Становление медиаторного этапа нервного аппарата челюстно-лицевой области в пренатальном онтогенезе человека и лабораторных животных (стр. 3 )

2.1.3 Методы исследования

При морфологическом исследовании тканей ЧЛО  бы­ли использованы общепринятые методики с окрасками гематоксилином и эозином, кармином (по Бесту), по Фельгену, Суданом III и нильским голубым. В двух последних случаях использовали свежезаморожен­ные срезы. Исследование нервной ткани было дополнительно проведено при окраске по Нисслю, серебрением после фиксации в растворе Буэна.

Полученные микропрепараты были описаны, с типичных из них - из­готовлены микрофотограммы. Фотосъемка препаратов проведена с использованием мультиголовочного микроскопа «Leika» (Швейцария) на кафедре патологической анатомии и судебной медицины КазНМУ. В дальней­шем съемка сочеталась с количественным морфологическим исследовани­ем. Морфометрическое исследование было проведено в соответствии со сложившимися принципами системного количественного анализа [, 1996,2002].

Для прямого морфометрического исследования был использован компьютерный комплекс «Морфотест» (Россия). Он включал в себя бинокулярный исследовательский микроскоп «Leika», аналого-цифровой преобразователь, компьютер с высокоразрешающим цветным принтером и программное обеспечение.

Морфометрические исследования были также проведены в ядросодержащих и проводящих структурах нервной системы. В ка­честве показателей состояния нейронов были выбраны средний объем ядер (мкм3), объемная доля ядер (мкм3/мкм3) и площадь поверхности ядер (мкм2). Для характеристики нервных структур использовали такие по­казатели, как относительный объем (мкм3/мкм3)  и плотность осевых цилин­дров (на 1 мм сечения) и среднее сечение осевого цилиндра (мкм2).

Флуоресцентно—гистохимические и цитоспектрофлуориметрические методы:

Использовали  метод Фалька-Хилларпа в модификации для выявления медиаторспецифичных нервных элементов в криостатных срезах блоков ЧЛО эмбрионов крыс.

Флуоресцентно-гистохимический метод А. Бъерклунда в модификации и (1987) с использованием глиоксиловой кислоты для выявления нейромедиаторов в нервных волокнах на криостатных срезах блоков ЧЛО.

По замерам интенсивности флуоресценции можно судить о количественном содержании (концентрации) катехоламинов ( и др., 1982; , 1989; Scheuermann W., Stach W.,1987).

Для выявления холинергических нервных окончаний материал обрабатывали по методу Карновского – Рутс.

Выявление хромаффинной ткани по Визелю (Wiesel).

В результате окраски по Визелю хромаффинные клетки окрашиваются в зеленый цвет, а остальные клетки (строма, нервные клетки) - в синеватый цвет.

Сопоставление пренатального развития крысы и человека

При проведении сравнительного анализа морфометрических  данных  пренатального  онтогенеза  человека  и  белых  беспородных  лабораторных крыс необходимо было соотнести между собой  дни развития их организмов.

Для этого мы  воспользовались методом, предложенным (2007). 

2.1.4 Математическая обработка полученных данных

Статистическая обработка проведена общепринятыми для медико-биологических исследований методами с помощью программных пакетов. При регрес­сионном анализе выявлены наиболее значимые показатели, определение которых целесообразно для оценки влияния концентрации материнских нейротрансмиттеров на выраженность повреждения тканей ЧЛО.

Корреляционный анализ проводился методом простых парных кор­реляций Спирмена. Особое внимание уделяли корреляциям между показателями выраженности нарушений в нервном аппарате и морфометрическими показа­телями в тканях развивающейся ЧЛО (ось «тяжесть — гистопатология»). Достоверными счита­ли корреляции с показателем r, по модулю большим 0,66 [, 2000; Петри Л., Сабин К., 2003].

2.2 Изучение частоты и структуры ВПР ЧЛО в Республике Казахстан

В соответствии с поставленными целью и задачами, на первом этапе нами была изучена распространенность и структура врожденных пороков развития в Республике Казахстан  за период с 2000 - 2009 гг. Частоту рождения определяли в интенсивных показателях - на 1000 живорожденных. Был изучен вклад пороков развития челюстно-лицевой области в структуру ВПР за исследуемый период. Исследование проводилось ретроспективно, путем изучения официальных статистических данных Минздрава РК, публикуемых в «Сборнике статистических показателей» ежегодно, изучения источников Медицинского информационно-аналитического центра (МИАЦ), путем анализа материалов отчетности главных стоматологов областей РК.

Далее был изучен спектр и динамика пороков развития челюстно-лицевой области за период исследования. Источник информации оставался прежним.

В исследовании нами использовалась Международная классификация болезней 10-го пересмотра (МКБ-10).

2.2.1  Клинические методы обследования

Клиническое обследование детей с ВПР ЧЛО проводилось в четырех регионах РК.

Под наблюдением находились 174 ребенка в возрасте от 1 до 10 лет.  Группу сравнения составили  90 детей, не имевших врожденных пороков развития ЧЛО  того же возраста.

Таблица 3 -  Распределение обследованных  по полу и  возрасту.

Возраст в годах	Основная группа	Группа сравнения
1 - 4	56	30
5 – 6	57	30
7 – 10	61	30

Стоматологическое обследование складывалось из нескольких основных этапов: опроса, инструментальных и лабораторных методов обследования. Полученные данные вносились в модифицированную карту обследования, разработанную на основе предложенной ВОЗ (1999), в которой содержались сведения о возрасте, перенесенных и сопутствующих заболеваниях, субъективных и объективных данных состояния зубов, пародонта, слизистой оболочки полости рта, характере и режиме питания. Определение стоматологического уровня здоровья проводилось по .

2.3  Оценка влияния факторов риска

Для оценки факторов риска было проведено исследование «случай-контроль» и проанализированы вероятные факторы риска ВПР ЧЛО. Объектом стали женщины, родившие детей с ВПР ЧЛО (основная группа) и женщины, родившие детей без ВПР (группа сравнения).  Исследование проводилось на основании данных анкетирования за 3 года. Всего в работе проанализированы анкеты 1158 женщин. В основную группу вошли 386 женщин, родившие детей с ВПР ЧЛО (Q35-Q37 по МКБ X) и 772 женщины, родившие детей без ВПР. Семьи дали информированное согласие на участие в исследовании.  Для достоверности результатов формировались группы, сходные по признакам: возраст, беременность, место проживания. Различие между группами должно было состоять только в факте наличия (основная группа) или отсутствия (группа сравнения) ВПР ЧЛО у родившегося ребенка. Исследование, преимущественно, было направлено на изучение факторов риска, связанных с состоянием здоровья матери, ее социально-бытовым статусом, особенностями питания и режима, а также медико-бытовых факторов, воздействовавших в течение раннего внутриутробного развития. Для этого нами  были  разработаны  специальные вопросники, которые женщинам было предложено заполнить. В основном вопроснике содержались демографические данные; сведения по репродуктивной сфере, бытовых и социальных условиях жизни, а также по поводу вредных привычек и наличию других воздействий на ранних сроках беременности. Второй вопросник касался качественного и количественного приема пищи, был разработан с учетом региональных особенностей.

Следующий этап состоял в оценке воздействия изучаемых факторов риска. Ретроспективно оценивалась частота  воздействия возможных  факторов  риска  в  обеих  группах. Для оценки факторов риска развития ВПР ЧЛО в обследованной популяции мы применили статистический показатель соотношение шансов ((Odds Ratio) или OR в англоязычной литературе), который в последние годы широко используется в зарубежных медицинских сообщениях. Отношение шансов рассматривается как отношение числа больных, имеющих фактор риска, к числу не имеющих его в опытной и контрольной группах. Этот показатель принимает значения от 0 до бесконечности и равен 1 только при отсутствии зависимости. Чем больше значение показателя OR, тем больше относительный риск развития патологии, связанной с наличием этого фактора.
Кроме того, нами был применен  способ множественной логистической регрессии (, , 2008), который позволяет оценить совместное влияние многих факторов на зависимую переменную, принимающую два значения (есть ВПР ЧЛО - 1, нет ВПР ЧЛО - 0). После сбора, проверки, группировки и сводки данных была проведена их статистическая обработка с использованием пакета прикладных программ для машинной обработки.  Математическое моделирование риска развития ВПР ЧЛО проводили в несколько этапов: обоснование сравнимости исследуемых групп, выбор метода обработки результатов, статистический анализ полученного материала и компьютерная обработка с использованием стандартных и авторских программных продуктов.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Основные этапы и закономерности развития иннервации челюстно-лицевого аппарата в пренатальном онтогенезе

В течение эмбрионального периода человека (точнее во второй его половине) в результате дисперсии кле­ток изначально компактных парасимпатических узлов головы вдоль их периферических ветвей формируется система узлов с наличием глав­ного и связанных с ним дополнительных микроганглиев.

У всех изученных эмбрионов самой крупной ветвью тройничного нерва на протяжении всего исследуемого периода являлась третья ветвь. Верхнечелюстная и глазничная ветви были  примерно одина­ковой толщины.

Процесс формирования ветвей тройничного нерва протекает в опре­деленной последовательности: первоначально каждая из основных вет­вей представляется в виде короткого ствола, состоящего из переплетаю­щихся, извитых нервных волокон. Затем количество волокон увеличива­ется, они становятся прямыми и лежат параллельно. В это время начинается формирование ветвей второго порядка, которые в строении повторяют раннюю стадию развития основных ветвей тройничного нер­ва.