Механизмы антиандрогенной активности комбинированного препарата дроспиренон/этинилэстрадиол (стр. 4 )

Процедура определения содержание цАМФ в лимфоцитах. После 40-минутной предварительной инкубации при 37°С к пробам, содержащим 1 мл суспензии клеток добавляли исследуемые вещества в объеме 20 мкл или 20 мкл раствора Хенкса (контрольные пробы). Концентрация клеток - 10 млн в 1 мл среды (раствор Хенкса, рН=7.4). По окончанию инкубации клетки разрушали в ледяном трис-ЭДТА-буфере (рН=7.5), пробы немедленно помещали на водяную баню при 90°С на 3 минуты, затем центрифугировали (10 минут при 8000g) и в супернатанте определяли Кконцентрацию цАМФ определяли с помощью стандартных наборов фирмы "Amersham".

Внутриклеточный уровень свободных ионов кальция в лимфоцитах оценивалипределяли с помощью флуоресцентного индикатора Fura-2/АМ по методу [Doye F., 1998].

Жизнеспособность лимфоцитов определяли методом витального окрашивания клеток трипановым синим. В отношении 1:1 суспензию клеток (3 млн в мл) смешивали с 0,2% раствором трипанового синего (приготовленного на HEPES-буфере) и через 40 секунд под микроскопом подсчитывали число окрашенных и неокрашенных клеток. Жизнеспособность оценивали в процентах по формуле:

число неокрашенных клеток

---------------------------------------- х 100%

общее число клеток

Для оценки жизнеспособности лимфоцитов в условиях инкубации их со стероидными гормонами и антигормонами 1 мл суспензии клеток инкубировали без (контроль) и в присутствии гормонов (конечная концентрация 1 – 5 мкМ) при 37о С в атмосфере, содержащей 10% СО2 в течение 4 часов. Через 2 и 4 часа из опытных и контрольных проб отбирали аликвоты суспензии клеток для оценки их жизнеспособности.

Определение относительного сродства дроспиренона в сравнении с другими гестагенами (прогестерон, ципротерон) к рецепторам андрогенов проводили радиолигандным методом. в лимфоцитах периферической крови. В пробы, содержащие по 120 мкл суспензии клеток, вносили 10 мкл раствора 3Н-тестостерона (Т) в HEPES-буфере до конечных концентраций 0,1-5 мкМ и 10 мкл избытка немеченого тестостерона. Пробы инкубировали в течение 30 минут при температуре 37°С. Специфическое связывание вычисляли как разницу между количеством связанного клетками меченого Т в отсутствие и в присутствии немеченого гормона. Конкурентный анализ связывания Т клетками в присутствии различных немеченых прогестинов (дроспиренона, прогестерона, ципротерона ацетата, АБМП), лигандов рецепторов андрогенов проводили по описанной выше схеме. Конечная концентрация препаратов среде инку­бации - 3´10-5 М. Для оценки внутриядерного связывания меченых андрогенов клетки подвергали гипоосмотическому лизису, затем с помощью дифференциального центрифугирования получали ядра лимфоцитов, в которых измеряли содержание гормон-рецепторных комплексов.

По окончанию инкубации аликвоты проб (100 мкл) быстро переносили на фильтры GF/C "Whatman" и дважды отмывали 2 мл HEPES-буфера (t=4°C). Фильтры высушивали при комнатной температуре и помещали в сцинтилляционные флаконы для определения содержания меченого Т методом жидкостной радиометрии.

Методы статистической обработки. Расчет доверительных интервалов экспериментальных значений и оценку достоверности различий между ними проводили с использованием непараметрического парного критерия Вилкоксона (для статистической оценки эффективности лечения); для определения межгрупповых различий применяли непараметрический критерий Манна-Уитни. t-Критерий Стьюдента использовали для статистического анализа данных, полученных в опытах in vitro. Достоверными считали различия при р<0,05. Результаты в тексте представлены в виде M±m.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В зависимости от степени выраженности клинических проявлений и тяжести течения дерматоза все больные были разделены на три группы: легкая, средняя и тяжелая формы течения дерматоза. Применение комбинированного препарата дроспиренон/этинилэстрадиола при терапии угревой болезни у женщин

I группа включала 7 женщин с легкой степенью течения дерматоза, Ннаибольшее число случаев – 24 женщины составляли больные со среднетяжелым течением угревой болезни (II группа), тяжелое течение заболевание было у 15 больных (III группа)., 7 женщин с легкой степенью течения дерматоза (I группа).

На фоне проводимого лечения мы наблюдали активное разрешение элементов угревой сыпи уже после первого курса. После четвертого курса лечения в 76,1% (35 больных), а после шестого курса - в 95,7% случаях наступало значительное клиническое улучшение. Все больные положительно реагировали на проводимое лечение: клиническое выздоровление мы наблюдали у 43 (93,4%) женщин, значительное улучшение у 2 (4,4%) больных и улучшение также у 1 (2,2%) женщин. При этом динамика изменения выраженности угревой сыпи по шкале Кука от первого визита к последнему в зависимости от степени тяжести течения дерматоза изменялась следующим образом (табл. 3).

Таблица 3. Динамика изменения выраженности угревой сыпи у пациентов на фоне лечения препаратом Ярина (представлены значения по шкале Кука)

У больных с легким течением заболевания общая выраженность угревой сыпи к концу 4 курса лечения составила 0,08 балла (p<0,001 по сравнению с исходным уровнем). Таким образом, терапевтическую эффективность препарата, выражающуюся в клиническом выздоровлении в данной группе, мы наблюдали после 4 курса лечения. Таким пациенткам проводили еще один курс лечения для консолидации достигнутого результата. Во второй и в третьей группах больных курс лечения составил 6 месяцев. К концу 4 курса лечения общая выраженность угревой сыпи составила 1,0 и 1,1 соответственно. Надо отметить, что лечение дроспиренон/этинилэстрадиолом женщины переносили хорошо, серьезные побочные реакции не отмечены.

Проведенное исследование показало высокую клиническую эффективность нового комбинированного препарата дроспиренон/этинилэстрадиола при лечении угревой болезни у женщин. На фоне приема препарата к концу 6 курса лечения происходит активное разрешение элементов угревой сыпи: из 46 женщин, страдающих угревой болезнью клиническое выздоровление и значительное улучшение наблюдали у 45 женщин (97.8%). В табл. 4 представлена заключительная оценка эффективности препарата дроспиренон/этинилэстрадиола.

Таблица 4. Результаты лечения угревой болезни препаратом дроспиренон/этинилэстрадиола в течение 6 месяцев

Кол-во больных	Результат лечения
Клиническое выздоровление	Значительное улучшение	Улучшение	Без эффекта
Абсабс.	%	Абсабс.	%	Абсабс.	%	Абсабс.	%	Абсабс.	%
46	100	43	93,4	2	4,4	2	2,2	-	-

Влияние комбинированного препарата дроспиренон/этинилэстрадиола на показатели гормонального обмена у женщин с андрогенозависимой формой угревой болезни

Одной из основных причин развития угревой болезни является андрогенозависимый процесс гиперсекреции кожного сала, фолликулярный гиперкератоз, и, как следствие, размножение Propionibacterium acne в блокированной сальной железе. Патогенетический подход для лечения данного дерматоза основан на применение комбинированных гормональных препаратов с антиандрогенным действием. Их эффективность связана с подавлением действия андрогенов путем блокады андрогенных рецепторов, либо путем влияния на метаболизм андрогенов.

Исследования гормонального фона показали, что препарат дроспиренон/этинилэстрадиол благоприятно влияет на андрогенные показатели, увеличивая уровень ГСПС, параллельно снижая уровень тестостерона в крови.

Для оценки влияния терапии препаратом Ярина на гормональные показатели у больных угревой болезнью мы проанализировали данные, полученные при исследовании фоновых концентраций гормонов и после 6 месячного приема препарата.

Исследования гормонального фона показали, что препарат благоприятно влияет на андрогенные показатели - увеличивая уровень ГСПС, параллельно снижая уровни тестостерона и суммарных и свободных андрогенов в моче (табл. 5).

Таблица 5. Влияние терапии препаратом дроспиренон/ этинилэстрадиол на уровень андрогенов у женщин с угревой болезнью

Показатель	Группа 1	Группа 2	Группа 3
	до	после	до	после	до	После
Тестостерон крови (нг/мл)	0.56±0.13	0.49±0.09*	0.73±0.14	0.59±0.08*	1.54±0.99	0.78±0.66**
ГСПС крови (нмоль/л)	51.67±5.0	69.17±7.33*	45.4±4.37	63.90±6.14**	31.80±7.96#	65.20±8.27**
Андрогены мочи суммарные (пг/л)	7.85±0.42	5.63±0.88*	8.60±0.62	6.13±0.95	14.32±4.29#	11.44±1.45#
Андрогены мочи свободные (пг/л)	0.37±0.03	0.35±0.06	0.55±0.08	0.38±0.03	1.03±0.21#	0.84±0.15#*

*- отличия до/после (p<0,05), #- отличия от группы 1(p<0,05), *p<0,05 ** p<0,01