Методы анализа, необходимые для проверки состава косметической продукции (II) (стр. 6 )

а) от 0,05% до 0,2% в немаркированном продукте;

b) если больше, чем 0,2% в продукте, маркированном или немаркированном,

следует применять процедуру, описанную в пункте 5 настоящей главы.

5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ В НАЛИЧИИ ДОНОРОВ ФОРМАЛЬДЕГИДА

5.1. Принцип

Отдельный формальдегид преобразован в производный желтый лутидин путем реакции с пентан-2,4-дионом в реакторе с пост - колонкой и полученный производный обнаруживается путем поглощения при 420 nm.

5.2. Реагенты

Все реагенты должны быть аналитической чистоты и вода должна быть деминерализованная.

5.2.1. Вода чистоты ВЭЖХ или эквивалент качества.

5.2.2. Безводный ацетат аммония.

5.2.3. Концентрированная уксусная кислота.

5.2.4. Пентан-2,4-диона (хранившийся при 4 ° С).

5.2.5. Безводный динатрий фосфат.

5.2.6. Ортофосфорная кислота 85% (d = 1,7).

5.2.7. Метанол, чистоты ВЭЖХ.

5.2.8. Дихлорметан.

5.2.9. Формальдегид 37 - 40% m/v.

5.2.10. Гидроксид натрия 1 М.

5.2.11. Соляная кислота, 1 М.

5.2.12. Соляная кислота, 0,002 М.

5.2.13.Свежеприготовленный раствор крахмала согласно Европейской Фармакопеи (см. 4.2.8).

5.2.14. Стандартный раствор йода, 0,05 М.

5.2.15. Стандартный раствор тиосульфата натрия, 0,1М.

5.2.16. Подвижная фаза:

Водный раствор динатрий фосфата (5.2.5) 0,006 М, корректируемый ортофосфорной кислотой (5.2.6) до рН 2,1.

5.2.17. Реагент пост - колонки

В мерной колбе объемом 1000 мл растворить:

- 62,5 г ацетата аммония (5.2.2);

- 7,5 мл уксусной кислоты (5.2.3);

- 5 мл пентан-2,4-диона (5.2.4).

Довести до объема в 1000 мл водой (5.2.1).

Этот реагент хранить вдали от света.

Время хранения: не более трех суток при 25° С.

Не должно наблюдаться изменения цвета.

5.2.18. Формальдегид стандарт: основной раствор

В 1 000 мл мерную колбу залить 10 г формальдегида (5.2.9) и довести до 1 000 мл водой.

Определить концентрацию раствора следующим образом:

Удалить 5,00 мл; добавить 25,00 мл стандартного раствора йода (5.2.14) и 10,00 мл гидроксида натрия (5.2.10).

Дать постоять в течение пяти минут.

Подкислить 11,00 мл HCl (5.2.11) и титровать избыток йода со стандартным раствором тиосульфата натрия (5.2.15), используя крахмал в качестве индикатора.

1 мл раствора йода (5.2.14) эквивалентен 1,5 мг формальдегида.

5.2.19. Формальдегид стандарт, разбавленный раствор:

Развести основной раствор до 1/100 от его исходной концентрации в подвижной фазе (5.2.16).

1 мл этого раствора содержит около 37 мг формальдегида.

Рассчитать точное содержание.

5.3. Оборудование

5.3.1. Стандартное лабораторное оборудование

5.3.2. Насос ВЭЖХ непульсирующий.

5.3.3. Непульсирующий насос низкого давления для реагента (или второй ВЭЖХ насос).

5.3.4. Инжектор с впрыском в10 µl.

5.3.5. Реактор пост колонны со следующими компонентами:

- 1-литровая колба с тремя отверстиями;

- 1 л реторта;

- два столбца Vigreux, минимум 10 лотков, два из которых охлажденные воздухом;

- стальная трубка из нержавеющей стали на 1,6 мм (для теплового обмена), внутренний диаметр - 0,23 мм, длина - 400 мм;

- тефлоновая трубка на 1,6 мм, внутренний диаметр - 0,30 мм, длина 5 м, „ трикотин ”; см. приложение 1;

- Т-образный адаптор (тип valco или эквивалент);

- три адаптора;

Или: модуль пост-колонка Applied Biosystems PCRS 520 или эквивалент, снабженный реактором в 1 мл.

5.3.6. Мембранный фильтр с размером пор 0,45 µm.

5.3.7. SEP-PAKR С 18 картридж или эквивалент.

5.3.8. Заранее приготовленные колонны :

- Bishoff hipersil RP 18 (тип NCссылка C 25.46 1805);

- (5 µm, длина = 250 мм, внутренний диаметр = 4,6 мм);

- или Dupont Zorbax ODS;

- (5 µm, длина = 250 мм, внутренний диаметр = 4,6 мм);

- или Phase SEP, spherisorb ОРВ 2;

- (5 µm, длина = 250 мм, внутренний диаметр = 4,6 мм).

5.3.9. Пре-колонка

Bisсhoff К1 hypersil RP 18 (ссылка К1 G 6301 1805) (5 µm, длина =-10 мм или эквивалент).

5.3.10. Колонка и пре-колонка соединена с помощью системы Ecotube (ссылка А 15020508 Bischoff) или эквивалент.

5.3.11.Собрать аппарат (5.3.5) в соответствии с блок-схемой описанной в приложении 2.

Разъемы инжектора должны быть как можно короче. В этом случае, трубка из нержавеющей стали между выходом реактора и входом детектора предназначена для охлаждения смеси до обнаружения, а температура в детекторе неизвестная, но постоянная.

5.3.12. УФ – детектор с видимым спектром.

5.3.13. Устройство для записи.

5.3.14. Центрифуга.

5.3.15. Ультразвуковая ванна.

5.3.16. Вибрационный шейкер (Vortex или эквивалент).

5.4. Процедура

5.4.1. Эталонная кривая

Достигается путем построения высот пиков в зависимости от концентрации стандарта формальдегида: разбавленного.

Стандартные растворы приготовить путем разбавления раствора - эталона формальдегида (5.2.19) с подвижной фазой (5.2.16):

- 1,00 мл раствора (5.2.19) разбавить до 20,00 мл (примерно 185 µg / 100 мл);

- 2,00 мл раствора (5.2.19) разбавить до 20,00 мл (приблизительно 370 µg / 100 мл);

- 5,00 мл раствора (5.2.19 разбавить до 20,00 мл (около 740 µg / 100 мл);

- 5,00 мл раствора (5.2.19) разбавить до 20,00 мл (приблизительно 925 µg / 100 мл).

Стандартные растворы хранятся в течение одного часа при лабораторной температуре и должны быть свежеприготовленными.

Линейность калибровочной кривой хороша для концентрации между 1,00 и 15,00 µg / мл.

5.4.2. Подготовка проб

5.4.2.1. Эмульсии (кремы, тональный крем, туш для ресниц)

В емкости с пробкой объемом в 100 мл, взвесить с точностью до 0,001 г, количество анализируемого вещества (m, граммы), соответствующего предполагаемому количеству 100 µg формальдегида. Добавить 20,00 мл дихлорметана (5.2.8) и 20,00 мл соляной кислоты (5.2.12), взвешенных с точностью. Смешать с помощью вибрационного шейкера ​​(5.3.16) и ультразвуковой бани (5.3.15). Фазы разделить центрифугированием (3000 gn в течение двух минут). Между тем промыть картридж (5.3.7) с 2 мл метанола (5.2.7) и затем кондиционировать с 5 мл воды (5.2.1).

Провести 4 мл экстракта из водной фазы через приготовленный картридж, удалить первые 2 мл и восстановить следующую фракцию.

5.4.2.2. Лосьоны, шампуни

В емкости с пробкой объемом в 100 мл, взвесить с точностью до 0,001 г, количество анализируемого вещества (m, граммы), соответствующего предполагаемому количеству 500 µg формальдегида.

Довести до 100 мл с подвижной фазой (5.2.16).

Раствор профильтровать через фильтр (5.3.6) и впрыснуть или провести через картридж (5.3.7), промытый как и раньше (5.4.2.1). Все растворы должны быть впрыснуты сразу после приготовления.

5.4.3. Хроматографические условия

- скорость потока подвижной фазы 1 мл / мин;

- поток реагента 0,5 мл / мин;

- общий расход на выходе из детектора 1,5 мл / мин;

- объем впрыска 10 мл;

- температура элюирования: в случае сложных разделений, погрузить колонну в ванну с растопленным льдом: ждать стабилизации температуры (15-20 мин);

- температура реакции пост - колонки: 100°С;

- обнаружение: 420 nm.

Примечание: Всю хроматографическую систему и пост-колонку необходимо обильно промыть водой после использования. Если система не используется в течение более чем двух дней, за этой процедурой должна последовать промывка метанолом (5.2.7). Перед восстановлением необходимо пропускать воду через систему 1, чтобы избежать рекристаллизации.

5.5. Расчет

Эмульсии (5.4.2.1):

Содержание формальдегида в % (m/m):

.

Лосьоны, шампуни:

В этом случае формула:

,

где:

m - масса анализируемого образца, в г (5.4.2.1);

c - концентрация формальдегида в µg /100 мл, считываемая из калибровочной кривой (5.4.1).

5.6. Повторяемость(1)

Для содержания формальдегида 0,05%, разница между результатами двух параллельных измерений одной и той же пробы не должна превышать 0,001%.

Для содержания формальдегида 0,2% разница между результатами двух параллельных измерений одной и той же пробы не должна превышать 0,005%.

V. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗОРЦИНА В ШАМПУНЯХ

И ЛОСЬОНАХ ДЛЯ ВОЛОС

1. ПРЕДМЕТ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий метод позволяет определить резорцин путем газовой хроматографии в шампунях и лосьонах для волос. Метод пригоден для концентрации в пробе от 0,1 до 2,0% к массе.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание резорцина в пробе, определяемое в соответствии с настоящим методом, выражено в процентах массы.

3. ПРИНЦИП

Резорцин и 3,5-дигидрокситолуол (5-метилрезорцин) добавленный как внутренний стандарт, выделить из пробы с помощью тонкослойной хроматографии. Оба соединения изолируют путем вырезания их пятен с тонкослойной пластинки и экстракции метанолом.  Затем извлеченные соединения высушивают, силилируют и определяют с помощью газовой хроматографии.

4. РЕАГЕНТЫ

Все реагенты должны быть аналитической чистоты.

4.1. Соляная кислота 25% (m/m).

4.2. Метанол.

4.3. Этанол 96% (v/v).

4.4. Пластины с силикагелем для тонкослойной хроматографии (пластиковые или алюминиевые), покрытые флуоресцентным индикатором. Дезактивируют следующим образом: предварительно покрытые диоксидом кремния пластины опрыскивать водой до появления глазури. Опрысканные пластины оставить высыхать на воздухе при комнатной температуре от одного до трех часов.

Примечание: Если пластины не дезактивированы, возможны потери резорцина в результате необратимой адсорбции кремния.

4.5. Проявляющий растворитель: ацетон – хлороформ - уксусная кислота (объемное соотношение 20:75:5).

4.6. Стандартный раствор резорцина: растворить 400 мг резорцина в 100мл 96% этилового спирта (4.3) (1 мл соответствует 4000 µl резорцина).

4.7 Внутренний стандартный раствор: растворить 400 мг 3,5-дигидрокситолуола (ДНТ) в 100 мл 96% этилового спирта (4.3) (1 мл соответствует 4000 µl (ДНТ).

4.8. Стандартная смесь: в мерной колбе на 100 мл смешать 10 мл раствора, указанного в пункте 4.6, настоящей главы, и 10 мл раствора, указанного в пункте 4.7, настоящей главы, довести до метки 96% этанолом (4.3) и перемешать (1 мл соответствует 400 µg резорцина и 400 µg ДНТ).