neu+ cell proliferation and retards tumor growth. PloS One 6, e17541. doi:10.1371/journal. pone.0017541

Komarova, T. V., Skulachev, M. V., Zvereva, A. S., Schwartz, A. M., Dorokhov, Y. L., Atabekov, J. G., 2006. New viral vector for efficient production of target proteins in plants. Biochem. Biokhimii͡a 71, 846–850.

Laemmli, U. K., 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680–685.

Lartey, R. T., Lane, L. C., Melcher, U., 1994. Electron microscopic and molecular characterization of turnip vein-clearing virus. Arch. Virol. 138, 287–298.

Macedo, A., Monteiro, I., Andrade, S., Cirrincione, A., Ray, J., 2010. [Cost-effectiveness of trastuzumab in the treatment of early stages breast cancer patients, in Portugal]. Acta Médica Port. 23, 475–482.

Makhzoum, A., Benyammi, R., Moustafa, K., Trémouillaux-Guiller, J., 2014. Recent advances on host plants and expression cassettes’ structure and function in plant molecular pharming. BioDrugs Clin. Immunother. Biopharm. Gene Ther. 28, 145–159. doi:10.1007/s40259-013-0062-1

Peake, B. F., Nahta, R., 2014. Resistance to HER2-targeted therapies: a potential role for FOXM1. Breast Cancer Manag. 3, 423–431. doi:10.2217/bmt.14.33

Rimawi, M. F., Schiff, R., Osborne, C. K., 2015. Targeting HER2 for the Treatment of Breast Cancer. Annu. Rev. Med. 66, 111–128. doi:10.1146/annurev-med-042513-015127

WHO Position Paper on Mammography Screening, 2014. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. World Health Organization, Geneva.

Формула изобретения

1. Рекомбинантный экспрессионный неамплифицирующийся вектор для получения в клетках растения легкой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, содержащий последовательно расположенные элементы:

функционально активный в клетках растения промотор, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и легкой цепи антитела, и терминатор транскрипции.

2. Вектор по п.1, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, промотор гена нопалин-синтетазы (nos), промотор гена октопин-синтетазы (ocs), промотор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

3. Вектор по п.1, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, терминатор гена нопалин-синтетазы (nos), терминатор гена октопин - синтетазы (ocs), терминатор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или терминатор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

4. Вектор по п.1, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

5. Вектор по п.1, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

6. Вектор по п.1, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты и терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

7. Рекомбинантный экспрессионный вирусный амплифицирующийся вектор для получения в клетках растения легкой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, содержащий последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, 5’-нетранслирумый участок генома Х-вируса картофеля, ген полимеразы X-вируса картофеля, второй промотор субгеномной РНК Х-вируса картофеля, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и легкой цепь антитела, 3’-нетранслируемый участок генома Х-вируса картофеля и терминатор транскрипции.

8. Вектор по п.7, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, промотор гена нопалин-синтетазы (nos), промотор гена октопин-синтетазы (ocs), промотор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

9. Вектор по п.7, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, терминатор гена нопалин-синтетазы (nos), терминатор гена октопин - синтетазы (ocs), терминатор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или терминатор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

10. Вектор по п.7, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

11. Вектор по п.7, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

12. Вектор по п.7, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты и терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

13. Рекомбинантный экспрессионный вирусный амплифицирующийся вектор для получения в клетках растения легкой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, содержащий последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, 5’-нетранслирумый участок генома вируса табачной мозаики крестоцветных, ген полимеразы вируса табачной мозаики крестоцветных, включающий первый промотор субгеномной РНК вируса табачной мозаики крестоцветных, ген транспортного белка, включающий второй промотор субгеномной РНК вируса табачной мозаики крестоцветных, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и легкой цепи антитела, 3’-нетранслируемый участок генома вируса табачной мозаики крестоцветных и терминатор транскрипции.