Механизмы антиандрогенной активности комбинированного препарата дроспиренон/этинилэстрадиол (стр. 5 )

Исходно группы показатели 1 и 2 достоверно не отличалось. Больные группы 3 имели достоверно более низкую концентрацию ГСПС в крови (35,8±10,9 нмоль/л) и статистически значимое более высокое содержание суммарного (92,7±20,5 нг/дл) и свободного тестостерона (3,8±1,3 пг/мл) по сравнению с больными группы 1 (48,1±9,7 нмоль/л, 81,7±20,5 нг/дл и 3,2±1,4 пг/мл, соответственно).

Лечение больных группы 1 привело к повышению концентрации ГСПС (32,2%) и снижению содержания тестостерона крови (11%) и суммарных андрогенов мочи (29%).

У больных группы 2 повышение содержания ГСПС было более выраженным (40,7%), тогда как концентрация тестостерона достоверно не изменилась.

Лечение больных группы 3 привело к существенному снижению содержания тестостерона крови (50,6%) и повышению — ГСПС (52,4%), при этом концентрация ГСПС перестала отличаться от таковой у больных группы 1. Лечение дроспиренон/этинилэстрадиолом также привело к снижению концентрации свободного тестостерона в плазме крови.

На фоне лечения комбинированным препаратом не отмечено достоверного изменения концентраций гонадотропинов ФСГ и ЛГ в крови во всех изученных группах больных (данные не приведены).

Проведенное исследование показало высокую клиническую эффективность нового комбинированного препарата дроспиренон/этинилэстрадиол при лечении угревой болезни у женщин. На фоне приема препарата к концу 6 курса лечения происходит активное разрешение элементов угревой сыпи: из 46 женщин, страдающих угревой болезнью клиническое выздоровление и значительное улучшение наблюдали у 45 женщин (97,8%).

Таким образом, противоугревая эффективность исследованного нового комбинированного препарата может быть связана с его способностью как увеличивать связывание тестостерона с белками крови, так и подавлять синтез андрогенов путем ингибирования ферментов стероидогенеза. Необходимо отметить, что исходная степень выраженности акне также зависела от изучаемых параметров обмена андрогенов. Более высокий уровень тестостерона и более низкая концентрация ГСПС в плазме крови отмечены у больных с тяжелым течением дерматоза, а в результате приема сочетания дроспиренона и этинилэстрадиола эти параметры достигали значений сходных с теми, которые наблюдались у больных с легкой формой заболевания.

Специфическое связывание дроспиренона в сравнении с другими гестагенами (прогестерон, АБМП, ципротерона ацетат) рецепторами андрогенов в лимфоцитах.

В задачи данного следующего раздела работы входило проведение сравнительного исследования аффинитета (сродства) прогестерона, гестагенов с доказанной антиандрогенной активностью с внутриклеточными рецепторами андрогенов лимфоцитов периферической крови женщин с гиперандрогенией.

Результаты радиолигандного анализа связывания меченого тестостерона лимфоцитами представлены на рис. 1А. Кривая специфического связывания имеет имела характерный вид изотермы насыщения, что свидетельствует о наличии в клетках высокоспецифических участков связывания гормона. Для вычисления параметров рецепторного связывания полученные данные были представлены в координатах Скетчарда, что позволило определить количественные значения величины аффинитета и концентрации рецепторов андрогенов в лимфоцитах обследованных пациентов ((рис. 1Б).

 

Рис. 1. Специфическое связывание меченого тестостерона лимфоцитами периферической крови.

По сходной методике были рассчитаны значения равновесной константы диссоциации (Кд) и концентрации рецепторных мест (Вмакс) для меченого ДТ. Результаты радиолигандного анализа суммированы в табл. 6).

В таблице 7 приведены сведения о содержании цитозольных и ядерных рецепторов андрогенов в лимфоцитах, а также вычисленное нами значение соотношения количества ядерных/цитозольных рецепторов. Сравнение вычисленных показателей для Т и ДТ свидетельствует о достоверном увеличении содержания ГР в ядрах лимфоцитов при использовании ДТ.

Таблица 6. Параметры рецепторного связывания 3Н-тестостерона (Т) и 3Н-дигидротестостерона (ДТ) лимфоцитами периферической крови женщин с гиперандрогенией

(ГА).

ГруппаПрепарат	Параметры специфического связывания
Кд, нМ	Вмакс, фмоль/106клеток (среднее количество рецепторов на одну клетку)
Тестостерон ДигидротестостеронГА	26,0 ± 1,3 (Т) 5,1 ± 0,6 (ДТ)	13,6 ± 0,8 (Т) (7650) 16,9 ± 0,9 (ДТ) (9486)

Примечание: приведены данные независимых экспериментов (n=6)

Для выяснения функциональной активности андрогенных рецепторов на следующем этапе мы изучили дальнейшую их "судьбу", а именно оценили количество активных гормон-рецепторных комплексов в ядрах лимфоцитах, где они индуцируют строго определенные гены (не более 30) и последующее образование специфических белков в цитоплазме, которые отвечает за возникновение клеточного ответа на геном-опосредованное действие гормонов. По отношению к лимфоцитам андрогены выступают как супрессоры, они подавляют их пролиферацию, ингибируя синтез цитокинов (в частности, интерлейкина-2, ФНО-g), тропных к ним рецепторов на клеточной мембране, вплоть до индукции гибели клеток по апоптотическому механизму [Heinlein CA, Chang C., 2002].

В таблице 7 приведены сведения о содержании цитозольных и ядерных рецепторов андрогенов в лимфоцитах, а также вычисленное нами значение соотношения количества ядерных/цитозольных рецепторов. Сравнение вычисленных показателей для Т и ДТ свидетельствует о достоверном увеличении содержания ГР в ядрах лимфоцитов при использовании ДТ. В табл. 8 суммированы данные ингибиторного анализа связывания меченого ДТ лимфоцитами в присутствии тестируемых соединений.

Таблица 7. Соотношение между цитозольными и ядерными рецепторами андрогенов лимфоцитов периферической крови

Препарат	содержание рецепторов, фмоль/105 клеток	соотношение ядерные/цито-зольные рецепторы
цитозоль	ядро	общее
Тестостерон ДигидротестостеронГА	0,8±0,2 0,6±0,1	0,3±0,1 0,9±0,1	1,4±0,2 (Т) 1,7±0,2 (ДТ)	0,38 1,5

В табл. 8 суммированы данные ингибиторного анализа связывания меченого ДТ лимфоцитами в присутствии тестируемых соединений.Примечание: обозначения и условия как в табл. 6.

Полученные результаты свидетельствуют, что в зависимости от степени выраженности сродства к внутриклеточным рецепторам андрогенов в лимфоцитах изученные соединения располагаются в ряду: ципротерона ацетат > дроспиренон > прогестерон > АБМП. Выявленная закономерность одновременно отражает вероятность развития геном-опосредованного действия стероидов [Cho JJ et al., 2002].

Таблица 8 Влияние изученных соединений на специфическое связывание ДТ лимфоцитами (ингибиторный анализ)

Примечание: IC50 – значение концентрации препарата, при котором наблюдается снижение рецепторного связывания на 50%.

Полученные результаты свидетельствуют, что в зависимости от степени выраженности сродства к внутриклеточным рецепторам андрогенов в лимфоцитах изученные соединения располагаются в ряду: ципротерона ацетат > дроспиренон > прогестерон > АБМП. Выявленная закономерность одновременно отражает вероятность развития геном-опосредованного действия стероидов [Cho JJ et al., 2002].

Влияние дроспиренона на обмен вторичных мессенджеров в лимфоцитах периферической крови.

Поскольку в реализации биологической активности стероидных гормонов, кроме цитозольных, большую роль играют их плазмомембранные рецепторы, в задачи данной работы входило изучение ранних экстрагеномных мембранотропных эффектов дроспиренона на систему вторичных мессенджеров в лимфоцитах периферической крови человека.

Одним из критериев, свидетельствующих о чувствительности клеток к гормональному воздействию, является антипролиферативное действие гормонов, которое обусловлено их способностью ингибировать ранние этапы активации лимфоидных клеток. К таким ранним этапам относятся изменения в системе вторичных мессенджеров (Са2+; цАМФ), являющихся триггерными пусковым механизмам активации и деления клеток.

Внутриклеточный уровень ионов кальция ([Са2+]цит) в покоящихся клетках не превышал значения 110 нМ (98±12 нМ). Внесение в суспензию клеток 3 мкМ дроспиренона (соответствует средней терапевтической концентрации гестагена в плазме крови) не приводило к достоверному изменению концентрации Са2+.