Методические указания по биотестированию природных и сточных вод (стр. 14 )

"Рис.4.1. Микроаквариум для размещения и подсчета инфузорий"

"Рис.4.2. Капилляр для отбора инфузорий"

4.5. Отбор и подготовка проб для биотестирования

Пробы сточных вод отбирают в объеме 100 мл.

Биотестирование проб воды проводят не позднее 6 часов после их отбора, при невозможности проведения анализа в указанный срок пробы воды охлаждают (+4°С). Не допускается консервирование проб с помощью химических консервантов. В качестве контрольной используют водопроводную воду, которую дехлорируют путем отстаивания и аэрирования с помощью микрокомпрессора в течение 7 суток.

Для определения токсичности отдельных веществ или их смеси из них готовят растворы путем добавления определенных количеств маточного раствора исследуемого(ых) вещества(в) в водопроводную дехлорированную воду. Маточные растворы готовят на дистиллированной воде.

При проведении биотестирования температура исследуемой пробы должна соответствовать температуре культуры.

При наличии в пробе крупнодисперсных взвесей необходима фильтрация.

При проведении биотестирования значения рН тестируемых растворов должно находиться в интервале от 6,5 до 7,6.

Биотестирование проводят в помещении, не содержащем вредных паров и газов, при рассеянном свете и температуре воздуха 18-28°С.

4.6. Проведение биотестирования

Для биотестирования неразбавленной сточной воды или ее разбавлений, а также растворов отдельных токсических веществ (смеси веществ) используют микроаквариум с лунками, который помещают на предметный столик стереомикроскопа. Одну из лунок заполняют культурой инфузорий с помощью капиллярной пипетки.

В свободные лунки капиллярной пипеткой рассаживают по 10-12 особей в каждую лунку, так чтобы на одну пробу тестируемой воды приходилось не менее 30 инфузорий в трех лунках (трехкратная повторность). При посадке тест-объекта количество культуральной жидкости в лунке не должно превышать 0,02 мл. Три лунки используют в качестве контрольных.

После посадки инфузорий наливают в контрольные лунки по 0,3 мл дехлорированной водопроводной воды, в опытные - по 0,3 мл пробы тестируемой воды. Отмечают время начала биотестирования и подсчитывают под микроскопом количество особей в каждой лунке.

Микроаквариум с заполненными лунками помещают в чашку Петри, на дно которой кладут фильтровальную бумагу, смоченную водой, чтобы не испарялось содержимое лунок, и выдерживают в течение 1 часа при температуре 22-24°С. По истечении этого времени производят подсчет выживших особей под микроскопом. Выжившими считаются инфузории, которые свободно перемещаются в толще воды. Обездвиженных особей относят к погибшим. Результаты подсчета записывают в рабочий журнал.

Рабочий журнал

┌──────┬─────┬─────────────────────────────────────────────────┬────────┐

│ Дата │  N  │  Количество инфузорий в тестируемой воде, экз.  │  Тест - │

│  │пробы├────────────────────────┬────────────────────────┤параметр│

│  │  │  исходное  │  через 1 ч  │  │

│  │  ├───────────┬────────────┼───────────┬────────────┤  │

│  │  │повторность│среднее ари-│повторность│среднее ари-│  │

│  │  │1  2  3│фметическое │1  2  3│фметическое │  │

├──────┼─────┼───────────┼────────────┼───────────┼────────────┼────────┤

│  │  1  │  │  │  │  │  │

│  │  2  │  │  │  │  │  │

│  │  3  │  │  │  │  │  │

│  │  4  │  │  │  │  │  │

└──────┴─────┴───────────┴────────────┴───────────┴────────────┴────────┘

4.7. Обработка и выражение результатов

Результаты биотестирования считаются правильными и учитываются, если гибель инфузорий в контрольных лунках не превышала 10%.

После подсчета особей в каждой из трех лунок находят среднее арифметическое количество инфузорий, выживших в тестируемой воде. Затем по формуле 4.1 рассчитывают тест-параметр (А) - процент погибших особей по отношению к исходному количеству инфузорий:

  (Хn - Xk)

  А = ------------- х 100%  (4.1)

  Xn

где: А - количество погибших инфузорий, %;

Xn - среднее арифметическое исходного количества особей;

Xk - среднее арифметическое количество выживших особей в тестируемой воде через 1 ч.

Тестируемую воду оценивают как оказывающую острое летальное действие, если в течение 1 ч в ней гибнет 50% и более инфузорий.

При определении острой летальной токсичности разбавлений пробы сточной воды или водного раствора отдельного вещества (смеси) устанавливают среднюю летальную кратность разбавлений (среднюю летальную концентрацию), вызывающую гибель 50% тест-объектов в течение 1 часа - ЛКр50 - 1 ч (ЛК50 - 1 ч). Для построения графика с целью расчета ЛКр50 - 1 ч (ЛК50 - 1 ч) тест-параметр выражают в условных единицах - пробитах, а кратность разбавления (концентрацию) - в логарифмических величинах. Таблица перевода тест-параметра в пробиты представлена в таблице 4.1.

Таблица 4.1

Таблица пробитных величин

┌───────┬──────┬───────┬──────┬───────┬──────┬───────┬──────┬───────┬──────┐

│Процент│Проби-│Процент│Проби-│Процент│Проби-│Процент│Проби-│Процент│Проби-│

│гибели │ты  │гибели │ты  │гибели │ты  │гибели │ты  │гибели │ты  │

│инфузо-│  │инфузо-│  │инфузо-│  │инфузо-│  │инфузо-│  │

│рий  │  │рий  │  │рий  │  │рий  │  │рий  │  │

├───────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┤

│  1  │ 2,67 │  20  │ 4,16 │  40  │ 4,75 │  60  │ 5,25 │  80  │ 5,84 │

├───────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┤

│  2  │ 2,95 │  21  │ 4,19 │  41  │ 4,77 │  61  │ 5,28 │  81  │ 5,88 │