УДК 619:616.98:579.852. 13Н
КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА FUSOBACTERIUM NECROPHORUM
ШТАММА «ИВ», ИСПОЛЬЗУЕМОГО ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕНА
ПРИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ
// Актуальные проблемы патологии животных: Материалы Международного съезда терапевтов, диагностов. - Барнаул, 2005. - С. 102-104.
ГНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока»,
г, Новосибирск, Россия
Некробактериоз - инфекционная болезнь животных бактериальной этиологии, характеризующаяся гнойно-некротическими поражениями тканей нижних частей конечностей, кожи тела и подлежащих тканей, а также слизистых оболочек пищеварительного тракта и внутренних органов (печень, легкие, ротовая полость, половые органы и др.). Болезнь известна давно, но описывалась под названиями: копытная болезнь, парша губ, эпизоотический стоматит ягнят, дифтерия ягнят, гангренозный мокрец лошадей, копытка северных оленей.
К некробактериозу восприимчивы все виды животных, в том числе и человек.
В последние годы ученые ведущих научно-исследовательских ветеринарных учреждений России (ВИЭВ, ВГНКИ, МВА) разработали несколько вакцин против некробактериоза крупного рогатого скота для применения в неблагополучных хозяйствах: инактивированная формолвакцина против некробактериоза животных, инактивированная ассоциированную вакцина против некробактериоза крупного рогатого скота «Нековак» [1] и инактивированная эмульгированная вакцина [2].
102
Контроль эффективности применения вакцин определяют ежемесячно по титру антител сыворотки крови. В настоящее время для обнаружения антител против возбудителя некробактериоза F. pecrophorum используют реакцию агглютинации (РА). Для постановки реакции необходим антиген ЛГ) F. necrophorum. В доступной отечественной литературе мы не встретили работ, сообщающих [методику изготовления АГ F. necrophorum для JPA, утвержденную директивными органами РФ. Ранее в своих исследованиях РА использовали ученые ВИЭВ [3, 4], НИИСХ Крайнего Севера [5]. Однако каждый из этих авторов использовал свою методика изготовления АГ.
Исходя из имеющихся сведений мы поставили перед собой задачу - разработать методику конструирования АГ F. necrophorum, постановку и оценку РА с целью возможного ее применения при некробактериозе.
Для изготовления антигена использовали культуру Fusobacterium necrophorum штамма «ИВ», которую выделили из пораженной конечности коровы, принадлежащей неблагополучному хозяйству. Эта культура принята на депонирование Научно-исследовательским институтом коллекции культур микроорганизмов (НИИ ККМ) Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» (Справка № 000 от 01.01.01 г.). Принятая культура Fusobacterium necrophorum в НИИ ККМ получила регистрационный номер В-845.
Культура F. Necrophorum штамма «ИВ» - это тонкие разной длины грамотрицательные палочки с хорошо выраженной зернистостью с шаровидными или грушевидными вздутиями. Бактерия является строгим анаэробом, неподвижна, капсулы и споры не образует. Fusobacterium necrophorum на среде Китта-Тароцци растет с равномерным помутнением и выпадением на вторые сутки рыхлого осадка. Рост культуры сопровождался умеренным газообразованием, гнилостным запахом.
Биохимические свойства: Fusobacterium necrophorum не разлагает глюкозу, сахарозу, манит, лактозу, мальтозу, рафинозу, арабинозу, галактозу, рамнозу, не свертывает молоко, не разжижает желатин. Культура образует индол и сероводород. Fusobacterium necrophorum штамма «ИВ» вызывает гемолиз эритроцитов лошади.
При иммунизации инактивированными микробными клетками Fusobacterium necrophorum штамма «ИВ» у крупного рогатого скота вырабатываются агглютинины.
Fusobacterium necrophorum штамма «ИВ» патогенна для белых мышей. Доза LD50 Для белых мышей составляет 8,9-103 микробных клеток.
Fusobacterium necrophorum штамма «ИВ» длительно хранится на среде Китта-Тароцци путем ~.фесевов с интервалом 2 недели.
Для приготовления антигена F. Necrophorum культуру выращивали двое суток на среде Китта-Тароцци, затем пересевали на специальную среду аминокровин-сывороточный бульон (АКСБ). На АКСБ рН 7,6-7,8 культуру выращивали 3 суток при температуре 37°С. Бактериальные клетки освобождали от среды путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 20 мин., промывали физио-:тическим раствором 5-6 раз. Осадок ресуспендировали в фосфатном буфере (рН 7,6) до концентрации 10 млрд микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту. Антиген инактивировали 0,4%-ным эаствором формалина. Стерильность антигена определяли путем посева на среды Китта-Тароцци, МПА, МПБ.
При постановке РА вначале готовят основное разведение каждой испытуемой сыворотки. Для этого в первую пробирку ряда вносят 2,4 мл фосфатного буфера и 0,1 мл сыворотки. Получается раз-зедение сыворотки 1:25, из которого готовят ряд последовательных двукратных разведений. Затем во всe пробирки с разведенными сыворотками вносят микропипеткой 0,1 мл антигена. Перед употреб--ением антиген тщательно встряхивают. Для контроля антигена, с целью исключения самоагглюти-;ции, в 1 мл фосфатного буфера добавляют 0,1 мл антигена. Штатив с пробирками встряхивают и помещают в термостат при температуре 37°С на 15-18 часов, а затем выдерживают при комнатной температуре 2-3 часа, после чего учитывают реакцию агглютинации.
Учет реакции проводят невооруженным глазом (визуально). Результаты РА определяют в крестах.
Показатели агглютинации в пробирках на четыре, три или два креста характеризуются как по-кительная реакция. Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация с оценками на два, три или четыре креста, считают ее титром.
Антиген из данного штамма использовали для исследования 10400 проб сыворотки крови вакцинированных и 4700 невакцинированных контрольных коров, у которых отмечали как положительные реакции разной степени качества, так и отрицательные в зависимости от разведения.
Таким образом, штамм «ИВ» Fusobacterium necrophorum может быть использован для изготовления антигена, применяемого в реакции агглютинации при некробактериозе.
103
Библиографический список
1., , и др. Система мероприятий по борьбе с некро-
бактериозом крупного рогатого скота и копытной гнилью // Ветеринария. 1999. № 6. С. 23-27.
2. , , и др. Терапия и специфическая профилак
тика при некробактериозе // Ветеринария. 1999. № 8. С. 11-12.
3. Коваленко сельскохозяйственных животных. М., 19с.
4. Мусаев оценка иммуногенных свойств эпизоотических штаммов F. пе-
crophorum: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 19с.
5. Соломаха идентификация Bact. necrophorum и обнаружение антител к
ним в сыворотках крови северных оленей иммунофлуоресцентным методом: Автореф. дис. канд. вет.
наук. М., 1973. 17с.
104
