Становление медиаторного этапа нервного аппарата челюстно-лицевой области в пренатальном онтогенезе человека и лабораторных животных (стр. 2 )

Основные научные результаты опубликованы в 36 научных работах, из которых 13 - в научных изданиях, рекомендованных Комитетом по контролю в сфере образования и науки МОН РК, 15 - написаны без соавторства; 6 – в изданиях дальнего зарубежья. По материалам диссертации изданы 3 учебных пособия.        

Апробация диссертации

Основные положения диссертационной работы изложены на:

Международной научно-практической конференции (16-17 октября, 2008), «Актуальные вопросы патофизиологии и медицины» Алматы, 2008; Международной конференции (Польша, 2008) Miedzynarodowej konferencji “Naukowy potencjal swiata -2008” 12-20 wrzesnla 2008 roku, tum 8 Medycyna Naukl biologiczne Weterynaria, Przemysl, Nauka I studia; Международной научно-практической конференции (Болгария, 2008) «Бъдещето проблемите на световната наука – 2008» 17-25 декември 2008.- София «Бял ГРАД-БГ;  Мiedzynarodowej konferencji “Naukowy potencjal swiata -2008” 12-20 wrzesnla 2008 roku, Medycyna Naukl biologiczne Weterynaria, Przemysl, Nauka I studia; Научно-практической конференции в рамках «Дни университета» Алматы, декабрь, 2008г.; Международной научно-практической конференции (Кейптаун, 2008) The 17 cоnference of the international  federation of associations of anatomists (IFAA); Международном Конгрессе врачей-стоматологов «Проблемы современной стоматологии Казахстана» Алматы, 11-14 мая 2008г.; Международной научно-практической конференции «Приоритеты реализации программы профилактики стоматологических заболеваний у детей»  Алматы, 12-15 мая 2009г.; Евразийском симпозиуме «Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо - и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма» по вопросам фундаментальной и прикладной медицины, 13-16 августа.- Бишкек, 2009г.; Республиканской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75 – летию кафедры клинической анатомии и оперативной хирургии «Современные проблемы теоретической и клинической морфологии» 3 декабря.-  Алматы, 2009; V Mezinarodni vedecko – prakticka conference “Veda a vznik – 2009/2010” 27 prosincu 2009 – 05 ledna 2010 Dil 19 Lekarstvi Zverolekarstvi biologicke vedy chemie a chemicka technologie ekologie zemepis a geologie.- Praha, 2009-2010; X конгрессе Международной ассоциации морфологов (29-30 сентября, 2010г. - г. Ярославль)

       Предварительное обсуждение диссертации проведено на совместном заседании морфологических кафедр и НППК КазНМУ им.   и ученого совета Алматинского стоматологического института последипломного обучения (07.04.2010г).

Содержание работы

Материал и методы исследования

2.1 Экспериментально-морфологическое исследование

2.1.1  Материал исследования

Материалом  для  исследования  в  4 главе служили  зародыши  человека, находившиеся на  17 (11 - 14 мм  теменно-копчиковой  длины) – 23 (28-30 мм ТКД) стадиях эмбрионального развития по Карнеги (O'Rahilly R. et al., 1981) .  Зародышей получали  в  родильных  домах  № 1 и № 2 г.  Алматы  в результате abrasio при неотягощенной беременности,  а  также  использовали  микропрепараты  из коллекции кафедры. Всего было изучено  144 эмбриона. Распределение объектов исследования по стадиям эмбриогенеза приведено в таблице

Таблица 1 – Характеристика эмбриологического материала человека

Стадия Карнеги	Кол-во образцов
17	11
18	15
19	19
20	22
21	25
22	26
23	26

Материал фиксировали 12%-ным  нейтральным  формалином  или  холодным ацетоном и по стандартной методике заключали в парафиновые блоки, из  которых  готовили  серийные  срезы  толщиной 10 мкм.

В 5 главе работа носила экспериментальный характер и была выполнена  на белых беспородных крысах, содержавшихся в  стандартных условиях вивария КазНМУ, то есть при температуре 22 – 24 градуса, естественном освещении, свободном доступе к корму и воде.

Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов и выведения их из опыта был составлен в соответствии с рекомендациями ВОЗ.

Перед включением в эксперимент все животные прошли необходимый карантин и подвергались осмотру перед исследованием. Все болезненные процедуры и выведение из эксперимента проводили с использованием нембутала (наркоз в дозах 30-50 мг/кг массы, эвтаназия - 100-150 мг/кг массы, в зависимости от вида животных). Контрольные группы формировались с учетом массы и возраста животных, во всех случаях определены границы биологической нормы для всех тестируемых показателей.

Для получения самок с датированным сроком беременности 3 самки ссаживали с 1 самцом. Первым днем беременности считали день обнаружения спермы во влагалищном мазке. Покрытых самок рассаживали по разным клеткам.  В работе использовали эмбрионы первой трети беременности (14, 15, 16,-дневные и новорожденных крысят обоего пола.

2.1.2  Характеристика экспериментальных моделей

Закономерности морфофункциональных преобразований в нервном аппарате ЧЛО  и параллельно развивающиеся изменения в тканях и органах-мишенях были изучены в эксперименте с использованием трех моделей ингибирования трансмиттеров.

1 серия – модель дефицита ацетилхолина. Для моделирования состояния недостатка ацетилхолина,  беременным самкам крыс вводили  платифилин в до­зе 0,2 мг/кг массы внутрибрюшинно ежедневно. [, 1998, , с соавт., 2002].  2 серия – модель дефицита норадреналина. Для моделирования состояния недостатка адреналина,  беременным самкам крыс вводили пропранолол в дозе 0,5 мг/кг массы внутрибрюшинно ежедневно. [, 1998, , с соавт., 2002]. 3 серия – модель дефицита серотонина. Использовался метод ингибирования ключевого фермента синтеза серотонина  – триптофангидроксилазы парахлорфенилаланином (пХФА). Беременным самкам  вводили пХФА однократно внутрибрюшинно в дозе 400 мг/кг. Доза была выбрана с учетом литературных данных, свидетельствующих о том, что пХФА в дозе 300-400 мг/кг как у взрослых животных, так и у их плодов вызывает длительное снижение уровня содержания серотонина (до 50-80%). Снижение уровня серотонина происходит постепенно, достигает максимума через 3-е суток и сохраняется пониженным в течение 5-6 суток (Науменко, Е. В., 1971; и др., 1975; Keller H. H., 1972; Lauder J. M. et al., 1985).

Животные каждой серии эксперимента делились на группы в зависимости от времени  экспериментального воздействия. В первой группе эксперимент начинался на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза. Во второй - на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза.

Гистологическое исследование проводили  на 16 сутки эмбриогенеза (Е 16)  и в первый день постнатального онтогенеза. В соответствии со временем проведения исследования группы животных во всех трех сериях были разделены на подгруппы. 

В качестве контроля использовали блоки ЧЛО потомков соответствующих стадий развития, полученных от матерей, которым вводили физиологический раствор на соответственных сроках беременности. Распределение животных по группам представлено в таблице.

Таблица 2 – Характеристика экспериментального материала

Модель эксперимента	Вид животного	Характеристика группы	Характеристика серии	Кол-во живот­ных
Дефицит ацетилхолина	Крысы	Группа сравнения	контроль	10
1 группа Экспериментальное воздействие на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза	14 сут. пренатального онтогенеза	11
15 сут. пренатального онтогенеза	11
16 сут. пренатального онтогенеза	11
1 сутки постнатального онтогенеза	9
2 группа Экспериментальное воздействие на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза	14 сут. пренатального онтогенеза	10
15 сут. пренатального онтогенеза	10
16 сут. пренатального онтогенеза	10
1 сутки постнатального онтогенеза	9
Дефицит норадреналина	Крысы	Группа сравнения	контроль	10
1 группа Экспериментальное воздействие на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза	14 сут. пренатального онтогенеза	11
15 сут. пренатального онтогенеза	11
16 сут. пренатального онтогенеза	11
1 сутки постнатального онтогенеза	9
2 группа Экспериментальное воздействие на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза	14 сут. пренатального онтогенеза	10
15 сут. пренатального онтогенеза	10
16 сут. пренатального онтогенеза	10
1 сутки постнатального онтогенеза	9
Дефицит  серотонина	Крысы	Группа сравнения	контроль	10
1 группа Экспериментальное воздействие на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза	14 сут. пренатального онтогенеза	11
15 сут. пренатального онтогенеза	11
16 сут. пренатального онтогенеза	11
1 сутки постнатального онтогенеза	9
2 группа Экспериментальное воздействие на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза	14 сут. пренатального онтогенеза	10
15 сут. пренатального онтогенеза	10
16 сут. пренатального онтогенеза	10
1 сутки постнатального онтогенеза	9
Всего животных	273

Биохимическая верификация деплеции нейротрансмиттера проведена во всех сериях экспери­ментов.