Методы анализа необходимые для проверки состава косметической продукции (III) (стр. 6 )

4.1. Этилацетат.

4.2. N-метил-N-нитрозо-p-толуолсульфонамид (диазалд).

4.3. Диэтиловый эфир.

4.4. Метанол.

4.5. 2- (2-этоксиэтокси) этанол (карбитол).

4.6. Муравьиная кислота.

4.7. Гидроксид калия, 50% (m/m) водный раствор (свежеприготовленный ежедневно).

4.8. Гексан для спектроскопии.

4.9. Бромхлорофен (стандарт № 1).

4:10. 4,4 ', 6,6'-тетрахлор-2,2'-тиодифенол (стандарт № 2).

4:11. 2,4,4'-трихлор-2-гидрокси-дифениловый эфир (стандарт № 3).

4:12. Ацетон.

4.13. Серная кислота, 4 М.

4:14. Целит AW.

4:15. Муравьиная кислота / этилацетат, 10% (v/v) раствор.

4:16. Гексахлорофен.

5. АППАРАТУРА

5,1. Стандартное лабораторное оборудование.

5.2. Мини-аппарат для приготовления диазометана (Аnalyt. Chem., 1973, 45, 2302-2).

5.3. Газовый хроматограф, оснащенный детектором электронного захвата 63 Ni.

6. ПРОЦЕДУРА

6.1. Подготовка стандартных растворов

Стандарт выбирается так, чтобы он не мешал любому веществу, которое содержится в наполнителе анализируемого продукта. Как правило, наиболее подходящим является стандарт  № 1 (4.9).

6.1.1. В мерной колбе объемом 100 мл взвесить точно 50 мг стандартного р-ра № 1, 2 или 3 (4.9, 4.10 или 4.11) и 50 мг гексахлорофена (4.16). Довести до метки  этилацетатом (4.1) (раствор А). 10 мл раствора А разбавить до 100 мл этилацетатом (4.1) (раствор В).

6.1.2. В мерной колбе объемом 100 мл взвесить точно около 50 мг стандартного раствора № 1, 2 или 3 (4.9, 4.10 или 4.11). Полученный объем довести до метки этилацетатом (4.1) (раствор В).

6.2. Подготовка пробы (4)

Точно взвесить 1г гомогенизированной пробы и тщательно перемешать с 1 мл серной кислоты (4.13), 15 мл ацетона (4.12) и 8 г целита AW (4.14). Смесь сушить на воздухе на паровой бане в течение 30 минут, затем сушить  30 мин. в вентилируемой печи. Остаток охладить, измельчить на мелкие кусочки и перенести в стеклянную колонку. Элюировать этилацетатом (4.1) и собрать 100 мл. Добавить 2 мл внутреннего стандарта (раствор C) (6.1.2).

6.3. Метилирование пробы

Все реагенты и устройство охладить до 0 - 4°С в течение двух часов. Во внешний отсек  аппарата для приготовления диазометана внести 1,2 мл полученного раствора  ( 6.2) и 0,1 мл метанола (4.4). В центральный резервуар ввести около 200 мг diazald (4.2), добавить 1 мл карбитола (4.5) и 1 мл диэтилового эфира (4.3) и растворить. Устройство подключить и  наполовину погрузить в баню при 0 ° С и с помощью шприца в центральный резервуар ввести около 1 мл охлажденного раствора гидроксида калия (4.7). Убедиться, что соединение образовавшегося диазометана желтого цвета является прочным. Если желтый цвет не сохраняется, повторить метилирование с другими 200 мг diazald (4.2) (5).

Через 15 минут устройство вынуть из ванны и затем в закрытом виде держать в  течение 12 часов при комнатной температуре. Устройство открыть, обработать избыток диазометана добавлением нескольких капель 10% (v/v) раствора муравьиной кислоты в этилацетате (4.15) и перенести органический раствор в 25 мл мерную колбу. Довести до метки гексаном (4.8).

Впрыснуть в  хроматограф  1,5 µl этого раствора.

6.4. Метилирование стандарта

Все реагенты и устройство охладить до температуры 0-4 ° С в течение двух часов. В наружный отсек аппарата для  диазометана  ввести:

- 0,2 мл раствора В (6.1.1);

- 1 мл этилацетата (4.1);

- 0,1 мл метанола (4,4).

Продолжить  метилирование, как описано в 6.3. В хроматограф  ввести 1,5 µl полученного раствора.

7. ГАЗОВАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

Колонна должна дать разрешение "R", по крайней мере, равное или больше, 1,5, где:

где:

r 1 и r 2	-	время удерживания (в минутах);
W 1 и W 2	-	ширина пика на половине высоты (в миллиметрах);
d '	-	скорость (в миллиметрах в минуту).

Установлены следующие условия газовой хроматографии:

колонка: нержавеющая сталь;

- длина: 1,7 м;

- диаметр: 3 мм;

Наполнитель сhromosorb: WAW

- сито анализ: 80 - 100 ячеек;

- стационарная фаза: 10% OV 17;

- температура:

- колонка: 280 ° С;

- инжектор: 280 ° С;

- детектор: 280 ° С;

- газ-носитель: азот, не содержащий кислорода;

- давление: 2,3 бар;

- скорость потока: 30 мл / мин.

8. РАСЧЕТ

8.1. Коэффициент пропорциональности гексахлорофена

Данный коэффициент рассчитывается относительно выбранного стандарта в отношение к стандартной смеси,

где:

h	-	гексахлорофен;
к h	-	коэффициент его пропорциональности;
m'h	-	его масса (в граммах) в смеси;
A'h	-	площадь его пика;
S	-	выбранный стандарт;
m's	-	его масса (в граммах) в смеси;
A's	-	его площадь пика;

тогда:

8.2. Количество гексахлорофена в пробе

где:

h	-	Гексахлорофен;
к h	-	коэффициент его пропорциональности;
Ah	-	площадь его пика;
s	-	выбранный стандарт;
ms	-	его масса (в граммах) в смеси;
As	-	площадь его пика;
М	-	масса (в граммах)  пробы;

тогда % (m/m)  гексахлорофена в пробе:

9. ПОВТОРЯЕМОСТЬ (№)

При  содержании гексахлорофена 0,1% (m/m) разница между результатами двух параллельных определений, проведенных с одной и  той же пробой, не должна превышать абсолютное значение % 0,005% (m/m).

VII. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ TOSYLCHLORAMIDЕ  НАТРИЯ (ХЛОРАМИН-Т)

1. ПРЕДМЕТ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Этот метод применяется для количественного определения tosylchloramide натрия (хлорамин-Т) в косметических продуктах с помощью тонкослойной хроматографии.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Содержание хлорамина-T в пробе, определяемое этим методом, выражается в процентах массы (m/m).

3. ПРИНЦИП

Хлорамин-Т полностью гидролизуется с 4-toluenesulphonamide кипячением с хлористоводородной кислотой.

Количество полученного 4-toluenesulphonamide определяется с помощью тонкослойной хроматографии.

4. РЕАГЕНТЫ

Все реагенты должны быть аналитической чистоты.

4.1. Тосилхлорамид натрия (хлорамин-Т).

4.2. Стандартный раствор 4-toluenesulphonamide: 50 мг 4-toluenesulphonamide в 100 мл этанола (4.5).

4.3. Соляная кислота, 37% (m/m), d204 = 1,18 г / мл.

4.4. Диэтиловый эфир.

4.5. Этанол, 96% (v/v).

4.6. Подвижная фаза

4.6.1. 1-бутанол/ этанол (4.5)/ вода (40: 4: 9; v / v / v); или

4.6.2. Хлороформ ацетон (6: 4; v/v).

4.7. Готовые ТСХ пластины на силикагеле 60, без флуоресцентного индикатора.

4.8. Перманганат калия.

4.9. Соляная кислота, 15% (m/m).

4:10. Реагент для распыления: 2-толуидин, 1% (m /v) раствор  в этаноле (4.5).

5. ОБОРУДОВАНИЕ

5,1. Стандартное лабораторное оборудование.

5.2. Стандартное оборудование для тонкослойной хроматографии.

5.3. Фотоденсиметр.

6. ПРОЦЕДУРА

6.1. Гидролиз

В 50 мл круглодонной колбе точно взвесить около 1 г пробы ("m") . Добавить 5 мл воды и 5 мл соляной кислоты (4.3) и кипятить в течение одного часа, используя дефлегматор. Горячий pаствор немедленно перенести в 50 мл флакон. Дать остыть и довести до метки водой. Центрифугировать, по крайней мере 5 минут при 3000 оборотах в минуту и пропустить жидкость супенатант через фильтр.

6.2. Экстракция

6.2.1. Взять по 30 мл фильтрата и экстрагировать трижды с 15 мл диэтилового эфира (4.4). При необходимости, высушить эфирные фазы и собрать в склянку на 50 мл. Довести до  метки диэтиловым эфиром (4.4).

6.2.2. Взять 25 мл высушенного эфирного экстракта и выпарить досуха в потоке азота. Остаток повторно растворить в 1 мл этанола (4.5).

6.3. Тонкослойная хроматография

6.3.1. На пластину для тонкослойной хроматографии (4.7) нанести 20 µl этанольного остатка (6.2).

Таким же образом нанести 8, 12, 16 и 20 µl стандартного раствора 4-toluenesulphonamide (4.2).

6.3.2. Затем погрузить пластину в растворитель на высоту 150 mm (4.6.1 или 4.6.2).

6.3.3. После полного испарения растворителя с поверхности, поместить пластину на 2-3 минуты в атмосферу паров хлора, которая производится путем заливки около 100 мл соляной кислоты (4.9) в  примерно 2 г перманганата калия (4.8) в закрытом контейнере. Избыток хлора  удалить нагреванием пластинки до 100°С в течение 5 минут, затем опрыскать пластинку реагентом 4.10.

6.4. Измерение

Примерно через час измерить фиолетовые пятна с помощью фотоденситометра на 525 nm.

6.5. Рисование эталонных кривых

Определить значения максимальной высоты пиков, установленных для четырех 4-toluenesulphonamide пятен, соответствующих количествам 4-toluenesulphonamide (т. е. 4, 6, 8, 10 µl 4-toluenesulphonamide на пятне).