3.4.2. Центрифугирование
На этапе подготовки материала для анализа решающую роль играют условия центрифугирования.
В ходе этого процесса нужно убедиться, что пробирки вставлены в ротор таким образом, чтобы крышка не опиралась на стенки стакана центрифуги, иначе она может соскочить с пробирки.
Величину центробежного ускорения, воздействующего в области дна центрифугируемой пробирки, принято определять, как величину кратную ускорению свободного падения (g) и обычно обозначают ОЦУ (относительное центробежное ускорение или число g), которое можно рассчитать по формуле:
ОЦУ = 1,118 * 10-5 * r * n2, где
ОЦУ определяет во сколько раз центробежное ускорение у дна пробирки больше, чем ускорение свободного падения g (g = 9,81 м сек.2);
r - радиус (в см) от середины ротора до дна центрифугируемой пробирки на максимальном расстоянии от нее (при ее горизонтальном положении);
п - число оборотов ротора центрифуги в минуту (шт.).
Производитель (поставщик) центрифуги обязан предоставить в паспорте значение данного уравнения для конкретной центрифуги. Для удобства пользователя соотношение между числом оборотов центрифуги и относительным центробежным ускорением представляют в виде графика (номограммы).
Условия центрифугирования должны определяться с учетом ОЦУ, времени и температуры центрифугирования.
Пример расчета ОЦУ
Пусть радиус ротора центрифуги – 10 см, а предполагаемое число оборотов – 3 000 в минуту, тогда
ОЦУ =1,118 * 10-5 * 10 * 3 0002 = 1,118 * 10-5 * 10 * 9 000 000 = 1,118 * 900 = 1006,2 (g)
В центрифугах с горизонтальными откидывающимися стаканами образуется более стабильный гелевый барьер, чем в центрифугах фиксированным углом наклона. Когда барьер уже сформировался, пробирки не следует центрифугировать повторно. Реологические свойства барьера зависят от температуры образца. Они могут изменяться при его охлаждении до или после центрифугирования. Чтобы реологические свойства были оптимальными и образец во время центрифугирования не перегрелся, центрифугу с охлаждением следует установить на 25°С (77°F).
Самое удобное время центрифугирования стандартной человеческой крови составляет от 5 до 10 минут при 1000 - 2000 g, однако при использовании пробирок с гелем скорость центрифугирования устанавливается в соответствии с инструкцией к этим пробиркам. ОЦУ и время центрифугирования находятся в обратной зависимости друг к другу, т. е. при удвоении времени центрифугирования можно уменьшить ОЦУ на половину и наоборот. При подборе режима центрифугирования следует остерегаться гемолиза. Более продолжительное время центрифугирования или же более высокое ОЦУ при том же времени центрифугирования часто, особенно у тяжелобольных пациентов, приводит к частичному или полному гемолизу.
3.4.3. Расчет количества материала для исследований
Важно обращать внимание на то, что бы для исследования забиралось достаточное количество материала. В настоящее время при выполнении биохимических исследований на современных анализаторах, как правило, достаточно 1 мл сыворотки или плазмы для проведения 20 исследований.
Количество собираемой крови зависит от числа запланированных анализов и требуемых для них объёмов биоматериала. Кроме того, рекомендуется брать такое количество крови, которое в 2 раза превышает минимально необходимое для анализа. Это нужно для того, чтобы можно было провести повторные исследования, а такая необходимость в лаборатории периодически возникает.
Есть и еще одна причина забирать избыточное количество биологического материала – это доназначение лабораторных исследований в рамках стандартов обследования пациентов. Так, если образец после выполнения лабораторного анализа поместить на хранение в холодильник, то в этом случае после проведения интерпретации результатов исследования и обнаружения патологических результатов можно оперативно выполнить дополнительные анализы для уточнения диагноза из уже имеющегося в лаборатории материала. Такой подход позволяет существенно ускорить постановку диагноза за счет экономии времени на повторное взятие биологического материала.
Ручные методики
Расчет минимального объема цельной крови, необходимого в случае использования вторичных пробирок для параллельного проведения лабораторных исследований, можно проводить по следующей формуле:
Vкр = 2 * (Vм1 + Vм2 * m + (Vа + Vмоп) * n),
где:
Vкр - необходимый объем забираемой крови;
2 - числовой коэффициент, соответствующий гематокриту 0,5;
V м1 - «мертвый» объем первичной пробирки с пробой (вакутейнера);
V м2 - средний «мертвый» объем вторичной пробирки, используемой в работе;
Vа - средний объем пробы, необходимый для определения концентрации или активности исследуемого аналита;
Vмоп - средний «мертвый» объем измерительной пипетки (дозатора);
n - число одновременных измерений (параллельных исследований);
m - число вторичных пробирок.
Использование лабораторной информационной системы и выполнении исследований на автоматических анализаторах позволяет более точно рассчитать необходимый объем материала. Мы опробовали в отделе лабораторной диагностики Иркутского диагностического центра и успешно применяем следующие формулы расчета объема забираемой крови.
При необходимости аликвотирования во вторичные пробирки
Vкр = 2 * (Vм1 + (1Vм + 1Vа1 + … + 1Vаn) + …+ (mVм + mVа1 + … + mVаn) + (maxVм + maxVа)),
где:
Vкр - необходимый объем забираемой крови;
2 - числовой коэффициент, соответствующий гематокриту 0,5;
Vм1 - «мертвый» объем первичной пробирки с пробой (вакутейнера);
Vаn - объем пробы, необходимый для определения концентрации или активности исследуемого аналита;
n - количество аналитов, определяемых на анализаторе;
(1Vм + mVа1 + … + mVаn) - количество сыворотки, необходимое для всех исследований на одном анализаторе.
m - количество анализаторов;
maxVм - максимальный «мертвый» объем, применяемых методик;
maxVа - объем сыворотки, который необходим для повторного анализа.
Применение первичных пробирок
В случае использования в лаборатории первичных пробирок последовательно на разных анализаторах без аликвотирования количество необходимого материала оказывается меньшим на объем мертвого пространства вторичных пробирок.
Vкр = 2 * (maxVм1 + (1Vа1 + … + 1Vаn) + …+ (mVа1 + … + mVаn) + maxVа),
где:
Vкр - необходимый объем забираемой крови;
2 - числовой коэффициент, соответствующий гематокриту 0,5;
max Vм1 - «мертвый» объем первичной пробирки с пробой (вакутейнера);
Vаn - объем пробы, необходимый для определения концентрации или активности исследуемого аналита;
n - количество аналитов, определяемых на анализаторе;
(mVа1 + … + mVаn) - количество сыворотки, необходимое для всех исследований на одном анализаторе.
m - количество анализаторов;
maxVа - объем сыворотки, который необходим для повторного анализа;
При введении этих формул в лабораторную информационную систему, последняя будет подсказывает медсестре для каждого пациента в сколько пробирок, какого объема и с какими добавками необходимо набирать кровь.
3.4.4. Выбор границ нормы для определяемых показателей
Вы, вероятно, замечали, что при исследовании одних и тех же показателей разными методами, значения будут несколько различаться. В чем же причина? Их несколько. Одна из них заключается в том, что и получаемое в ходе анализа значение концентрации аналита и границы нормы будут зависеть от выбранной методики. На представленном ниже рисунке 18 представлены примеры методзависимых значений нормы для некоторых аналитов. При этом в графе «референсные значения» находится диапазон нормы, приведенный из справочников по лабораторным методам исследования.
Как следует из этих данных, в справочные пособия попадают и обобщаются результаты исследований здорового контингента, которые получены, как правило, одним из методов клинической химии и далеко не всегда отражают зависимость от пола, возраста, физиологического состояния. Поэтому, границы нормы, приводимые в справочниках, могут использоваться, как ориентировочные, а на бланки должны вноситься границы, взятые из инструкций к реактивам (анализатору).
С другой стороны, следует иметь в виду, что концентрации аналитов различаются в зависимости от фракции крови. Эти различия можно проследить на примере определения глюкозы в плазме и цельной крови. Так концентрация глюкозы в плазме на 10-15% выше, чем в цельной крови из-за различного содержания в них воды. Однако разница может колебаться в диапазоне от 4 до 47% в зависимости от состояния пациента, гематокрита и других факторов.
Кроме того, концентрация глюкозы в капиллярной крови выше, чем в венозной:
- натощак на 0,1-0,3 ммоль/л;
- после нагрузки глюкозой (тест - толерантности глюкозы) разница может увеличиваться до 1,1 - 3,9 ммоль/л, а при резистентности к инсулину - достигать 50%).
Рис. 18. Зависимость границ нормы от метода исследования
3.5. Организационные мероприятия на преаналитическом этапе
Как же свести к минимуму преаналитические погрешности? Для этого необходимо:
Иметь памятки и методические пособия по преаналитическим погрешностям во всех клинических лабораториях.
Согласовать и соединить друг с другом различные отделы лабораторий и клинические подразделения, четко отслеживая все процессы преаналитического периода.
Стандартизировать перевозку и доставку проб биологических материалов в клинические лаборатории.
Ввести определенные схемы применения пробирок для взятия биоматериалов в лабораториях, клинических отделениях, амбулаториях и у практикующих врачей во время приема.
Ввести стандартизированную маркировку лабораторных проб биологических материалов
Применять первичные пробы биожидкостей, в том числе пробы в специальных пробирках с сепарирующими гелями и идентифицирующими этикетками.
Автоматизировать преаналитическую стадию.
Сформулировать правила получения биологического материала и обращения с ним в ходе преаналитической стадии в форме стандартных операций (СО) и оформить их в виде методических пособий по обеспечению качества лабораторных исследований. Примером такого пособия могут служить инструкции, приведенные в Приложении 1 (Инструкция по процессу забора венозной крови и т. д.).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 |
