Биологическая химия (стр. 4 )

где к – количество 0,01Н NaOH, пошедший на титрование до 3 пункта.

Таблица результатов анализа

№ вар.	Пункт титрования	Индикатор	Окрашивание	Кол-во NaOH, пошедшего на титрование, мл	Кол-во HCl	Общая кислотность
1-я проба	2-я проба	3-я проба	Vср	Своб.	Общ.	Связ.

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя:

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ

Тема: Общие пути обмена аминокислот

Задания для подготовки к занятию:

1.  Напишите формулами реакции трансаминирования между следующими парами аминокислот и a-кетокислот:

А) Глу + Пируват ®

Б) Глу + Оксалоацетат ®

2.  Напишите названия продуктов, образующихся в реакциях:

А)

Б)

3.  Напишите полное название ферментов по обратной реакции:

А)

Б)

4.  Назовите вид дезаминирования аминокислот:

А. Ала	1. Прямое окислительное
Б. Гис	2. Прямое неокислительное
В. Тре	3. Непрямое
Г. Глу
Д. Фен

5.  Напишите названия коферментов и соответствующих витаминов, необходимых для осуществления реакций непрямого дезаминирования:

А)

Б)

6. Чем определяется центральная роль глутаминовой кислоты в промежуточном обмене аминокислот?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 14

Тема: Количественное определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови

Цель: Изучить активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови, ее значение для диагностики гепатита.

Принцип метода: Аминотрансферазы или трансаминазы катализируют межмолекулярный перенос аминогруппы с амнокислот на кетокислоты. Коферментом трансаминаз является фосфопиридоксаль, который служит непосредственным переносчиком аминогрупп с аминокислоты на кетокислоту. АлАТ катализирует реакцию переаминирования между аланином и a-кетоглутаровой кислотой:

α-кетоглутарат

Аланин

Глутамат

пируват

По количеству образовавшейся пировиноградной кислоты можно судить об активности фермента. Количество пировиноградной кислоты определяется колориметрическим путем по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином, при которой развивается красно-бурое окрашивание:

Пируват

2,4-ДНФГ

2,4-ДНФ-гидразон пирувата

Повышение активности АлАТ наблюдается при заболеваниях печени, а повышение активности АсАТ – при патологии сердечной мышцы.

Активность АлАТ в норме составляет 28 – 190 нмоль/с×л

Схема постановки опыта

	Контрольная проба	Опытная проба
Реагент 1 (АлАТ, субстрат), мл	0,25	0,25
Дистиллированная вода, мл	0,05	–
Сыворотка, мл	–	0,05
Перемешать и инкубировать 30 мин
Реагент 2 (динитрофенилгидразин), мл	0,25	0,25
Перемешать и оставить при комнатной температуре на 20 мин
NaOH (С = 0,4 моль/л), мл	2,5	2,5

Перемешать и через 10 минут измерить оптическую плотность пробы против контрольной пробы при длине волны 540 нм, кювета с толщиной слоя 5 мм. Активность АлАТ в опытной пробе определить по калибровочному графику в нмоль/с×л.

Результат анализа:

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя:

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ

Тема: Обмен простых белков. Пути нейтрализации аммиака. Биосинтез мочевины

Задания для подготовки к занятию:

1. Назовите конечные продукты азотистого обмена, которые выводятся из организма:

2. Назовите процессы – источники аммиака в организме:

3. На каких клетках прежде всего сказывается токсическое действие аммиака? Каковы механизмы токсического действия аммиака?

4.  Перечислите способы обезвреживания аммиака в организме:

в мозге:

в мышцах:

в печени:

в почках:

5.  Напишите суммарное уравнение синтеза мочевины. Сколько моль АТФ требуется для синтеза 1 моль мочевины. Напишите реакции, идущие с затратой энергии (АТФ), укажите ферменты.

6.  Проследите путь азота аминогруппы аланина в мочевину, составив схему:

Ала ® 1 ® 2 ® 3 ® Мочевина

1.

2.

3.

7.  При нарушениях орнитинового цикла в крови повышается содержание:

А. Аланина

Б. Орнитина

В. Глутамата (глутаминовой кислоты)

Г. Глутамина (амида глутаминовой кислоты)

Д. Аммиака

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 15

Тема: Определение мочевины в сыворотке крови и в моче по цветной реакции с диацетилмонооксимом

Цель: научиться определять содержание мочевины в сыворотке крови и моче, изучить значение данного показателя для диагностики патологий.

Принцип метода: мочевина образует окрашенный продукт при взаимодействии с диацетилмонооксимом, интенсивность окраски определяется фотоколориметрически и пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

Ход определения: в пробирки внести реактивы по следующей схеме:

	Холостая проба, мл	Калибровочная проба (Dk), мл	Опытная проба (Do), мл
Исследуемая проба	-	-	0,01
Калибратор	-	0,01	-
Вода	0,01
Рабочий раствор	2,00	2,00	2,00

Содержимое пробирок тщательно перемешивают, отверстие закрывают алюминиевой фольгой и пробирки помещают точно на 10 минут в кипящую водяную баню. Затем пробирки быстро охлаждают в потоке холодной воды и измеряют оптическую плотность при 510 нм (490 – 540 нм, зеленый светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 1,0 или 0,5 см. Параллельно обрабатывают калибровочный раствор. Окраска устойчива в течение 15 минут.

Расчет содержания мочевины производят по формуле:

С = ;

где С – содержание мочевины в опытной пробе, ммоль/л;

Do – оптическая плотность опытной пробы;

Dк – оптическая плотность калибровочной пробы;

8,0 – содержание мочевины в калибровочном растворе, ммоль/л

Нормальные показатели концентрации мочевины:

-  в сыворотке (плазме) крови 2,5 – 8,3 ммоль/л

-  в моче 333 – 583 ммоль/сут

Результат анализа:

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя:

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ

Контрольная работа. Обмен простых белков

Вопросы к контрольной работе

1.  Почему нельзя заменить белки в питании жирами или углеводами? Какие аминокислоты являются незаменимыми?

2.  Назовите основные факторы, необходимые для нормального переваривания белков. Перечислите ферменты, участвующие в переваривании белков, содержащиеся в желудочном, панкреатическом и кишечном соках.

3.  В чем заключается биологическое значение выделения протеолитических ферментов в неактивной форме? Объясните механизм превращения:

а) пепсиногена в пепсин,

б) трипсиногена в трипсин,

в) химотрипсиногена в химотрипсин.

4.  Каков рН желудочного сока? Какова роль соляной кислоты в пищеварении? Какие биологически активные вещества влияют на секрецию соляной кислоты?

5.  Перечислите виды кислотности желудочного сока и их нормальные величины.

6.  Объясните понятия: гипоацидный гастрит, гиперацидный гастрит, анацидный гастрит, ахилия.

7.  Что подразумевают под гниением белков в кишечнике? Где и как обезвреживаются ядовитые продукты, образующиеся в толстом кишечнике при распаде:

а) триптофана,

б) фенилаланина и тирозина.

8.  Назовите основные типы дезаминирования аминокислот. Напишите окислительное дезаминирование глутаминовой кислоты.

9.  Что понимают под непрямым окислительным дезаминированием аминокислот? Каково его биологическое значение? Напишите реакцию трансаминирования между:

а) аланином и a-кетоглутаровой кислотой,

б) аспарагиновой кислотой и a-кетоглутаровой кислотой,

в) валином и ПВК,

г) лейцином и щавелево-уксусной кислотой.

10. Какова роль витамина В6 в обмене аминокислот?

11.  Напишите реакцию, катализируемую аланинаминотрансферазой (АЛТ). Каково клинико-диагностическое значение определения активности АЛТ в сыворотке крови?

12.  Напишите реакцию, катализируемую аспартатаминотрансферазой (ACT).Каково клинико-диагностическое значение определения активности ACT в сыворотке крови?