Методические указания по биотестированию природных и сточных вод (стр. 3 )

Колба для разбавляющей (контрольной) воды (РВ) емкостью 3-5 л.

Мерные колбы на 100 мл (1 шт.), на 250 мл (1 шт.), на 500 мл (2 шт.).

140 рачков в возрасте 0,1-8 часов. Разница в возрасте особей не должна превышать 4 часов.

Подготовка опыта

Приготовить 100 мл 0,1% раствора К2Сr2О7 (1000 мг/л).

Для этого 0,1 г просушенного К2Сr2О7 растворить в 100 мл дистиллированной воды.

Расставить стаканы с надписями по следующей схеме:

  К1  0,25 мг/л  0,5 мг/л  0,75 мг/л  1 мг/л  2 мг/л  3 мг/л

  К2  0,25 мг/л  0,5 мг/л  0,75 мг/л  1 мг/л  2 мг/л  3 мг/л

  К3  0,25 мг/л  0,5 мг/л  0,75 мг/л  1 мг/л  2 мг/л  3 мг/л

  К4  0,25 мг/л  0,5 мг/л  0,75 мг/л  1 мг/л  2 мг/л  3 мг/л

Из 0,1% маточного раствора К2Сr2О7 приготовить серию растворов с концентрациями 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3 мг/л по следующей схеме: (При всех последующих разведениях используется только профильтрованная биологизированная вода (РВ)).

а) 0,5 мл 0,1% раствора К2Сr2О7 + 499,5 мл РВ = 0,5 л (1 мг/л). Из полученного раствора 200 мл разливается поровну по четырем стаканам с надписью 1 мг/л (по 50 мл).

б) Оставшиеся 300 мл раствора (1 мг/л) идут на приготовление растворов с концентрациями 0,25 и 0,5 мг/л по следующей схеме:

125 мл 1 мг/л + 375 мл РВ = 500 мл (0,25 мг/л) (200 мл разливают поровну по четырем стаканам с надписью 0,25 мг/л).

100 мл 1 мг/л + 100 мл РВ = 200 мл (0,5 мг/л) (200 мл разливают поровну по четырем стаканам с надписью 0,5 мг/л).

в) 1 мл 0,1% раствора К2Сr2О7 + 499 мл РВ = 500 мл (2 мг/л) (200 мл разливают поровну по четырем стаканам с надписью 2 мг/л).

г) 1,5 мл 0,1% К2Сr2О7 + 498,5 мл РВ = 500 мл (3 мг/л). Из 500 мл полученного раствора 200 мл разливают поровну по четырем стаканам с надписью 3 мг/л.

д) Оставшиеся 300 мл раствора (3 мг/л) идут на приготовление раствора с концентрацией 0,75 мг/л по следующей схеме:

125 мл 3 мг/л + 375 мл РВ = 500 мл (0,75 мг/л) (200 мл разливают по четырем стаканам с надписью 0,75 мг/л).

е) В стаканы К1-К4 (контроль) разливают по 50 мл биологизированной воды.

Стаканы с растворами расставить в люминостате.

Произвести замеры температуры в люминостате (норма 23-27°С), рН растворов (норма 6,5-8,5), концентрации растворенного кислорода (перед началом опыта 6 мг/л, в конце опыта - не менее 4 мг/л). Если начальная концентрация растворенного кислорода ниже 6 мг/л, то перед разливом растворов осуществляется их аэрация до достижения концентрации растворенного кислорода 7-8 мг/л. Аэрация может быть осуществлена с помощью аквариумного микрокомпрессора. Режим освещения в люминостате - 12-часовой с интенсивностью 400-600 люкс [2].

Посадка рачков

Во все стаканы посадить по 5 рачков в возрасте 0,1-8 часов. При этом разница в возрасте рачков не должна превышать 4 часа.

Эксперимент

Подсчет выживших рачков производят визуально через 24 часа. Во время опыта рачков не кормят.

Результаты заносят в протокол опыта (табл.2.2).

Обработка результатов выполняется аналогично пункту 2.3.

Таблица 2.2

Протокол опыта

Дата _____________ Температура, рН, концентрация О2 (в начале и  в  конце

опыта)___________________________________________________________________

┌──────┬────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐

│Время │  Количество выживших дафний (экз.)  │

│от на-├──────────────┬──────────┬───────────┬───────────┬───────────┬───────────┬──────────┤

│чала  │  Контроль  │0,25  мг/л│  0,5 мг/л │ 0,75 мг/л │  1 мг/л  │  2  мг/л  │  3 мг/л  │

│опыта ├──────────────┼──────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────┼──────────┤

│  │  _ │  _ │  _  │  _  │  _  │  _  │  _ │

│  │ 1  2  3  4 Xk│1 2 3 4 Хо│1 2 3 4 Хо │1 2 3 4 Хо │1 2 3 4 Хо │1 2 3 4 Хо │1 2 3 4 Хо│

├──────┼──────────────┼──────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────┼──────────┤

│ 24 ч │10 10 10 10 10│9 9 9 9 9 │8 9 8 9 8,5│7 7 8 8 7,5│5 5 6 5 5,3│4 5 4 4 4,3│2 2 2 2 2 │

└──────┴──────────────┴──────────┴───────────┴───────────┴───────────┴───────────┴──────────┘

2.5. Определение токсичности сточной (природной) воды
на Daphnia Magna

Материалы

Стаканы емкостью 150-250 мл (8-16 штук).

Колба для разбавляющей (контрольной) воды емкостью 3 л.

Мерные колбы на 100 мл (1 шт.), 1 л (1 шт.).

Мерный цилиндр или мерный стакан на 150-200 мл.

От 40 до 80 рачков в возрасте 4-24 часа. Разница в возрасте особей не должна превышать 4 часов.

Подготовка опыта

Расставить 16 стаканов с надписями по следующей схеме:

  К1  Ст. вода б/р N 1  Ст. вода 1:10 N 5  Ст. вода 1:100 N 9

  К2  Ст. вода б/р N 2  Ст. вода 1:10 N 6  Ст. вода 1:100 N 10

  КЗ  Ст. вода б/р N 3  Ст. вода 1:10 N 7  Ст. вода 1:100 N 11

  К4  Ст. вода б/р N 4  Ст. вода 1:10 N 8  Ст. вода 1:100 N 12

Разлить по стаканам контрольную (разбавляющая вода) и испытуемую воду (ст. вода) по 150 мл на стакан:

К1-К4 - 600 мл разбавляющей воды (РВ),

Ст. вода б/р (без разбавления) - 600 мл (4 х 150 мл).

Ст. вода 1:10 - 100 мл Ст. воды б/р + 900 мл РВ = 1 л Ст. вода 1:10.

Ст. вода 1:100 - 100 мл Ст. воды 1:10 + 900 мл РВ = 1 л Ст. вода 1:100

Стаканы с растворами расставить в люминостате.

Произвести замеры температуры в люминостате (норма 18-22°С), рН растворов (норма 6,5-8,5), концентрации растворенного кислорода (перед началом опыта не менее 6 мг/л, в конце опыта - не менее 2 мг/л).

В обязательном порядке скорректировать рН проб до 6,5-8,5 с помощью растворов NaOH или НСl, если они не соответствуют указанным выше нормативам. Насыщенность тестируемых проб кислородом также должна лежать в указанных рамках.

Режим освещения в люминостате - 12-часовой с интенсивностью 400-600 люкс.

Посадка рачков

Во все стаканы посадить по 5 рачков в возрасте строго 4-24 часа.

Эксперимент

Подсчет погибших рачков производят визуально через 1, 6, 24, 48, 72, 96 часов (окончание определения острой токсичности). Смертность рачков в контроле не должна превышать 10%.

Результаты заносят в протокол опыта.

Таблица 2.3

Протокол опыта

Дата __________ Температура,  рН,  концентрация  О2  (в  начале  и конце

опыта)___________________________________________________________________

Место отбора пробы ______________________________________________________

┌──────────────────┬───────────┬─────────────────────────────┬──────────┐

│Тестируемая  вода│Повторности│  Количество выживших рачков │Примечания│