Оценивая выраженность противоопухолевого эффекта лупановых агентов, вводившихся через 2 сут после перевивки опухоли и на фоне сформировавшегося узла, можно сделать вывод об их относительно невысокой противоопухолевой активности, которая не превышала 50% по критерию ТРО и существенно уступала эффекту ЦФ. Вместе с тем, необходимо отметить, что изучаемые соединения не оказывали стимулирующего действия на рост трансплантатов. Наиболее значимую противоопухолевую активность демонстрировали БК и ее аланиламидные производные, 3-оксо-28-(N-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (of-15), 3-оксо-28-(N-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (of-41), 3β,28-ди-О-никотинат бетулина (of-3), нитроксил БК (А75), N-[3-оксо-лупано-28-ил]-4¢-метилпиперазин и N-[3-оксо-лупано-28-ил]-4¢-этилпиперазин (М-Ме и М-Et).
На основании результатов скрининга тритерпеноидов ряда лупана для дальнейшего исследования в качестве потенциальных корректоров цитостатиков были выбраны следующие соединения: БК, ее метиловый эфир (МеБК), 2-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оиламино]-пропионовая кислота (α-алаБК), ее метиловый эфир (Ме-α-алаБК), 3-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оиламино]-пропионовая кислота (β-алаБК), ее метиловый эфир (Ме-β-алаБК), 3-оксо-28-(N-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (of-41), 3-оксо-28-(N-метилпиперазин)-карбонил-луп-20(29)-ен (of-15) и 3β,28-ди-О-никотинат бетулина (of-3).
Морфологический анализ и клеточные механизмы политаргетных эффектов
тритерпеноидов в условиях изолированного и комбинированного введения
c противоопухолевыми препаратами
Исследование клеточных механизмов коррекции бетулоновой кислотой и ее β-аланиламидом цитотоксических эффектов циклофосфана у интактных животных. Ведущим осложнением при лечении ЦФ является угнетение иммунной системы и кроветворения. Введение экспериментальным животным этого алкилирующего препарата в токсических и субтоксических дозах вызывает глубокие и стойкие нарушения практически во всех ростках гемопоэза ( и др., 2000). Для клинической картины ЦФ также характерно поражение печени, вызванное токсическими продуктами его метаболизма. Клинически данный тип поражения печени характеризуется ее увеличением, болезненностью и асцитом, развитием вено-окклюзионного синдрома и симптомами острого гепатита ( и , 2002). Образующийся при метаболизме ЦФ акролеин вызывает поражение почек и тяжелый геморрагический цистит. ЦФ также обладает кардиотоксическими свойствами ( и др., 2009).
В данной работе для оценки общей картины полиорганных повреждений, вызванных ЦФ, и их коррекции бетулоновой кислотой и ее β-аланиламидом, использовали интегральный показатель – коэффициенты массы внутренних органов. Анализ полученных данных выявил достоверный ингибирующий эффект ЦФ на лимфоидные органы – тимус и селезенку (табл. 5). В группе с изолированным введением цитостатика относительная масса тимуса на 4-й день опыта снизилась в 5 раз, а селезенки – в 2 раза относительно контроля. К 14-му дню в этой же группе мышей масса тимуса отставала в 1,4 раза, а масса селезенки превысила в 2,5 раза соответствующие показатели контрольной группы. Под действием ЦФ происходило достоверное повышение массы экскреторных органов, обусловленное их кровенаполнением вследствие нарушения гемодинамики. Масса почек на 4-й день увеличилась в 1,3 раза по сравнению с контролем и оставалась повышенной до конца эксперимента, в конце опыта значимо повысились коэффициенты масс печени и легких.
Таблица 5. Изменение коэффициентов массы внутренних органов на 4-й и 14-й дни опыта под влиянием введения БК и β-алаБК на фоне циклофосфана (M±m) | ||||||||||
Группа | Печень | Селезенка | Почки | Легкие | Тимус | |||||
4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | |
Контроль | 4,93±0,28 | 4,74±0,25 | 0,76±0,12 | 0,61±0,02 | 0,73±0,03 | 0,70±0,02 | 0,73±0,07 | 0,62±0,03 | 0,20±0,0 | 0,17±0,02 |
ЦФ | 4,87±0,12 | 5,83±0,03* | 0,37±0,07* | 1,53±0,22* | 0,9±0,04* | 0,86±0,04* | 0,68±0,02 | 1,21±0,42* | 0,04±0,00*** | 0,12±0,04** |
ЦФ+БК | 5,32±0,25 | 5,79±0,66 | 0,43±0,02* | 1,15±0,25 | 0,81±0,02 | 0,89±0,05* | 0,74±0,07 | 1,14±0,19* | 0,04±0,00*** | 0,08±0,01** |
ЦФ+β-алаБК | 5,17±0,11 | 5,00±0,13 | 0,96±0,09### | 0,78±0,09# | 0,73±0,03 | 0,72±0,03 | 0,69±0,05 | 0,67±0,06 | 0,23±0,02### | 0,23±0,01**# |
БК | 5,26±0,12 | 5,22±0,12 | 0,38±0,06* | 0,77±0,11 | 0,95±0,03** | 0,90±0,07 | 0,75±0,05 | 0,80±0,05 | 0,07±0,01*** | 0,08±0,02* |
β-алаБК | 5,01±0,09 | 4,97±0,37 | 0,86±0,03 | 0,77±0,09 | 0,78±0,66 | 0,74±0,04 | 0,66±0,04 | 0,64±0,05 | 0,19±0,01 | 0,19±0,02 |
Примечание. * - р<0,05, ** - р<0,01 относительно контроля. | ||||||||||
Введение β-алаБК на фоне ЦФ полностью купировало его депрессивный эффект на тимус и селезенку, а также нормализовало массу экскреторных органов. Введение БК в тех же условиях не купировало негативный эффект цитостатика на оба лимфоидных органа в течение всего наблюдаемого периода и не оказало регулирующего влияния на массу выделительных органов. В режиме изолированного введения β-аланиламид не оказывал влияния на массу лимфоидных органов, в то время как БК, подобно ЦФ, вызвала такое же продолжительное угнетение тимуса и временное угнетение селезенки.
По данным литературы, однократное введение ЦФ в максимально переносимой дозе приводит к длительно сохраняющейся (до 6 мес) дезорганизации клеточного состава тимуса и нарушению функционального состояния клеток иммунной системы ( и др., 2000; , 2008). Известно, что снижение численности Thy1,2+ в костном мозге приводит к подавлению образования селезеночных колоний. Показано, что тимоциты необходимы для миграции КОЕ-С из костного мозга в селезенку, а также для активации колониеобразования в селезенке ( и др., 1999, 2008). Поэтому отмеченное нами снижение массы селезенки на 4-й день эксперимента в группах с изолированным введением ЦФ и его совместным введением с БК можно объяснить как значительным угнетением гемопоэза в костном мозге, так и выраженным угнетением тимуса в этот период.
В ряде работ показано, что восстановление массы селезенки сопровождается увеличением ее клеточности, связанной с активной миграцией костномозговых стволовых и некоммитированных кроветворных клеток в селезенку, что совпадает по времени с активным восстановлением гемопоэза в костном мозге. Восстановление массы селезенки происходит в большей степени за счет ее заселения клетками миелоидного ряда, тогда как численность лимфоцитарной колонии увеличивается позже [Barcew K., 2008, Sïefc L., 2003]. Эти данные объясняют развитие спленомегалии в группах с изолированным введением ЦФ и с его сочетанным введением с БК к 14-му дню опыта и косвенно указывают на восстановление кроветворной функции костного мозга и селезенки.
Отмеченные выше изменения в состоянии органов кроветворения нашли отражение в картине периферической крови крыс (табл. 6). Под влиянием ЦФ в первые четыре дня у животных развилась тяжелая лейкопения (снижение лейкоцитов в 13 раз), которая к 14-му дню сменилась лейкоцитозом (увеличение лейкоцитов в 3,6 раза). В этих условиях БК и β-алаБК оказали модулирующий эффект, снижая выраженность как лейкопении (в 1,4 раза), так впоследствии и лейкоцитоза (в 1,3 – 1,7 раза относительно циклофосфана). При изолированном введении оба тритерпеноидных агента не вызвали статистически значимых изменений в содержание лейкоцитов периферической крови.
Введение тритерпеноидов на фоне ЦФ не оказало значимого влияния на вызванные им сдвиги в количестве тромбоцитов и эритроцитов. Динамика изменений показателей гематокрита и гемоглобина в группе с ЦФ и тритерпеноидами была аналогична динамике изменения количества эритроцитов.
Таблица 6. Изменения в картине периферической крови на 4-й и 14-й дни опыта после введения БК и β-алаБК на фоне циклофосфана (M±m) | ||||||||||
Группа | Гематологические показатели | |||||||||
RBC | HCT | WBC | HGB | PLT | ||||||
4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | |
Контроль | 5,94±0,55 | 5,65±0,23 | 32,9±3,4 | 31,8±0,7 | 12,4±0,5 | 14,1±2,1 | 16,4±1,2 | 16,2±0,1 | 210±14 | 193±8 |
ЦФ | 5,20±0,27 | 4,7±0,27* | 28,0±1,4 | 23,6±0,8** | 0,9±0,1* | 51,2±6,2** | 15,2±0,6 | 12,2±0,7** | 101±9*** | 371±23** |
ЦФ+БК | 5,11±0,17 | 4,74±0,25 | 27,0±1,0 | 27,2±1,4 | 1,3±0,2* | 39,7±4,9** | 14,6±0,5 | 13,9±0,5* | 95±8*** | 336±47 |
ЦФ+ β-алаБК | 4,96±0,31 | 4,69±0,46 | 28,5±1,7 | 25,1±2,7 | 1,3±0,2* | 30,3±4,8* | 15,7±0,9 | 15,3±0,6 | 138±16* | 387±20*** |
БК | 5,09±0,10 | 4,88±0,18* | 27,2±0,7 | 26,2±1,0** | 12,7±0,8 | 12,5±1,7 | 14,9±0,5 | 14,8±1,7 | 195±16 | 193±12 |
β-алаБК | 5,07±0,19 | 5,83±0,31 | 26,3±0,8* | 31,1±1,8 | 18,2±3,6 | 14,3±4,1 | 14,5±0,4 | 17,0±0,7 | 213±28 | 198±13 |
Примечание. RBC – число эритроцитов, HCT – гематокрит, PLT – число тромбоцитов, WBC – число лейкоцитов, HGB – концентрация гемоглобина. * - р<0,05, ** - р<0,01 относительно контроля. | ||||||||||
Анализ лейкоцитарной формулы показал, что лейкопения, выявленная у крыс через 4 дня после введения ЦФ, обеспечивалась в основном за счет значительного угнетения гранулоцитарного ростка крови, прежде всего сегментоядерных нейтрофилов, количество которых снизилось в 3,4 раза относительно контроля (табл. 7). БК и ее β-аланиламид, вводимые на фоне цитостатика, оказали в тот же период корригирующий эффект, достоверно снизив вызванную им нейтропению соответственно в 2,5 и 1,9 раз. К 14-му дню опыта во всех группах, которым вводили ЦФ, содержание гранулоцитов в крови нормализовалось. Обращает на себя внимание появление палочкоядерных нейтрофилов в группах с сочетанным введением ЦФ и обоих тритерпеноидов, свидетельствующее о стимуляции гранулопоэза в костном мозге. Следует отметить, что сами по себе тритерпеноиды не вызвали достоверных изменений в гранулоцитарном профиле в течение всего периода наблюдений.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 |
