Синдром эндотоксикоза при болезни рейтера: иммунологические механизмы формирования и оптимизация диагностики (стр. 3 )

2.Определение антигена virus herpes simplex в соскобах слизистых оболочек мочеполовых органов непрямым иммунофлюоресцентным методом с использованием коммерческих тест-систем “ГерпесСкан” научно-производственной фирмы “ЛАБдиагностика” г. Москва.

Идентификация Cytomegalovirus hominis. Для определения антител к вирусу цитомегалии человека также применяли метод иммуноферментного анализа, используя готовый диагностический набор “ВектоЦМВ-IgG-стрип” (производитель ЗАО “Вектор-Бест”, г. Кольцово, Новосибирская обл.). Стандартизированные исследования проводили на анализаторе иммуноферментных реакций АИФР-1 “Униплан” (г. Москва).

Иммунологические методы исследования.

Определение субпопуляций лимфоцитов крови. Для оценки состояния Т - и В - клеточных звеньев иммунитета определяли различные субпопуляции лимфоцитов крови (CD3, CD4, CD8, CD19). Для типирования лимфоцитов крови использовались моноклональные антитела, направленные к соответствующим маркерам CD3, CD4, CD8 и CD19 (производитель - ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ, НПФ «Сорбент»). Подсчет тестируемой субпопуляции лимфоцитов производили с помощью люминесцентной микроскопии.

Для изучения гуморального звена иммунного ответа определяли содержание IgА, IgМ, IgG, а также подклассов IgG твердофазным методом иммуноанализа. Использовали готовые диагностические наборы «IgA–ИФА-БЕСТ–стрип», «IgM-ИФА-БЕСТ – стрип», «IgG-ИФА-БЕСТ–стрип», а также «подклассы IgG–ИФА–БЕСТ» (производитель -Бест», Новосибирская обл., г. Кольцово). Аналогичным методом определяли концентрацию подклассов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4.

Определение содержания цитокинов в сыворотке крови. Для оценки содержания изучаемых цитокинов - ИЛ-1β, ИЛ-8 и ФНО-α в сыворотке крови применяли метод твердофазного иммуноферментного анализа. Для исследования использовали готовые диагностические наборы «α-ФНО-ИФА-БЕСТ» (производитель -Бест», Новосибирская обл., г. Кольцово), иммуноферментный набор для определения ИЛ-1β человека (производитель ОOО «Цитокин», г. Санкт-Петербург), иммуноферментный набор для количественного определения человеческого ИЛ-8 в культуральной среде, сыворотке или плазме человека (производитель - компания BIOSOURCE, Бельгия).

Биохимические методы исследования.

Исследование молекул средней массы в сыворотке крови проводили по методу и соавт. (1985).

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови определяли с помощью методики , (1981). IgA, IgM, IgG в периферической крови исследовали методом G. Mancini et al. (1963).

Результаты исследования и их обсуждение

В качестве ведущего патогенетического звена формирования болезни Рейтера в настоящее время рассматривают различные иммунологические сдвиги в организме больных.

У обследованных пациентов с болезнью Рейтера выявлены изменения количественного содержания СD3-, CD4-, CD8-лимфоцитов в периферической крови. Так, уровень СD3-лимфоцитов в крови больных был значительно снижен, составив 36,55±0,27% (в группе доноров - 41,9±0,21%; p<0,01). Концентрации CD4 - клеток и CD8 - лимфоцитов в кровяном русле также были сниженными, соответственно составляя 31,97±0,28% (в группе доноров - 38,9±1,77%; p<0,005) и 23,76±0,11% (в группе доноров - 29,4±0,24%; p<0,001). Одновременно установлено значительное повышение уровня CD19-лимфоцитов в периферической крови больных с болезнью Рейтера, составившее 26,99±0,31% (у доноров – 21,9 ± 0,39%; p<0,001).

Наиболее выраженное снижение количества СD3-, CD4- и CD8- клеток в периферической крови установлено при множественных артикулярных поражениях, соответственно составляя 32,36±0,37% (p<0,005), 27,17±0,33% (р<0,05), 20,56±0,27% (р<0,05), а при моно - и олигоартикулярных поражениях было сниженным в меньшей степени, при этом оставаясь ниже значений в группе доноров.

Максимальное увеличение концентрации CD19-лимфоцитов в крови констатировано при полиартикулярных поражениях (29,0±0,88%; p<0,01). При моно - и олигоартритах уровень CD19 в кровяном русле имел лишь тенденцию к повышению (p>0,05).

Содержание Т - и В-лимфоцитов в крови у пациентов с болезнью Рейтера существенно менялось в зависимости от форм артрита. У больных с синовиально-костной формой артрита констатировано достоверное снижение уровня СD3-лимфоцитов в крови до 29,11±0,32% по сравнению с нормальными значениями (p<0,005). Концентрации CD4- и CD8- клеток в кровяном русле также были низкими при синовиально-костном варианте артикулярного процесса (соответственно p<0,025 и р<0,01). В случаях синовитов уровни CD-3, CD4- и CD8 – лимфоцитов в крови несколько повышались, достоверно различаясь с одноименными показателями в контрольной группе (соответственно р<0,01, р<0,05 и p<0,01). Количественное содержание CD4-клеток в периферической крови больных артралгической формой суставных поражений не было статистически значимым. В сравнении с контрольными значениями концентрация CD19 - лимфоцитов в кровяном русле в наибольшей степени повышалась при синовиально-костной форме артрита 34,76±0,63% (p<0,01). При артралгиях и синовиальной форме содержание CD19-лимфоцитов в периферической крови превышало нормальные показатели в меньшей степени.

Наиболее отчетливое достоверное понижение концентраций СD3-, CD4-, CD8- лимфоцитов в периферической крови отмечено у лиц с высокой степенью активности патологического процесса (соответственно - 28,43±0,45%, p<0,01; 27,99±0,58%, p<0,005; 21,02±0,39%, p<0,025). Для лиц с умеренной степенью активности отмечалось достоверное снижение уровня СD3-, CD4-, CD8-клеток крови по сравнению с группой контроля, однако менее значительное. При этом, при низкой общей воспалительной активности уровень СD8 имел лишь тенденцию к снижению, однако не был значим статистически (p>0,05).

Наиболее отчетливое повышение содержания В-лимфоцитов до 32,89±0,55% в периферической крови по сравнению с нормальными значениями зарегистрировано нами при значительной выраженности воспалительного процесса в организме больных с анализируемой патологией (p<0,025). При умеренной степени общей воспалительной активности уровень CD19- клеток в крови повышался соответственно до 29,31±0,41% (p<0,025). При низкой активности патологического процесса он был повышенным в меньшей степени, однако был значим статистически (р<0,01).

Нами констатированы статистически значимые положительные ранговые корреляции между содержанием в периферической крови CD3- и CD4- лимфоцитов (r=+0,48; p<0,05), CD3- и CD8- лимфоцитов (r=+0,51; p<0,025), CD4- и CD8- клеток (r=+0,39; p<0,01), свидетельствующие об однонаправленности патологических сдвигов со стороны Т-клеточного звена иммунной системы.

Одновременно выявлены разнонаправленные корреляционные зависимости, уровней CD3-, CD8- лимфоцитов и В-лимфоцитов в кровяном русле (соответственно r=-0,53; p<0,05, r=-0,40, р <0,05).

Для оценки состояния гуморального звена системы иммунитета при болезни Рейтера нами предпринято исследование содержания IgA, IgM, IgG в периферической крови. Среднее содержание IgA в сыворотке крови здоровых доноров составило 1,69±0,15 мг/мл, IgM - 1,63±0,17 мг/мл, IgG –9,71±0,66 мг/мл.

Концентрация IgA в сыворотке крови пациентов с болезнью Рейтера составила 5,48±0,33 мг/мл; (р<0,005). Наиболее высокие статистически достоверные уровни содержания IgA в периферической крови были зарегистрированы при множественных поражениях артикулярных структур, составив 7,81±0,60 мг/мл; (p<0,025). В меньшей степени отмечено увеличение концентрации IgA в сыворотке крови при моно - и олигоартритах.

При синовиальной форме поражений суставов нами зарегистрировано наиболее избыточное увеличение содержания IgA в кровяном русле, составившее 6,49±0,19мг/мл, что было достоверно выше контрольных значений (p<0,05). При синовиально-костной форме артрита сывороточная концентрация IgA была достоверно увеличена, однако в меньшей степени. При артралгиях нами констатирована лишь тенденция к повышению содержания IgA в кровяном русле больных с болезнью Рейтера (p>0,01).

При низкой общей воспалительной активности содержание IgА существенно превышало значения в группе доноров, составляя в абсолютных величинах 3,77±0,40 мг/мл (p<0,025). У больных с умеренной степенью выраженности воспалительного процесса концентрация IgA в крови была еще выше, составляя 6,08±0,16 мг/мл; (p<0,005). Наконец, у пациентов с высокой общей воспалительной активностью нами зарегистрировано наиболее высокое статистически достоверное значение количественного содержания IgA в кровяном русле, составившее 7,18±0,43 мг/мл; (p<0,01).

При математическом анализе нами установлены положительные корреляционные взаимосвязи, по Спирмену, между концентрацией IgA в сыворотке крови, формой поражений суставов (r=+0,50; p<0,05), распространенностью артритов (r=+0,47; p<0,05) и общей воспалительной активностью процесса (r=+0,58; p<0,025). Увеличение содержания в периферической крови IgA происходило в организме пациентов с болезнью Рейтера на фоне увеличения числа пораженных суставов, утяжеления форм артритов и усиления выраженности воспалительных явлений в организме.

Констатирована разнонаправленная умеренная ранговая корреляционная зависимость между количеством IgA в кровяном русле и содержанием CD3-, CD4-, CD8- лимфоцитов в периферической крови (соответственно r=-0,53; p<0,05, r=-0,62; p<0,025, r=-0,50; p<0,05). Кроме того, нами выявлены достоверные умеренные положительные ранговые корреляции между концентрацией IgA в сыворотке крови и количеством В-лимфоцитов в крови (r=+0,48; p<0,025), свидетельствующие о тесных взаимосвязях нарушений клеточного и гуморального звеньев системы иммунитета при болезни Рейтера.

У пациентов с болезнью Рейтера констатировано статистически достоверное снижение содержания IgM в сыворотке крови (1,21±0,11мг/мл; р<0,05). Достоверное уменьшение сывороточного содержания IgM имело место при полиартикулярых поражениях (1,01±0,09 мг/мл; р<0,01); синовиальной форме артрита (1,19±0,11 мг/мл; р<0,05) и высокой степени воспалительной активности патологического процесса (1,03±0,09 мг/мл; р<0,005).