14. Вектор по п.13, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, промотор гена нопалин-синтетазы (nos), промотор гена октопин-синтетазы (ocs), промотор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

15. Вектор по п.13, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, терминатор гена нопалин-синтетазы (nos), терминатор гена октопин - синтетазы (ocs), терминатор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или терминатор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

16. Вектор по п.13, в котором промотор представляет собой промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

17. Вектор по п.13, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

18. Вектор по п.13, в котором промотор представляет собой промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana и терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

19. Рекомбинантный экспрессионный неамплифицирующийся вектор для получения в клетках растения тяжелой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, содержащий последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, состоящую сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и тяжелой цепи антитела, и терминатор транскрипции.

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

20. Вектор по п.19, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, промотор гена нопалин-синтетазы (nos), промотор гена октопин-синтетазы (ocs), промотор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

21. Вектор по п.19, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, терминатор гена нопалин-синтетазы (nos), терминатор гена октопин - синтетазы (ocs), терминатор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или терминатор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

22. Вектор по п.19, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

23. Вектор по п.19, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

24. Вектор по п.19, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты и терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

25. Рекомбинантный экспрессионный вирусный амплифицирующийся вектор для получения в клетках растения тяжелой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, содержащий последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, 5’-нетранслирумый участок генома Х-вируса картофеля, ген полимеразы X-вируса картофеля, второй промотор субгеномной РНК Х-вируса картофеля, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и тяжелой цепи антитела, 3’-нетранслируемый участок генома Х-вируса картофеля и терминатор транскрипции.

26. Вектор по п.25, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, промотор гена нопалин-синтетазы (nos), промотор гена октопин-синтетазы (ocs), промотор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

27. Вектор по п.25, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, терминатор гена нопалин-синтетазы (nos), терминатор гена октопин - синтетазы (ocs), терминатор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или терминатор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

28. Вектор по п.25, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

29. Вектор по п.25, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

30. Вектор по п.25, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты и терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

31. Рекомбинантный вирусный амплифицирующийся вектор для получения в клетках растения тяжелой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, содержащий последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, 5’-нетранслирумый участок генома вируса табачной мозаики крестоцветных, ген полимеразы вируса табачной мозаики крестоцветных, включающий первый промотор субгеномной РНК вируса табачной мозаики крестоцветных, ген транспортного белка, включающий второй промотор субгеномной РНК вируса табачной мозаики крестоцветных, нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:2, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и тяжелой цепи антитела, 3’-нетранслируемый участок генома вируса табачной мозаики крестоцветных и терминатор транскрипции.

32. Вектор по п.31, в котором промотор представляет собой промотор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, промотор гена нопалин-синтетазы (nos), промотор гена октопин-синтетазы (ocs), промотор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

33. Вектор по п.31, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты, терминатор гена нопалин-синтетазы (nos), терминатор гена октопин - синтетазы (ocs), терминатор гена маннопин-синтетазы (mas) Agrobacteruim tumefaciens или терминатор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

34. Вектор по п.31, в котором промотор представляет собой промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana.

35. Вектор по п.31, в котором терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

36. Вектор по п.31, в котором промотор представляет собой промотор гена актин 2 Arabidopsis thaliana и терминатор транскрипции представляет собой терминатор 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

37. Способ получения антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, в растении, включающий стадии:

- обеспечение первого экспрессионного вектора, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и легкой цепи антитела; где указанный экспрессионный вектор содержит следующие последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:1 и терминатор транскрипции;

- обеспечение второго экспрессионного вектора, содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, состоящую из сигнального пептида, обеспечивающего секрецию антитела, и тяжелой цепи антитела; где указанный экспрессионный вектор содержит следующие последовательно расположенные элементы: функционально активный в клетках растения промотор, нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:2 и терминатор транскрипции;

-получение штамма Agrobacterium tumefaciens, трансформированного первым экспрессионным вектором, и штамма Agrobacterium tumefaciens, трансформированного вторым экспрессионным вектором;

- совместное введение штамма Agrobacterium tumefaciens, трансформированного первым экспрессионным вектором, и штамма Agrobacterium tumefaciens, трансформированного вторым экспрессионным вектором, в клетки растения рода Nicotiana;

- культивирование полученного растения и сбор листьев;

- выделение и очистка антител из собранных листьев.

38. Способ по п.37, согласно которому

первый экспрессионный вектор представляет собой рекомбинантный экспрессионный неамплифицирующийся вектор по п. 1 и

второй экспрессионный вектор представляет собой рекомбинантный экспрессионный неамплифицирующийся вектор по п. 19, или

первый экспрессионный вектор представляет собой рекомбинантный вирусный амплифицирующийся вектор на основе X-вируса картофеля по п. 7 и

второй экспрессионный вектор представляет собой рекомбинантный вирусный амплифицирующийся вектор на основе вируса табачной мозаики крестоцветных по п. 31 или

первый экспрессионный вектор представляет собой рекомбинантный вирусный амплифицирующийся вектор на основе вируса табачной мозаики крестоцветных по п. 13 и

второй экспрессионный вектор представляет собой рекомбинантный вирусный амплифицирующийся вектор на основе X-вируса картофеля по п. 25.

39. Способ по п. 37, согласно которому растение выбирают из Nicotiana benthamiana, Nicotiana tabacum, Nicotiana excelsior.

40. Способ по п. 37, согласно которому растение представляет собой Nicotiana benthamiana.

41. Способ по п.37, согласно которому растения культивируют в почве в условиях теплицы или климатической камеры со световым режимом: день 16 часов, ночь 8 часов.

42. Антитело, специфически связывающее домен димеризации экзёоклеточной части онкобелка HER2/neu, полученное способом по любому из пунктов 37-41.

43. Применение антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, по п.42 в качестве терапевтического агента для лечения HER2/neu-позитивного рака молочной железы.

44. Применение по п.43, которое дополнительно включает введение второго терапевтического агента, ингибирующего активность HER2/neu.

45. Применение по п.43, в котором вторым терапевтическим агентом является ингибитор тирозинкиназы.

46. Применение по п.43, в котором ингибитор тирозинкиназы представляет собой лапатиниб.

47. Применение по п.44, в котором второй терапевтический агент представляет собой антитело, взаимодействующее с экзоклеточной частью онкобелка HER2/neu.

48. Применение по п.47, в котором второй терапевтический агент представляет собой антитело трастузумаб или фитотрастузумаб.

49. Применение антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, по п.43 при изготовлении лекарственного средства для лечения HER2/neu-позитивного рака молочной железы.

Реферат

Изобретение предусматривает рекомбинантные экспрессионные неамплифицирующиеся векторы, рекомбинантные вирусные амплифицирующиеся векторы на основе X-вируса картофеля и рекомбинантные вирусные амплифицирующиеся векторы на основе вируса табачной мозаики крестоцветных, предназначенные для получения в клетках растения легкой и тяжелой цепи антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu. Изобретение также предусматривает способ получения антитела, специфически связывающего домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, в растении, антитело, специфически связывающее домен димеризации экзоклеточной части онкобелка HER2/neu, полученное предложенным способом, и его применение в качестве терапевтического агента для лечения HER2/neu-позитивного рака молочной железы.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8