Занятие № 4 «__»__________2006 г.
Тема: Морфология актиномицет, микоплазм, риккетсий, хламидий и грибов
План занятия
1. Актиномицеты: методы микроскопического изучения, морфология чистой культуры и строение друз.
2. Морфология и ультраструктура риккетсий.
3. Хламидии: выявление хламидий по Романовскому-Гимзе.
4. Изучение морфологии и структуры микоплазм и L-форм в фазовом контрасте.
5. Классификация и морфологические особенности грибов: отличительные особенности Mucor, Aspergillus, Penicillium, Saccharomyces, Candida. Методы изучения морфологии грибов в нативном и окрашенном состоянии.
6. Методы выделения чистых культур бактерий: техника посева смеси культур на плотные питательные среды.
Методические указания к выполнению практических заданий
1. Актиномицеты – грамположительные ветвящиеся нити, напоминающие мицелий грибов или имеющие вид полиморфных палочек в результате фрагментации этих нитей. Актиномицеты – прокариоты и не являются гибами (эукариоты). Менее высокоорганизованные актиномицеты, к которым относятся возбудители актиномикоза, размножаются фрагментами гифов, более высокоорганизованные – спорами.
2. Риккетсии – бактериоподобные мелкие полиморфные грамотрицательные микроорганизмы, являющиеся внутриклеточными паразитами. Размножаются бинарным делением. Различают кокковидные, палочковидные, бациллярные, нитевидные формы риккетсий (по Здродовскому). Риккетсии окрашиваютпо способу Романовского-Гимзы и по Здродовскому, последний метод рекомендуется для обнаружения риккетсий в зараженных тканях.
Метод Здродовского – облегченная модификация метода Циля-Нильсена, основан на выявлении кислотоустойчивости риккетсий.
Фиксированный на пламени препарат-мазок окрашивают разведенным карболовым фуксином (без нагревания), промывают водой, обесцвечивают слабым раствором органической (например, 0,5% лимонной, 0,15% уксусной) или минеральной кислоты (0,01% соляной), после промывания докрашивают метиленовым синим и промывают водой. Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет и при внутриклеточном расположении хорошо видны на голубом фоне цитоплазмы, ядро клетки имеет синий цвет.
3. Хламидии – мелкие бактериоподобные грамотрицательные микроорганизмы, обладающие облигатным паразитизмом и сложным циклом внутриклеточного развития. Различают элементарные тельца (ЭТ) – внеклеточные, инфекционные и ретикулярные тельца (РТ) – внутриклеточные, вегетативные, а также промежуточные формы. ЭТ-очень мелкие, округлой формы, с компактным нуклеоидом и плотной клеточной стенкой. Они проникают в клетку, внутри вакуоли превращаются в РТ – более крупные с рыхлым нуклеоидом и тонкой клеточной стенкой, которые проходят внутриклеточный цикл развития путем многократного деления, образуют микроколонии; созревшие хламидийные клетки превращаются в зрелые инфекционные ЭТ и после разрушения клеточной мембраны покидают клетку. Освободившиеся ЭТ внедряются в другие клетки, где цикл развития повторяется.
4. Микоплазмы – прокариотные полиморфные микроорганизмы, лишенные клеточной стенки. Они могут расти на специальных питательных средах. В культуре микоплазм можно одновременно обнаружить крупные шаровидные тела (до 10 мкм), мелкие зерна (0,1-0,2 мкм), палочковидные и нитевидные клетки и др. Микоплазмы размножаются бинарным делением, фрагментацией крупных тел и нитей с образованием мелких зерен, почкованием. Колонии микоплазм на питательной среде имеют компактный центр и полупрозрачные края («яичница глазунья»). Морфологически близки микоплазмам так называемые L - формы бактерий (стабильные и нестабильные), почти или полностью утратившие клеточную стенку. L-формы образуются под действием антибиотиков (например, пенициллина, цефалоспорина). В связи с хрупкостью микоплазм и L-форм их морфологию изучают в нативном состоянии методом фазово-контрастной микроскопии.
5. Грибы – бесхлорофильные, гетеротрофные, эукариотические организмы, близкие низшим растениям, выделенные в царство грибов – MYCOTA. Различают макроскопические (шляпные) грибы и микроскопические, среди последних встречаются сапрофитные и патогенные представители. Истинные грибы – Eumycota – подразделяют на семь классов, большинство патогенных грибов относится к классу Deuteromycetes. Тело гриба – грибница – состоит из тонких нитей гифов, образующих мицелий: субстратный (вегетативный) и воздушный (продуктивный). У низших грибов мицелий несептирован (одноклеточный), у высших разделен перегородками (многоклеточный). Встречаются грибы, не образующие мицелий (дрожжи – Saccharomyces), а также образующие псевдомицелий (дрожжеподобные – Candida). Строение клетки грибов типично для эукариотов: в цитоплазме находится истинное ядро с ядрышком, множество других органелл (рибосомы, митохондрии, лизосомы, мезосомы, эндоплазмотический ретикулум, пластинчатый комплекс, липосомы, фагосомы, а также вакуоли). Протопласт одет цитоплазматической мембраной и плотной клеточной стенкой, в состав которой входят хитин, целлюлоза, глюканы, глюконуровая кислота, различные углеводы, липиды, белки, аминокислоты, пигменты. Грибы размножаются спорами, образующимися как бесполым, так и половым путем или только бесполым (у дейтеромицет), а также почкованием и фрагментацией.
