Биологическая химия (стр. 2 )

Вопросы к семинару №1:

1.  Биологические функции мембран. Строение и физико-химические свойства мембран.

2.  Перенос веществ через мембраны: пассивный транспорт, его виды.

3.  Перенос веществ через мембраны: первично-активный транспорт.

4.  Перенос веществ через мембраны: вторично-активный транспорт.

5.  Трансмембранная передача сигнала: аденилатциклазная система.

6.  Трансмембранная передача сигнала: инозитолфосфатная система.

7.  Трансмембранная передача сигнала: каталитические рецепторы.

8.  Трансмембранная передача сигнала: внутриклеточные рецепторы.

9.  Липосомы как модельные системы биомембран, их применение в фармации и медицине.

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ

Тема: Обмен липидов. Катаболизм липидов. Анаболизм липидов

Вопросы для подготовки к занятию:

1. Напишите реакции одного цикла β-окисления пальмитиновой кислоты. Назовите ферменты и коферменты

2. Рассчитайте, какое количество молекул АТФ образуется при полном β-окислении ВЖК:

А)Пальмитиновой:

Б) Стеариновой:

В) Олеиновой:

Г) Линолевой:

Д) Линоленовой:

Е) Арахидоновой:

3. Напишите химические формулы кетоновых тел. В каких условиях увеличивается содержание кетоновых тел в сыворотке крови? Каковы последствия этого?

4. Изобразите схему биосинтез жиров из углеводов в печени, упаковки их в ЛОНП и транспорта к клеткам

Выполните задания:

1. Напишите схему основных этапов синтеза эйкозаноидов и укажите место действия глюкокортикоидов и аспирина

2. При каких условиях будет увеличиваться синтез жирных кислот?

А.  При повышении концентрации глюкозы в крови после еды;

Б.  При снижении секреции инсулина;

В.  При увеличении секреции глюкагона;

Г.  При избыточном поступлении жиров с пищей.

3.  Установите соответствие:

1. Основное место синтеза – слизистая тонкого кишечника	А. Хиломикроны
2. Основное место синтеза – печень	Б. ЛПОНП
3. Содержит 50 % холестерола и его эфиров и 22 % белков	В. Оба
4. Подвергаются действию ЛП-липазы	Г. Ни один

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 11

Тема: Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту. Определение содержания β-липопротеидов в сыворотке крови. Определение общих липидов в сыворотке крови

Работа 1 Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту.

Цель: определить присутствие кетоновых тел в биологических жидкостях.

Опыт 1. Нитропруссидная проба на ацетон и ацетоуксусную кислоту.

1. Проба Легаля.

Ход работы: К 10 каплям мочи добавляют 1-2 капли свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия и 3-4 капли 10% раствора гидроксида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание. Добавляют 5-8 капель концентрированной уксусной кислоты. В присутствии ацетона и ацетоуксусной кислоты возникает вишнево-красное окрашивание.

Результат анализа:

Выводы:

2. Проба Ланге.

Ход работы: К 10 каплям мочи прибавляют 2 капли концентрированной уксусной кислоты, 1-2 капли свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия и перемешивают. Пробирку наклоняют под углом 45 градусов и осторожно по стенке наслаивают равный объем концентрированного аммиака. В присутствии ацетона и ацетоуксусной кислоты на границе образуется красно-фиолетовое или фиолетовое кольцо.

Результат анализа:

Выводы:

Опыт 2 Феррихлоридная проба на ацетоуксусную кислоту (проба Герхардта).

Ход работы: К 15-20 каплям мочи приливают 3-5 капель 5% раствора хлорного железа. В присутствии ацетоуксусной кислоты в количестве свыше 0,07% появляется красное окрашивание. Сходное окрашивание получается и в отсутствие ацетоуксусной кислоты в моче после приема внутрь некоторых лекарственных веществ: салициловой кислоты, аспирина и др. При стоянии и при кипячении в течение 2 минут в присутствии указанных выше лекарственных веществ окраска не исчезает.

Результат анализа:

Выводы:

Работа 2. Определение содержания β-липопротеидов (ЛНП) в сыворотке крови.

Принцип метода: В основу метода положена способность β-липопротеидов (ЛНП) осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора. По степени помутнения раствора и судят о концентрации β-липопротеидов в сыворотке крови.

Порядок выполнения работы: В пробирку вносят 2 мл 0,27% раствора СаСl2 и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают. Определяют оптическую плотность раствора (E1) в кюветах на 5 мм, при красном светофильтре (670 нм). Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют микропипеткой 0,04 мл 1% р-ра гепарина, перемешивают и точно через 3 мин снова определяют оптическую плотность р-ра (E2) в тех же условиях. Раствор сравнения - дистиллированная вода.

Е = Е2 – Е1

Расчёт концентрации β-липопротеидов:

X (мг%) = Е · 1000

1000 - эмпирический коэффициент, предложенный Ледвином, так как построение калибровочной кривой сопряжено с рядом трудностей.

Норма: 300- 550 мг%

Результат анализа:

Выводы:

Работа 3 Определение общих липидов в сыворотке крови

Принцип метода: Ненасыщенные липиды и жирные кислоты, фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислоты с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Схема постановки опыта

Содержимое пробирки	Проба	Стандарт	Контроль
Сыворотка, мл	0,02	-	-
Реактив 1, мл	-	0,02	-
Кислота серная конц, мл	1,5	1,5	1,5
Н2О, мл	−	─	0,02

Перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют

Гидролизат, мл	0,1	0,1	0,1
Реактив 2, мл	1,5	1,5	1,5

Перемешивают и оставляют стоять 50 мин при +15…+25° С.

Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы (А1) и стандарта (A2) против контрольного раствора. Длина волны (510-550 нм), кювета 5 мм.

Расчет , где

С - общее содержание липидов, г/л;

А1- оптическая плотность пробы;

А2 – оптическая плотность стандарта.

Результаты анализа:

Как физиологическое явление увеличение содержания липидов в крови (гиперлипемия) наступает через 1-4 ч после принятия пищи. Концентра­ция липидов крови увеличивается (гиперлипемия) при диабете (до 10-20 г/л), липоидном нефрозе, циррозе печени, ожирении, атеросклерозе, ишемической болезни сердца, гипотермозе, панкреатите.

Норма: 4-8 г/л.

Выводы:

Дата: Подпись преподавателя:

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ

Тема: Обмен липидов. Биологическая роль холестерина. Транспорт холестерина липопротеидами крови

Вопросы для подготовки к занятию:

1. Напишите химические формулы неэтерифицированного и этерифицированного холестерина

2. Укажите основные пути использования холестерина в организме

3. Укажите транспортные формы липидов в сыворотке крови, их происхождение и функции

4. Изобразите в виде схемы эндогенный синтез холестерина, укажите происхождение субстрата для синтеза

Выполните задания:

1.  Выберите направления использования холестерина в печени и коре надпочечников:

А. Печень	1. Построение мембран
Б. Кора надпочечников	2. Синтез холевой кислоты
В. Оба	3. Синтез витамина D3
Г. Ни один	4. Синтез кортизола

2. Во время обеда человек получил с продуктами животного происхождения 0,5 г холестерина. Укажите, может ли этот стерин попасть в клетки печени. Составьте схему, подтверждающую правильность вашего ответа:

3. Выберете непосредственного предшественника мевалоната в синтезе холестерина и напишите его формулу:

А) Ацетил-КоА

Б) Изопентенилпирофосфат

В) Ацетоацетил-КоА

Г) 3-Гидрокси-3-метилглутарил-КоА

Д) Мевалонилпирофосфат

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 12

Тема: Определение общего холестерина в сыворотке крови

Цель: научиться определять содержание холестерина в сыворотке крови фотоэлектроколориметрическим методом, изучить значение этого показателя для диагностики атеросклероза и других патологий.

Предостережение

Все пробирки, пипетки, кюветы должны быть сухими. Рабочий реагент представляет собой смесь концентрированных кислот.

Схема постановки опыта

	Опытная проба	Калибратор	Контроль
Сыворотка, мл	0,02	-	-
Калибратор, мл	-	0,02	-
Вода, мл	-	-	0,02
Рабочий реагент, мл	2,0	2,0	2,0

Перемешать реактивы и инкубировать 20 мин при температуре 20-25 °С.