Новые технологии иммунодиагностики и механизмы иммунных нарушений при урогенитальных инфекциях у женщин репродуктивного возраста (стр. 6 )

Апробацию чувствительности системы видовой верификации хламидий и системы по обнаружению плазмиды проводили также на клиническом материале мазков-соскобов, полученных из уретры, цервикального канала, носоглотки у 15 человек. У 6 из 15 пациентов обнаружена DNA плазмидных штаммов Ch. trachomatis в соскобном материале из урогенитального тракта и у 1 пациента из носоглотки (табл. 10). Бесплазмидных штаммов не было обнаружено. У одного пациента из носоглотки системой видовой верификации обнаружена DNA Chl. pneumoniae. У 7 пациентов хламидии обнаружены не были.

Таким образом, предлагаемые ПЦР-тест-системы для детекции и дифферен-циации Сhl. pneumoniae и Ch. trachomatis позволяют одновременно не только верифицировать возбудителей у человека (в большем проценте случаев по

Таблица 10. Апробация предлагаемых ПЦР-тест-систем на клиническом материале

п/н	Место выделения	Система видовой верификации	Предложенная система для верификации плазмид
Ch. trachomatis	Chl. pneumoniae
1	цервикальный канал	+	-	+
2	цервикальный канал	-	-	-
3	цервикальный канал	+	-	+
4	цервикальный канал	+	-	+
5	цервикальный канал	-	-	-
6	цервикальный канал	-	-	-
7	цервикальный канал	+	-	+
8	уретра	+	-	+
9	уретра	+	-	+
10	уретра	-	-	-
11	уретра	-	-	-
12	уретра	-	-	-
13	уретра	-	-	-
14	носоглотка	-	+	-
15	носоглотка	+	-	+

Примечания: + - положительный результат; - – отрицательный результат.

сравнению с коммерческими ПЦР-тест-системами), но и осуществлять дифферен-циацию хламидий, оценивать их вирулентность (плазмидные и бесплазмидные штаммы, характер включений) благодаря специально подобранным праймерам для мультиплексного видового обнаружения возбудителей. Предлагаемые ПЦР-тест-системы могут применяться для прямой диагностики хламидий Сhl. pneumoniae и Ch. trachomatis в образцах клинического материала и в культуре клеток (повышение диагностической значимости культурального метода).

Проведенное генетическое типирование штаммов Ch. trachomatis позволил сгруппировать их в 5 групп:

1- штаммы, наиболее близкие к штаммам генотипа К (46,2%);

2- штаммы, наиболее близкие к штаммам генотипа G (23,1%);

3- штаммы, наиболее близкие к штаммам генотипа Е (19,2%);

4- штаммы, наиболее близкие к штаммам генотипа F (7,7%);

5- штаммы, наиболее близкие к штаммам генотипа J (3,8%).

Генотипирование с использованием сконструированных олигонуклеотид-ных праймеров в реакции ПЦР осуществлялось в два этапа без привлечения ферментативных реакций в присутствии рестриктаз как в ПДРФ-анализе. Первоначально проводили ПЦР с использованием специфических праймеров к группам генотипов. Далее, при положительной ПЦР с праймерами одной из групп, проводили ПЦР с генотипоспецифичными праймерами, тем самым определяя генотип штамма Ch. trachomatis. Установлено, что у трех пациентов выявилось инфицирование урогенитального тракта сразу двумя генотипами. Причем, в ассоциации всегда присутствовал генотип К и все случаи заболевания носили острый характер. При установлении встречаемости различных генотипов, в зависимости от пола пациента, выявлена следующая картина: у мужчин – генотип G (14%), генотип E (21%), генотип J (7%), генотип F (14%), генотип K (44%); у женщин – генотип G (37,5%), генотип E (19%), генотип K (43,5%). Установлено, что генотип G у женщин встречается чаще, чем у мужчин, генотипы K и E - распределены в равных долях, а генотипы F и J встречались в нашем эксперименте исключительно у мужчин.

Анализ штаммов, выделенных от людей (табл. 11), на чувствительность к антибиотикам показал наличие tet-гена у 1 (3,8%) из 26 штаммов, erm-гена у 4 (15,4%). Одновременное наличие детерминант устойчивости к тетрациклинам и макролидам было выявлено у 3 штаммов (11,5%). Штаммы, выделенные от людей, являлись носителями криптической плазмиды, не зависимо от определяемого генотипа; выделен один бесплазмидный штамм. Анализ данных проведенных исследований в сопоставлении с полученными ранее результатами позволяет выявить зависимость между генотипом и клиническими проявлениями хламидийной инфекции, вызванной штаммом с конкретным генотипом. Анализ данных исследования штаммов Ch. trachomatis, выделенных от людей, не показал связи наличия генов устойчивости к тетрациклинам и макролидам в штаммах с клиническими проявлениями заболевания. При анализе данных частоты встречаемости определенных генотипов у пациентов с различной степенью проявления клинических симптомов инфекционного процесса показано, что у пациентов с ярко выраженной симптоматикой генотип F встречается в 6,0% случаев, генотип E - в 11%, генотип G - в 22%, генотип К - в 61%. У пациентов со стертой клинической картиной результаты были следующими: генотип F встречается в 12,5% случаев, генотип E - в 37,5%, генотип G - в 25%, генотип К - в 12,5%, генотип J - в 12,5%. При оценке значимости штаммов определённых генотипов для клинических проявлений инфекционного процесса с помощью χ2- критерия Пирсона показано, что генотипы G, J, E и F следует считать незначимыми(χ2 < χ2 05, р > 0,05); они с одинаковой частотой определяют выраженность клинической симптоматики (острая или стёртая форма). А генотип К - значим (χ2 > χ2 05, р < 0,05), чаще всего определяет острое течение инфекции. Наблюдается взаимозависимость клинических проявлений с генотипами штаммов, утративших свойство экспрессии гена incA (является одним из факторов вирулентности). Так, отсутствие экспрессии регистрировалось у генотипа E, полученного от людей с хроническим воспалительными заболеваниями носоглотки. В работах, посвященных исследованию взаимозависимости урогенитальных серовариантов (генотипов) Ch. trachomatis с выраженностью клинических проявлений инфекции, представлены противоречивые результаты, что можно объяснить частично географическими вариациями, а также различиями в объёме исследований и популяционном составе. Не исключено, что данные различия могут быть связаны с определенными штаммами, которые нельзя различить на уровне серовариантов. Геномные сравнения серотипов помогают осветить неясные факты. Установление циркуляции определенных генотипов у человека, а также изучение антибиотикорезистентности штаммов Ch. trachomatis позволяет установить связь между клиникой проявления хламидийной инфекции и генотипом, определить оптимальный алгоритм лечения заболеваний урогенитального тракта.

Таблица 11. Генотипы и гены устойчивости к антибиотикам у штаммов Ch. trachomatis.

п/п	Генотип Ch. trachomatis	Носительство плазмиды	Определение генов устойчивости к антибиотикам	Выраженность клинических проявлений
Tet*	Erm*
1	G	+	-	-	Острый уретрит, цервицит. Обильные выделения, жжение при мочеиспускании
2	E	+	-	+	Хронический уретрит. Дизурия.
3	G	+	-	+	Острый уретрит, цервицит. Обильные выделения, жжение при мочеиспускании
4	G	+	-	-	Острый цервицит. Обильные выделения.
5	G	+	-	-	Хронический уретрит. Дизурия.
6	F	+	-	-	Острый уретрит, цервицит. Обильные выделения, жжение при мочеиспускании
7	К	+	+	+	Острый уретрит, цервицит. Обильные выделения, жжение при мочеиспускании
8	G	+	+	-	Хронический цервицит.
9	К	+	-	+	Хронический цервицит.
10	G	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
11	К	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
12	F	+	-	-	Хронический уретрит. Дизурия.
13	J	+	-	-	Хронический уретрит. Дизурия.
14	E	+	+	+	Хронический цервицит.
15	К	+	+	+	Острый цервицит. Обильные выделения.
16	К	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
17	К	+	-	-	Острый цервицит. Обильные выделения.
18	К	+	-	+	Острый цервицит. Обильные выделения.
19	К	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
20	К	+	-	-	Острый цервицит. Обильные выделения.
21	К	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
22	К	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
23	К	+	-	-	Острый уретрит, жжение при мочеиспускании, выделения.
24	E	+	-	-	Хронический цервицит.
25	E	+	-	-	Острый уретрит, цервицит. Обильные выделения, жжение при мочеиспускании
26	E	+	-	-	Острый уретрит, цервицит. Обильные выделения, жжение при мочеиспускании

Примечания:+- положительный результат;- – отрицательный результат; Tet*- ген устойчивости к тетрациклинам; Erm*- ген устойчивости к макролидам.