Таблица 1.
Классификация сальмонелл по антигенной структуре (сокращенный вариант).
Серогруппа, вид или серовар | О-антиген | Н-антиген Фаза-1 | Н-антиген Фаза-2 |
Серогруппа А S. paratyphi A | 1, 2, 12 | a | (1,5) |
Серогруппа B S. schottmuеlleri S. typhimurium | 1,4,(5),12 1,4,(5),12 | b i | 1,2 1,2 |
Серогруппа C S. cholerаesuis | 6,7 | с | 1,5 |
Серогруппа D S. typhi S. enteritidis S. dublin S. moscow | 9,12,Vi 1,9,12 1,9,12 9,12 | d g, m g, p b, g | - (1,7) - - |
5. Произвести учет результатов развернутой реакции агглютинации для определения титра антител в сыворотке крови больного с подозрением на брюшной тиф, используя схему постановки реакции, зарисовать полученные результаты.
Таблица 2.
Схема постановки развернутой реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке крови больного и определения их титра
Ингредиенты | Номер пробирки | ||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | Контроль сыворотки | Контроль диагностикума | |
0,85% р-р NaСl, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | - | 1,0 |
Сыворотка крови больного в разведении 1:50, мл | 1,0 → | 1,0 → | 1,0 → | 1,0 → | 1,0 → | 1,0 → | - |
Полученное разведение сыворотки крови больного | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | ||
Диагностикум, в каплях | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1:100 | 1 |
Инкубация при 37є С в течение 2 часов, затем при комнатной температуре 18-20 часов.
Выводы: титр антител к О-антигену Salmonella typhi в сыворотке крови больного составляет 1:___.
6. Ознакомиться с методом постановки реакции кольцепреципитации для выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы. Зарисовать полученные результаты.
а б
Рис. 2. Реакция кольцепреципитации:
а – контроль, отрицательный результат; б – опыт, положительный результат.
Подпись преподавателя ________________
Дата__________________
Занятие №17
Тема: Серологические реакции, типы, механизмы. Использование в диагностике инфекционных заболеваний. Иммунопрофилактика и иммунотерапия.
Вопросы для обсуждения:
Реакция связывания комплемента (РСК). Практическое применение. Иммунные реакции с метками: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), иммунный блоттинг (ИБ). Практическое применение. Вакцины. Группы вакцин по способу приготовления. Гомологичные и гетерологичные иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Получение. Серотерапия и серопрофилактика инфекционных болезней.Практические задания:
1. Ознакомиться с учетом результатов РСК (демонстрация отрицательной и различной степени интенсивности положительной реакции (табл. 3).
Таблица 1.
Интенсивность реакции оценивают следующим образом:
“ ++++ “ | - полная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами не окрашена, эритроциты в осадке; |
“ +++ “ | - неполная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами слабо-розового цвета, значительный осадок эритроцитов; |
“ ++ “ | - частичная задержка гемолиза: жидкость красная, небольшой осадок эритроцитов; |
“ + “ | - слабая задержка гемолиза: жидкость интенсивно красная, осадок эритроцитов незначительный; |
“ – “ | - полный гемолиз (лаковая кровь). |
Таблица 2.
Схема основного опыта реакции связывания комплемента
Первая система | Вторая система | ||||
Ингредиенты (в мл) | Пробирки | Ингредиенты (в мл) | 4-я пробирка | ||
1-я опытная | 2-я контроль сыворотки | 3-я контроль антигена | |||
Исследуемая сыворотка, разведенная 1:5 | 0,5 | 0,5 | - | Гемолитическая сыворотка в тройном титре | 2,0 мл |
Антиген в рабочей дозе | 0,5 | - | 0,5 | ||
Комплемент в рабочей дозе | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 3% взвесь эритроцитов барана | 2,0 мл |
0,85% раствор NaCl | - | 0,5 | 0,5 | Пробирки ставят в термостат при t 37єС на 30 минут | |
Пробирки ставят в термостат при t 37єС на 1 час | ↓ | ||||
1,0 | 1,0 | 1,0 | ← смешивание ингредиентов |
После смешивания ингредиентов 1-й и 2-й систем, пробирки ставят в термостат при tє 37єС на 1 час. Результат учитывают предварительно после извлечения пробирок из термостата и окончательно после пребывания их в течение 18-20 часов в холодильнике.
5. Нарисовать схемы постановки РИФ, ИФА.
А. | Схема прямой РИФ |
Б. | Схема непрямой РИФ |
Нарисовать схемы твердофазного ИФА:
А. | Схема прямого ИФА |
Б. | Схема непрямого ИФА |
6. Изучить схему постановки иммуноблоттинга. 
Рис. 3. Схема иммуноблоттинга.
Подпись преподавателя ________________
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 |
