Методы анализа, необходимые для проверки состава косметической продукции (II) (стр. 4 )

6.4.3.Идентифицированные окислительные красители или те, которые предполагается определить в соответствии с пунктом 5.2, разделить между точками 2 и 3 (рис. 1), расстояние между точками 1,5 см. Нанести 2 µl из каждого контрольного раствора, за исключением DАР, из которого наносят 6 µl. Эти операции произвести в среде азота (6.4.2).

6.4.4. Повторить процедуру, описанную в пункте 6.4.3, в исходных точках 4 и 5 (рис. 1) и пластинку сохранять в среде азота до момента ее хроматографирования (расстояние между точками 1,5 см).

6.4.5. Хроматографическую камеру (3.8) наполнить азотом и залить в него соответственное количество проявляющего растворителя. Поместить пластинку (6.4.4.) в камеру и проявить в первом направлении элюирования (рисунок 1) в темноте.

Элюировать пока фронт растворителя достигнет линии отметки на пластинке (примерно 13 см).

6.4.6. Вынуть пластинку из резервуара и поместить в хроматографическую камеру, предварительно заполненную азотом для испарения элюированного растворителя не менее чем 60 минут.

6.4.7. С помощью градуированной пробирки внести соответствующее количество растворителя для элюирования (6.2.) в камеру, заполненную азотом (3.8), поместить пластинку, повернутую на 90° в камеру (6.4.6), и хроматографировать во втором направлении (также в темноте), пока фронт растворителя достигнет линии, проведенной на абсорбирующей поверхности. Удалить пластинку из камеры и выпарить элюированный растворитель на воздухе.

6.4.8. Поместить пластинку на 10 минут в резервуар для хроматографии с парами йода (6.3) и определить двумерную хроматограмму, используя значения Rf и цвета для хроматографированных контрольных веществ в одно и то же время (таблица 2 является руководством для значений Rf и цветов).

Примечание: Для достижения максимальной окраски пятен, хроматограмму оставить на открытом воздухе в течение 30 минут после ее проявления.

6.4.9. Наличие окислительных красителей, указанных в пункте 6.4.8 настоящей главы, может быть окончательно подтверждено путем повторения действий, описанных в пунктах 6.4.1 ─ 6.4.8, с добавлением в исходной точке 1 в центре количества экстракта, указанного в пункте 6.4.2, 1 µl контрольных веществ, идентифицированных в пункте 6.4.8. Если не обнаруживается другая точка в сравнении с хроматограммой, полученной согласно пункту 6.4.8, интерпретация хроматограммы в пункте 6.4.8 является правильной.

Таблица 2

Цвета контрольных веществ после хроматографии и проявления с парами йода

Контрольные вещества	Цвет после проявления парами йода
R	бежевый
P	коричневый
α - n	фиолетовый
β - n	бледно-коричневый
H	фиолетово-коричневый
МPD	желто-коричневый
PPD	фиолетово-коричневый
МТD	темно-коричневый
PTD	желто-коричневый
DAP	темно-коричневый
ОАP	оранжевый
МAP	желто-коричневый
PAP	фиолетово-коричневый
2-NPPD	коричневый
4-NOPD	оранжевый

Направление II

Рис. 1

III. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРИТА

А. ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1.  ПРЕДМЕТ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий метод подходит для идентификации нитрита в косметических продуктах, в частности, в кремах и пастах.

2. ПРИНЦИП

На наличие нитрита указывает образование цветных производных с 2-аминобензальдегид фенилгидразином (Nitrin®).

3. РЕАГЕНТЫ

Все реагенты должны быть аналитической чистоты.

3.1. Приготовление разбавленного раствора серной кислоты: 2 мл концентрированной серной кислоты  (d420 = 1.84) разбавить c 11 мл дистиллированной воды.

3.2. Приготовление разбавленного раствора соляной кислоты: 1 мл концентрированной соляной кислоты (d420 = 1.84) разбавить 11 мл дистиллированной воды.

3.3. Метанол

3.4. Раствор 2-аминобензальдегид фенилгидразин (реагент Nitrin®) в метаноле.

Взвесить 2,0г Nitrin® и количественно перенести в мерную колбу на 100 мл. Каплями добавить 4 мл разбавленной соляной кислоты (3.2) и перемешать. Наполнить метанолом до метки и перемешать до полного осветления раствора.  Хранить раствор в коричневом стеклянном флаконе (4.3.).

4. ОБОРУДОВАНИЕ

4.1. Лабораторные стаканы на 50 мл.

4.2. Мерная колба на 100 мл.

4.3. Коричневая стеклянная бутылка на 125 мл.

4.4. Стеклянная пластина 10 × 10 см.

4.5. Пластиковые шпатели.

4.6. Фильтровальная бумага 10 × 10 см.

5. ПРОЦЕДУРА

5.1. Часть пробы, подлежащей анализу, равномерно распределить по стеклянной пластине (4.4), слоем толщины, не превышающей 1 см.

5.2. Лист фильтровальной бумаги (4.6) пропитать дистиллированной водой. Наложить его на пробу и придавить фильтровальную бумагу пластмассовым шпателем (4.5).

5.3. Оставить на одну минуту, и по середине фильтровальной бумаги нанести:

-  две капли разбавленной серной кислоты (3.1),

-  затем две капли раствора Nitrin ® (3.4).

5.4. После 5 до 10 секунд удалить фильтровальную бумагу и изучить при дневном свете. Наличие нитрита обозначено появлением красновато-фиолетовой окраски.

Если содержание нитрита низкое, красновато-фиолетовая окраска меняется на желтую окраску после 5 до 15 секунд. Такое же изменение окраски происходит после 1-2 минут, когда присутствует большое количество нитрита.

6. ПРИМЕЧАНИЕ

Интенсивность красновато-фиолетовой окраски и время, прошедшее до изменения в желтый цвет, дают представление о содержании нитритов в пробе.

B. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Метод описывает способ определения нитрита в косметической продукции.

2. Определение

Содержание нитрита в образце, определяемого в соответствии с настоящим методом, выражается в процентах ( % ) к массе нитрита натрия.

3. ПРИНЦИП

После разбавления образца с водой и его осветления, присутствующий нитрит подвергнуть взаимодействию с сульфаниламидом и N-1-нафталиндиамином и измерить оптическую плотность полученного цвета при 538 nm.

4. РЕАГЕНТЫ

Все реагенты должны быть аналитической чистоты.

Осветляющие реагенты: эти реагенты не могут использоваться более чем в течение одной недели после приготовления.

4.1.1. Реагент Каррез I:

Растворить 106 г цианоферрата калия (II), К4 Fe(CN)6 · 3H2O, в дистиллированной воде и разбавить водой до 1000 мл.

4.1.2. Реагент Каррез II:

Растворить 299,5 г ацетата цинка, Zn (CH3COO)2 · 2H2O и 30 мл ледяной уксусной кислоты в дистиллированной воде и разбавить водой до 1000 мл.

4.2. Раствор Нитрита натрия

В мерной колбе на 1000 мл растворить 0,500 г нитрита натрия в дистиллированной воде и разбавить водой до метки. Разбавить 10,0 мл из исходного стандартного раствора до 500 мл; 1 мл из последнего раствора = 10 µg NaNO2.

4.3. Раствор гидроксида натрия 1 n

4.4. Раствор гидрохлорид сульфаниламида 0,2%

Растворить 2,0 г сульфаниламида в 800 мл воды при нагревании. Охладить и добавить 100 мл концентрированной соляной кислоты и постоянно перемешать. Добавить воду до 1 000 мл.

4.5. Соляная кислота 5 n

4.6. Реагент N-1-нафтил:

Этот раствор должен быть приготовлен в день использования. Растворить 0,1 г дигидрохлорида N-1- нафтил этилендиамина в воде и разбавить водой до 100 мл.

5. ОБОРУДОВАНИЕ

5.1. Аналитические весы

5.2. Мерные колбы на 100, 250, 500 и 1000 мл

5.3. Градуированные или газовые пипетки

5.4. Мерные цилиндры из 100 мл

5.5. Складчатая фильтровальная бумага, без нитрита, диаметром 15 см

5.6. Водяная баня

5.7. Спектрофотометр с оптической кюветой длиной пути 1 см

5.8. Измеритель кислотности

5.9. Микробюретки на 10 мл

5.10. Лабораторные стаканы на 250 мл

6. ПРОЦЕДУРА

6.1. Взвесить с точностью до 0,1 мг примерно 0,5 г (m граммы) из гомогенизированной пробы; количественно перенести с горячей дистиллированной водой в химический стакан объемом 250 мл (5.10) и довести объем до 150 мл горячей дистиллированной водой. Стакан (5.10) поставить на водяную баню (5.6) при 80°С в течение получаса. В этот период содержимое периодически встряхивать.

6.2. Содержимое охлаждить при комнатной температуре и последовательно, при перемешивании, добавить 2 мл реагента Каррез I (4.1.1) и 2 мл реагента Каррез II (4.1.2).

6.3. Добавить раствор гидроксида натрия 1n (4.3), чтобы довести рН до 8,3 (использовать измеритель рН (5.8). Перенести количественно содержимое в мерную колбу на 250 мл (5.2) и довести до метки дистиллированной водой.

6.4. Перемешать содержимое и профильтровать через складчатую фильтровальную бумагу (5.5).

6.5. С помощью пипетки (5.3) в мерную колбу на 100 мл (5.2) перенести подходящее количество (Vml) прозрачного фильтрата, но не более 25мл, и добавить дистиллированную воду до объема в 60 мл.

6.6. После перемешивания, добавить 10,0 мл раствора гидрохлорида сульфаниламида (4.4) и 6,0 мл соляной кислоты 5 n (4.5). Смесь перемешать и выдержать в течение 5 минут. Добавить 2,0 мл реагента N-1-нафтил (4.6), перемешать и выдержать раствор в течение 3 минут. Разбавить водой до метки и перемешать.