Практические задания по медицинской микробиологии, вирусологии (стр. 4 )

Написать методы индикации вирусов:

в клеточных культурах тканей  и  в курином эмбрионе:

_________________________________  ___________________________

_________________________________ ___________________________  _________________________________  ___________________________  _________________________________  ___________________________  _________________________________  ___________________________

Установить биовар холерного вибриона с помощью определения его чувствительности к диагностическим фагам. Определить фаговары культур золотистого стафилококка, и дать заключение об источниках (источнике) инфекции. Оформить протокол. Результаты определения фаговаров культур золотистого стафилококка:

       

  Культура № 1  Культура № 2  Культура № 3

Культура № 1 ___________________________________________________

Культура № 2 ___________________________________________________

Культура № 3 ___________________________________________

Заключение по результатам фаготипирования культур _____________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________ 

Занятие  №9

Контрольное занятие №1.

I. Практические задания:

Микроскопировать препараты - мазки с помощью иммерсионного объектива и определить морфологические свойства бактерий (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Bacillus anthracis), дрожжеподобных грибов рода Candida. Дать характеристику культуральным свойствам бактерий на мясо-пептонном агаре в чашках Петри. Произвести учет ферментативных свойств исследуемых культур бактерий. Среды для культивирования анаэробных бактерий (Китта-Тароцци, Вильсон-Блера). Проанализировать результаты фаготипирования исследуемых культур Staphylococcus aureus и дать эпидемиологическое заключение: из одного источника инфекции или нескольких выделены культуры. Дать характеристику культуральным свойствам дрожжеподобных грибов рода Candida на агаре Сабуро в чашках Петри.

II.  Тестовый контроль знаний.

III. Устный опрос

Тема: «Морфология, структура и культивирование микроорганизмов».

Принципы микроскопии. Основные методы микроскопирования. Методы окраски. Изучение морфологии и отдельных структур микроорганизмов. Систематика микроорганизмов (прокариоты, грибы, простейшие, вирусы). Принципы классификации. Понятие о виде как основной таксономической единице. Таксономические категории. Номенклатура. Основные отличия прокариотов от эукариотов. Строение и химический состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Бактерии с дефектом синтеза клеточной стенки: протопласты, сферопласты, L – формы. Капсулы. Жгутики. Пили. Химический состав и функциональное значение этих образований у бактерий. Методы выявления. Патогенные представители. Споры и спорообразование. Химический состав и функциональное значение спор. Методы выявления. Патогенные представители. Метаболизм бактерий. Ферменты бактерий и их роль в обмене веществ. Конститутивные и индуцибельные, экзо - и эндо - ферменты. Практическое использование биохимической активности бактерий. Типы и механизмы питания бактерий. Транспорт питательных веществ в клетку. Дыхание бактерий. Основные типы биологического окисления субстрата. Аэробы, анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения популяции бактерий в стационарных условиях. Периодическое культивирование. Непрерывное культивирование, его значение в биотехнологии. Основные принципы и методы культивирования бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение. Классификация питательных сред и требования, предъявляемые к ним. Бактериологический метод исследования, его этапы. Выделение чистых культур аэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида. Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида. Царство вирусов. Классификация. Морфология и строение вирионов. Химический состав, функции структурных элементов. Прионы. Вироиды. Работы . Механизмы взаимодействия вирусов с соматической клеткой. Продуктивная и интегративная формы. Особенности репродукции РНК - и ДНК – содержащих вирусов. Методы культивирования вирусов в культурах клеток, курином эмбрионе, в организме лабораторных животных. Классификация и характеристика клеточных культур. Среды № 000, Игла, их назначение. Методы индикации вирусной репродукции в клеточных культурах и курином эмбрионе. Сущность реакций вирусной гемадсорбции и гемагглютинации, их применение. Морфология и ультраструктура вирусов бактерий - бактериофагов. Стадии взаимодействия вирулентного и умеренного фага с бактериальной клеткой. Лизогения. Фаговая конверсия. Практическое применение фагов. Патогенные грибы. Морфология, структура, культивирование.

Дата__________________

Занятие  №10

Тема:  Генетика микроорганизмов. Структура генетического аппарата у бактерий и вирусов. Модификации. Мутации. Генетические рекомбинации. Генетика вирусов. Особенности изменчивости у вирусов.

Вопросы для обсуждения:

Организация  генетического материала бактерий и вирусов. Генотип  и фенотип. Внехромосомные факторы наследственности бактерий: IS-последовательности, транспозоны, плазмиды, вирусы. F – плазмида, её функция. Конъюгативные и неконъюгативные плазмиды. R – плазмида, её значение. Методы выявления чувствительности бактерий к антибиотикам. Плазмиды бактериоциногенности. Определение бактериоциновара и бактериоциногеновара. Плазмиды, кодирующие признаки патогенности. Сущность модификационной изменчивости. Мутации. Молекулярный механизм мутаций. Репарации. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция, коньюгация. Основы генетической инженерии и биотехнологии.

Практические задания:

Выявить изменчивость морфологических свойств бактерий под воздействием:

а) фенола (микроскопировать мазки из колоний Proteus vulgaris, образованных на обычном МПА и на 0,1% феноловом МПА, окрашенных фуксином Пфейффера).

Рис. 1. Proteus vulgaris в препарате  Рис. 2. Proteus vulgaris в препарате

  из колонии на МПА  из колонии на 0,1% феноловом МПА

б) пенициллина (микроскопировать мазки из колоний Bacillus аnthracis, образованных на МПА с пенициллином, окрашенных метиленовым синим - «жемчужное ожерелье»).

Рис. 3. B. anthracis в препарате  Рис. 4.  B. anthracis в препарате из

  из  колоний на МПА  колоний на МПА с пенициллином

  («жемчужное ожерелье»)

Изучить изменчивость культуральных свойств: S - и R - формы колоний эшерихий. Определить фенотипические проявления R-плазмиды бактерий (множественная устойчивость к  антибиотикам) методом стандартных дисков. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Col-плазмиды с помощью методов колицинотипирования и колициногенотипирования.

Рис. 5. Метод колицинотипирования  Рис. 6. Метод колициногенотипирования

Вывод: культура E. сoli чувствительна к колицинам__________________

Вывод: культура E. сoli продуцирует колицины: ______________________

Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Hly-плазмиды (продукция гемолизина) у E. coli на кровяном агаре.

Рис. 7. Продукция гемолизина Е. coli

Выявить и изучить ауксотрофные мутанты эшерихий, полученные под воздействием ультрафиолетовых лучей:

а) сравнить результаты посева методом реплик облученной УФ-лучами культуры на полноценной (МПА) и минимальной средах;

Рис. 8. Рост культуры на  полноценной среде

Рис. 9. Рост культуры на минимальной среде

б) установить потребности выделенных ауксотрофных мутантов в метаболите на селективной среде, содержащей аминокислоты.

Лизин	Лейцин	Гистидин	Метионин	Триптофан

Вывод: ______________________________________________________

Учесть результаты опыта конъюгации между E. coli F+, прототроф, Strs и  E. coli F-, ауксотроф по метионину, Strr. Определить признак, приобретенный рекомбинантом, образующим колонии на минимальной плотной среде, содержащей стрептомицин 1000 мкг/мл.

Записать результаты опыта конъюгации.

Донор E. coli F+, Strs  х  Реципиент E. coli F-, Met -, Strr

Селективная среда: минимальная плотная среда, содержащая стрептомицин 1000мкг/мл.

Выявлены колонии рекомбинантов на селективной среде в результате постановки опыта конъюгации.

Донор ____________________________________________________________

Реципиент  ________________________________________________________

Рекомбинант  ______________________________________________________

Вывод:  ___________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие  №11

Тема:  Генетические методы исследования в диагностике инфекционных болезней. Полимеразная цепная реакция. Гибридизация нуклеиновых кислот. Основы генной инженерии и биотехнологии.