Биологическая химия (стр. 7 )

Принцип метода: Метод основан на образовании тонкого кольца осадка белка при наслоении мочи на реактив Ларионовой или 50% азотную кислоту. Экспериментально установлено, что растворы, содержащие 0,033 г/л, дают мутное белое колечко между второй и третьей минутой после наслаивания.

а) Качественное определение белка.

В пробирку наливают 1 мл реактива Ларионовой. Затем осторожно, по стенке наслаивают такое же количество мочи. При наличии белка в моче появляется мутное белое колечко между 2 и 3 минутой после наслаивания.

Результат анализа:

б) Количественное определение белка

Ход работы:

1)  В 5 пробирок вносят по 2 мл дистиллированной воды. В первую приливают 2 мл мочи, перемешивают и переносят 2 мл полученной смеси во вторую пробирку и т. д. Из пятой пробирки берут 2 мл смеси и отбрасывают, таким образом, получают пробы мочи с разведением в 2, 4, 8, 16 и 32 раза.

2)  В другие 5 пробирок наливают по 1 мл реактива Ларионовой. Затем осторожно, по стенке наслаивают такое же количество проб мочи с разведениями. Отмечают, в какой пробирке между 2-ой и 3-ей минутами появилось белое кольцо.

3)  Чтобы вычислить содержание белка в исследуемой моче, необходимо 0,033 г/л умножить на степень разведения мочи в пробирке с кольцом.

Результат анализа:

Опыт №2. Обнаружение сахара в моче.

В моче здорового человека глюкоза присутствует в виде следов. Выделение с мочой больших количеств глюкозы (глюкозурия) обусловлено либо повышением содержания сахара в крови, либо пропускной способностью почек. Стойкое повышение сахара в моче наблюдается при диабете (в тяжелых случаях доходит до 80-100 г/л). Гликозурия, обусловленная нарушением пропускной способностью почек, называется почечной и наблюдается при введении в организм больших количеств алкоголя, опиума, адреналина, окиси углерода (II), хлороформа и других веществ. Для обнаружения сахара в моче пользуются пробами Троммера или Фелинга.

Ход работы: К 5-6 каплям реактива Фелинга добавляют 5-6 капель исследуемой мочи, жидкость перемешивают и нагревают до начала кипения (не кипятить!). В присутствии глюкозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди. (Возможно изменение цвета без осадка).

Результат анализа:

Опыт №3. Обнаружение кетоновых тел в моче.

К кетоновым телам относятся ацетон, ацетоуксусная кислота, оксимасляная кислота. В норме с мочой выделяется 0,05 г за сутки кетоновых тел. Повышение выделения кетоновых тел из организма (кетонурия) наблюдается при острых лихорадочных процессах (у детей при скарлатине и кори), при диабете, раке, цинге, голодании, при расстройствах пищеварения.

Ход работы: Проба Легаля: К 10 каплям мочи добавляют 1-2 капли 5 % раствора нитропруссида натрия и 3-4 капли 10 % раствора NaOH. Появляется оранжево-красное окрашивание. Добавляют 5-6 капель концентрированной уксусной кислоты; в присутствии ацетоновых тел возникает вишнево-оранжевое окрашивание.

Результат анализа:

Опыт №4. Обнаружение кровяных пигментов.

При нарушении целостности кровеносных сосудов мочевых путей в моче появляется кровь (гематурия). При тяжелых инфекционных заболеваниях, отравлениях и ожогах происходит разрушение эритроцитов, переход гемоглобина в плазму, а затем появление его в моче (гемоглобинурия). Моча при этом бывает окрашена в красный или кофейно-бурый цвет. В случаях гематурии и гемоглобинурии в моче содержится белок.

Ход работы: В пробирку наливают 10 капель мочи, кипятят и охлаждают. Добавляют равный объем раствора бензидина и несколько капель 3 % перекиси водорода. При наличии кровяных пигментов моча окрашивается в синий или зеленый цвет.

Результат анализа:

Опыт №5. Обнаружение желчных пигментов.

Желчные пигменты – билирубин, биливердин и др. появляются в моче при желтухе. Моча, содержащая желчные пигменты, имеет желтовато-коричневый или зеленый цвет (характерный признак желтухи).

Ход работы: В пробирку наливают 3-5 мл мочи и осторожно наслаивают 0,1 % спиртовой раствор йода. При наличии билирубина на границе между объемами жидкостей образуется зеленое кольцо. При наличии в моче крови проба также положительна.

Результат анализа:

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя:

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ

Семинар. Особенности обмена веществ в различных органах и тканях

Вопросы для подготовки к занятию

1. Особенности обмена веществ в печени

2. Особенности обмена веществ в нервной ткани и мозге.

3. Особенности обмена веществ в мышцах.

4. Биохимические механизмы мышечного сокращения.

5. Особенности обмена веществ в костной ткани.

6. Молекулярные механизмы памяти.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ

Контрольная работа. Обезвреживание токсичных веществ в организме

Вопросы к контрольной работе

1. Метаболические реакции первой фазы биотрансформации. Система цитохрома Р-450.

2. Метаболические реакции второй фазы биотрансформации, виды конъюгации.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ

Тема: Решение ситуационных задач. Зачетное занятие

Задача 1. У больного 25 лет утром натощак взята сыворотка крови для анализа. Содержание ТАГ составляло 3 ммоль/л. Содержание холестерола соответствует норме. Сыворотка крови мутная, при хранении в холодильнике на поверхности образуются жирные хлопья. Объясните результаты анализов и возможные причины симптомов, наблюдаемых у больного. Для этого ответьте на вопросы и выполните задания:

а) нарисуйте схемы (липидограммы), отражающие состав липопротеинов сыворотки крови голодного человека и человека, имеющего указанные симптомы заболевания;

б) укажите, нарушения каких молекулярных механизмов может привести к таким изменениям в обмене липидов;

в) сформулируйте рекомендации по питанию данному пациенту.

Задача 2. У женщины 40 лет обнаружены камни в желчном пузыре, которые периодически перекрывали желчный проток и нарушали отток желчи в кишечник. Укажите все возможные последствия нарушения секреции желчи. Для этого:

а) объясните роль желчных кислот в переваривании липидов;

б) укажите функцию желчных кислот в процессе всасывания продуктов переваривания пищевых липидов;

в) укажите, дефицит каких веществ может возникнуть у таких больных, и каковы могут быть последствия и симптомы.

Задача 3. Пациенту, страдающему избыточным весом, врач прописал препарат ксеникал, который является ингибитором панкреатической липазы. Препарат необходимо принимать во время еды. Почему применение ксеникала способствует снижению веса? Ответьте на вопрос, выполнив следующие задания:

а) Напишите реакцию, катализируемую панкреатической липазой;

б) объясните, почему длительное применение препарата вызывает снижение веса;

в) укажите возможные негативные последствия длительного применения ксеникала.

Задача 4. Родители обеспокоены излишним весом ребенка. Не посоветовавшись с врачом, они резко ограничили количество сахара в пище ребёнка, увеличив содержание белка, но, не уменьшив количество жира. Через несколько недель у ребёнка ухудшилось самочувствие, появилась рвота. С нарушением какого обмена это связано? Какой биохимический анализ подтвердит нарушение этого вида обмена?

Задача 5. Экспериментальные животные в течение 1 недели получали с пищей избыток глюкозы, содержащий радиоактивный углерод. Затем животные голодали в течение двух дней. В крови обнаружены кетоновые тела, содержащие радиоактивный углерод. Объясните результаты эксперимента, напишите краткие схемы метаболических путей, через которые проходит радиоактивный углерод, поступивший в организм в составе глюкозы.

Задача 6. У двух мужчин 60 лет определяли концентрацию общего холестерола и холестерола в ЛВП. У пациента А: холестерол общий – 280 мг/дл, холестерол в ЛВП – 60 мг/дл; У пациента В: холестерол общий 280 мг/дл, холестерол в ЛВП – 50 мг/дл. Оцените полученные данные. Для этого:

а) рассчитайте коэффициент атерогенности и определите, у кого из пациентов выше риск развития атеросклероза и его осложнений;

б) составьте схему, показывающую роль атеросклероза и его осложнений;

в) объясните, почему ЛНП называют «атерогенными» липопротеидами, а ЛВП – «анатерогенными».

Задача 7. У больного развился острый панкреатит, при этом стенки протока поджелудочной железы воспалились и отекли, просвет протока уменьшился, наблюдались застойные явления. Таким больным необходима срочная медицинская помощь. Объясните, чем опасно затруднение оттока сока поджелудочной железы. Для этого:

а) назовите ферменты, которые синтезируются в поджелудочной железе;

б) укажите пути их активации, назовите активаторы проферментов;

в) объясните, к каким последствиям приведет их активация в ткани поджелудочной железы.

Задача 8. У ребенка 1,5 месяца содержание фенилаланина в крови составляет 34 мг/дл (норма 1,4 – 1,9 мг/дл), содержание фенилпирувата в моче – 150 мг/сут (норма 8 – 10 мг/сут). Предположите, какой патологии соответствуют результаты анализа крови и мочи. Для ответа:

а) назовите причину данного заболевания;

б) напишите реакцию, которая блокирована при данном заболевании;

в) напишите схему альтернативного пути метаболизма субстрата.

Задача 9. Пациент жалуется на повторяющиеся приступы острого воспаления суставов (чаще всего мелких). Под кожей у больного выявлены образования в виде подагрических узлов и образование камней в мочевыводящей системе.

а) укажите возможную причину вызываемых симптомов, название болезни;

б) какие биохимические показатели нужно определить для уточнения диагноза?

в) назовите причины данного заболевания и пути его коррекции.

Задача 10. У пациента появились боли в области печени, желтушность склер, кожных покровов. Кал обесцвечен, моча цвета крепкого чая.

а) какая патология может вызвать данное состояние?

б) какие анализы следует назначить для обследования данного пациента?

в) чем объяснить обесцвечивание кала?

г) какие выводы позволяет сделать изменение цвета мочи?

д) будет ли наблюдаться изменение соотношения прямого и непрямого билирубина при данной патологии?