Методы анализа, необходимые для проверки состава косметической продукции (II) (стр. 3 )

Добавить каплями 25% раствор аммиака (3.4) до рН 10. Добавить также до 10 мл 96% этанола (3.3).

Гомогенизировать в среде азота (3.8), закрыть пробкой и центрифугировать (при 4000 оборотов/мин) в течение 10 минут. Использовать надосадочную жидкость.

5.2. Хроматография

5.2.1. Разметка пластинок

В среде азота (3.8) на хроматографическую пластинку (4.1.3) нанести по 1 µl каждого из контрольных растворов, описанных выше 9 пунктами, расположенных приблизительно на 1,5 см друг от друга вдоль линии, расположенной примерно на 1,5 см от края пластинки.

Пятна контрольных растворов распределены следующим образом:

1	2	3	4	5	6	7	8	9
R	P	H	PPD	DAP	PTD	ОPD	ОТD	МPD
МТD	α - n

Кроме того, согласно пунктам 10 и 11, нанести по 2 µl из раствора пробы, полученного в соответствии с разделом 5.1 настоящей главы.

Пластинка содержится в среде азота (3.8) до момента, пока она хроматографируется.

5.2.2. Проявление

Пластинку поместить в камеру, предварительно заполненную азотом (3.8), насыщенную одним из четырех растворителей (3.22), и оставить для проявления при комнатной температуре (от 20 до 25°С), в темноте, пока передний край растворителя продвинется примерно на 15 см от линии старта.

Пластинку вынуть и сушить в среде азота (3.8) при комнатной температуре.

5.2.3. Распыление

Пластинку сразу же опрыскать одним из четырех растворов, указанных в пункте 3.23.

5.2.4. Идентификация

Сравнить значение Rf и цвет, полученный для пробы, с данными, полученными при хроматографировании контрольных растворов.

В таблице 1 приведены в качестве примера значения Rf и цвета для каждого вещества в зависимости от растворителя и использованного индикатора.

В случае неопределенной идентификации, подтверждение может быть достигнуто методом фиксации, добавив к экстракту пробы соответствующий раствор контрольного вещества.

Контрольные вещества (3.20)	Проявляющие растворители	Индикаторные аэрозоли
Значения Rf	Выделенные цвета
(3.22.1)	(3.22.2)	(3.22.3)	(3.22.4)	Диазо (3.23.1)	Эрлих (3.23.2)	Диметил-фенол (3.23.3)	Нитрат серебра (3.23.4)
ОPD	0,62	0,60	0,30	0,57	бледно - коричневый	-	-	бледно - коричневый
МPD	0,40	0,60	0,47	0,48	фиолетово-коричневый (*)	желтый	бледно- коричневый	бледно- коричневый
PPD	0,20	0,50	0,30	0,48	коричневый	ярко-красный (*)	фиолетовый	cерый
ОTD	0,60	0,60	0,53	0,60	коричневый (*)	бледно-оранжевый	бледно- коричневый	серо-коричневый
МТD	0,40	0,67	0,45	0,60	красно- коричневый (*)	желтый	коричневый	черный
PTD	0,33	0,65	0,37	0,70	коричневый	оранжевый	фиолетовый (*)	серый
DAP	0,07	-	0	0,05	коричневый (*)	оранжевый	фиолетовый	коричневый
H	0,50	0,35	0,80	0,20	-	оранжевый	фиолетовый	черный (*)
α - N	0,90	0,80	0,90	0,75	оранжево-коричневый	-	фиолетовый (*)	черный
P	0,37	-	0,67	0,05	коричневый	слабый бледно - фиолетовый	слабый бледно - коричневый	коричневый (*)
R	0,50	0,37	0,80	0,17	оранжевый (*)	бледно-фиолетовый	слабый бледно-коричневый	бледно- коричневый

5.2.5. Полуколичественная оценка

Визуально сравнить интенсивность пятен для каждого идентифицированного вещества, согласно пункту 5.2.4, с соответствующим диапазоном концентраций контрольных веществ.

В случае если концентрация одного или нескольких веществ, содержащихся в пробе, избыточная, экстракт пробы разводят и повторяют измерение.

Таблица 1

Значения Rf и цвета полученные сразу после распыления

Контрольные вещества (3.20)	Проявляющие растворители	Индикаторные аэрозоли
Значения Rf	Выделенные цвета
(3.22.1)	(3.22.2)	(3.22.3)	(3.22.4)	Диазо (3.23.1)	Эрлих (3.23.2)	Диметил-фенол (3.23.3)	Нитрат серебра (3.23.4)
ОPD	0,62	0,60	0,30	0,57	бледно - коричневый	-	-	бледно - коричневый
МPD	0,40	0,60	0,47	0,48	фиолетово-коричневый (*)	желтый	бледно- коричневый	бледно- коричневый
PPD	0,20	0,50	0,30	0,48	коричневый	ярко-красный (*)	фиолетовый	cерый
ОTD	0,60	0,60	0,53	0,60	коричневый (*)	бледно-оранжевый	бледно- коричневый	серо-коричневый
МТD	0,40	0,67	0,45	0,60	красно- коричневый (*)	желтый	коричневый	черный
PTD	0,33	0,65	0,37	0,70	коричневый	оранжевый	фиолетовый (*)	серый
DAP	0,07	-	0	0,05	коричневый (*)	оранжевый	фиолетовый	коричневый
H	0,50	0,35	0,80	0,20	-	оранжевый	фиолетовый	черный (*)
α - N	0,90	0,80	0,90	0,75	оранжево-коричневый	-	фиолетовый (*)	черный
P	0,37	-	0,67	0,05	коричневый	слабый бледно - фиолетовый	слабый бледно - коричневый	коричневый (*)
R	0,50	0,37	0,80	0,17	оранжевый (*)	бледно-фиолетовый	слабый бледно-коричневый	бледно- коричневый

Примечания:

1.  ORD указан только слабый; растворитель должен быть использован для четкого отделения от OTD.

2.  (*) Указывает проявление самого лучшего цвета

6. ИССЛЕДОВАНИЕ ПУТЕМ ДВУМЕРНОЙ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Процедура двумерной тонкослойной хроматографии требует использования дополнительных стандартов и реагентов.

6.1. Дополнительные вещества и контрольные растворы

6.1.1.  β-нафтол (β-N).

6.1.2.  2-аминофенол (ОАР).

6.1.3.  3-аминофенол (МАР).

6.1.4.  4-аминофенол (РAР).

6.1.5.  2-нитро-1,4-фенилендиамин (2-NPPD).

6.1.6.  4-нитро-1,2-фенилендиамин (4-NOPD).

Из каждого дополнительного контрольного вещества приготовить

0,5% раствор (m/v), согласно пункту 3.21.

6.2. Дополнительный растворитель

6.2.1. Этилацетат–циклогексан ─25% раствор аммиака (объемное соотношение 65:30:0,5)

6.3. Дополнительная индикаторная система

Стеклянный сосуд поместить в проявляющую камеру для тонкослойной хроматографии, добавить примерно 2 г кристаллизованного йода и закрыть сосуд адекватной крышкой.

6.4. Хроматографирование

6.4.1. На впитывающей поверхности пластинки для тонкослойной хроматографии (4.1.3) нарисовать две линии, как показано на рис. 1.

6.4.2. В среде азота (4.1.1), нанести от 1 до 4 µl экстракта (5.1) на исходную точку 1 (рис. 1), которая находится в 2 см от тех двух линий. Количество экстракта зависит от интенсивности пятен на хроматограммах (5.2).