На 15-е сутки после ПХТ СНОР у животных референсной группы объемная плотность нефроцитов, находящихся в состоянии дистрофии, превышала соответствующие показатели в контроле в 37,5 раз, в состоянии некроза – в 3,2 раза. Сужение просвета капсулы составляло 27% от контроля (табл. 12).

Таблица 12. Влияние БК и ее β-аланиламидных производных на морфометрические показатели ткани почек крыс в поститостатическом периоде

Группа

Паренхима Vv,%

Дистрофия Vv,%

Некрозы Vv,%

Диаметр сосудистого клубочка

Просвет капсулы

Контроль

96,87±0,28

0,35±0,10

0,18±0,07

2,97±0,04

0,32±0,01

ПХТ

92,16±0,21

13,14±0,38*

0,58±0,06*

2,92±0,04

0,09±0,01*

ПХТ+БК

91,27±0,28

3,63±0,26#

0,51±0,07*

2,61±0,04

0,26±0,04#

ПХТ+ β-алаБК

91,6±0,44

4,53±0,20*#

0,24±0,05*#

2,88±0,03

0,26±0,01#

ПХТ+ Ме-β-алаБК

91,62±0,43

4,11±0,18*#

0,23±0,05*#

2,85±0,05

0,14±0,01

Примечание. * - р<0,05 в сравнении с контролем; # - р<0,05 в сравнении с ПХТ.

Оценка влияния изучаемых соединений на альтеративные процессы в почках, вызванные СНОР, показала, что тритерпеноиды существенно ослабляли нефротоксическое действие цитостатических препаратов. Введение крысам БК и ее производных вызывало снижение объемной плотности нефроцитов в состоянии дистрофии по сравнению с изолированным введением цитостатиков. На фоне БК объемная плотность нефроцитов проксимальных канальцев в состоянии дистрофии уменьшилась на 72%, на фоне β-алаБК – на 65%, Ме-β-алаБК– на 69%. Объемные плотности некрозов снижались у животных, получавших β-алаБК – в 2,4 раза, Ме-β-алаБК – в 2,5 раза, тогда как под влиянием БК существенного снижения не наблюдалось. Все тритерпеноиды, кроме Ме-β-алаБК, способствовали восстановлению просвета капсулы (табл. 16).

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Таким образом, курсовое введение БК, и особенно ее аланинамидных производных в постцитостатическом периоде, уменьшало признаки токсического нефроза, оказывая позитивное влияние на состояние нефрона.

Морфологическое исследование печени показало, что на 15-й день после введения комплекса цитостатических препаратов ее балочная структура в основном сохранялась, однако в ней наблюдались выраженные альтеративные изменения: отек интерстиция, полнокровие вен, значительное сужение синусоидальных капилляров, просвет которых местами не определялся. Отмечены дистрофия гепатоцитов, фокальные микронекрозы, наиболее выраженные в центральных отделах долек.

Объемная плотность дистрофических и некротических изменений под влиянием цитостатиков достигала 64,82 и 11,37% объема паренхимы (табл. 13). У животных в группе с изолированным введением цитостатических препаратов наблюдалось снижение, относительно контроля, объемной плотности синусоидов на 46,43%, увеличение цитоплазмы гепатоцитов на 15,28%, снижение ядерно-цитоплазматического отношения на 20%. Количество двуядерных гепатоцитов снизилось на 38,63%, что свидетельствует о депрессии пролиферативных процессов.

Введение тритерпеноидов способствовало восстановлению гистологической картины печени. В печеночной паренхиме наблюдалось уменьшение отека, увеличение просвета синусоидов, сокращение количества некротизированных участков, цитолитических повреждений гепатоцитов, количества клеток с пикнотическими ядрами. Отмечено умеренное неравномерное полнокровие сосудов (центральных вен) и синусоидных капилляров преимущественно в центре долек. Тритерпеноиды достоверно уменьшали степень выраженности альтеративных изменений гепатоцитов, вызванных введением цитостатических препаратов. Введение БК вызвало достоверное уменьшение в 11,5 раз объемной плотности гепатоцитов в состоянии дистрофии относительно референсной группы (ПХТ – 64,8%, БК – 5,6%). В группах животных с введением β-алаБК и Ме-β-алаБК также наблюдалось достоверное снижение объемной плотности дистрофических изменений в 4 и 6,6 раза соответственно, однако по степени выраженности гепатозащитного действия аланиламидные производные уступали БК. Введение БК на фоне ПХТ уменьшало в 6,6 раза показатель объемной плотности некрозов (ПХТ – 11,3%, БК – 1,7%). Введение животным аланинамидных производных БК после ПХТ сопровождалось недостоверным снижением объемной плотности некрозов. Согласно данным таблицы, все тритерпеноиды восстанавливали до нормы объемную плотность синусоидов.

Таблица 13. Влияние БК и ее β-аланиламидных производных на морфометрические показатели ткани печени крыс в постцитостатическом периоде

Группа

Дистрофия, Vv,%

Некрозы, Vv,%

Синусоиды, Vv,%

Двуядерные гепатоциты

Отношение Я/Ц

Контроль

2,78±0,42

1,19±0,31

25,63±0,83

7,74±0,51

0,25±0,009

ПХТ

64,82±1,15*

11,31±0,60*

13,74±1,40*

4,75±0,46

0,20±0,01*

ПХТ+БК

5,63±0,6#

1,72±0,63#

31,51±1,08#

6,46±0,5

0,28±0,02

ПХТ+ β-алаБК

16,39±0,77*#

7,36±1,18

23,22±0,99

6,95±0,56

0,26±0,02

ПХТ+ Ме-β-алаБК

16,47±1,17*#

6,14±0,68

24,63±1,26

0,31±0,02

0,31±0,02

Примечание. Я/Ц – ядерно-цитоплазматическое отношение. * - р<0,05 в сравнении с контролем; # - р<0,05 в сравнении с ПХТ.

Нормализация структуры печени под влиянием БК и ее производных сопровождалась увеличением объемной плотности ядер при сохранении нормальной плотности цитоплазмы, что привело к достоверному повышению ядерно-цитоплазматического отношения в этих группах. Полученные результаты указывают на усиление синтетических процессов в клетках печени, что свидетельствует о повышении их функциональной активности. В связи с этим обращает на себя внимание, что Ме-β-алаБК в большей степени, чем остальные тритерпеноиды увеличивал ядерно-цитоплазматическое отношение и количество двуядерных гепатоцитов.

Данные морфологического анализа свидетельствуют о том, что коррекция лупановыми тритерпеноидами структурных повреждений в тканях и клеточных компартментах в результате изолированного введения цитостатиков или их комбинации здоровым животным, обеспечивается в основном противовоспалительным действием данных агентов. Основываясь на данных различных исследователей, свидетельствующих об индукции тритерпеноидами цитопротекторных сигнальных путей в ответ на действие провоспалительных факторов, можно предположить, что производные бетулоновой кислоты на фоне введения цитостатиков активируют сигнальный путь Nrf2. Этот вывод подтверждается данными группы исследователей, которые обнаружили у ряда цианопроизводных бетулоновой кислоты способность подавлять индуцированную макрофагами синтазу окиси азота и активировать NAD(P)H хинон оксидоредуктазу и гемоксигеназу – ферменты второй фазы репарационного ответа, с помощью которых клетки подавляют развитие электрофильного или окислительного стресса (Liby K. Et al., 2007).

Еще одним доказательством выдвинутого предположения являются результаты исследования, в котором изучалось влияние тритерпеноида олеонанового типа ODDO-Im на развитие острого Т-клеточного воспаления в печени мышей, вызванного введением конковалина А (Osburn W. O. et al., 2008). В данной модели развитие иммуногенного воспалительного процесса сопровождается выделением активированными макрофагами про-воспалительных цитокинов, что приводит к некрозам гепатоцитов. Используя различные линии нокаутных мышей, авторы показали, что ODDO-Im уменьшает воспалительное повреждение печени путем активации генов сигнального пути Nrf2, уменьшая при этом экспрессию про-воспалительных генов и снижая секрецию эффекторных клеток на поздних стадиях воспаления. Эти результаты продемонстрировали, что усиление сигнализации Nrf2 обеспечивает мощную защиту печени от воспалительного и иммуногенного некроза гепатоцитов.

Другой возможной мишенью лупановых соединений могут являться белки-регулятоы сигнального пути NFκB, выступающего ключевым регулятором воспалительного процесса и контролирующего экспрессию различных цитокинов и факторов адгезии (Lu H. Et al., 2006). Лупановые тритерпеноиды – бетулин и бетулиновая кислота, как было показано на культуре стимулированных IFN-γ макрофагов, подавляют активность выделяемых ими провоспалительных цитокинов IL-1, TNF-α, а также снижают активность индуцибельных синтазы окиси азота и циклоосигеназы-2 (Suh N. Et al., 1998, 1999). Аналогичные результаты были получены на такой же модели для лупеола (Fernandes M. A. et al., 2001) и ряда олеонановых и урсановых тритерпеноидов (Honda T. et al., 1997). Приведенные данные могут являться доказательством кардиопротекторного действия олеоноловой и урсоловой кислот в модели оксидативного повреждения миокарда, вызванного введением некрозогенного агента изопротеринола (Senthil S. Et al., 2007). В последнем случае тритерпеноиды существенно снижали количество некротизированных клеток и уровень ТБАС в ишемизированном миокарде.

Полученные нами данные свидетельствуют о вовлеченности иммунной системы в механизмы корректирующего влияния лупановых тритерпеноидов. На это указывают модулирующий эффект бетулоновой кислоты и ее производных на численность клеток гранулоцитарно-моноцитарного ряда, являющихся эффекторами иммунных и воспалительных реакций, а также выявленное тимус-протекторное действие этих агентов. Сообщалось, что иммунорегулирующая активность характерна также для других тритерпеноидов – олеаноловой и урсоловой кислот (Rafael TJ Kuttan, 2003) и их производных (Hsu H-J et al., 1997), бетулиновой и бетулоновой кислот и их амидов ( и др., 2001). На тесную связь противовоспалительных и иммунокорректорных свойств лупановых агентов указывают данные (Zdzisinska B. Et al., 2003), полученные на культуре цельной крови человека. Они показывают, что бетулиновая кислота не влияет на продукцию секретируемого стимулированным моноцитами TNF-α, но уменьшает соотношение IFN-γ/ IL-10. Принимая во внимание, что про-воспалительный IFN-γ секретируется популяцией Th1 клеток, а противовоспалительный IL-10 – популяцией Th2, то можно сделать заключение о сложном характере регуляторных взаимодействий тритерпеноидов с их молекулярными мишенями в клетке.

Таким образом, на основании приведенных данных можно предположить, что механизмы цитопротекторного действия лупановых тритерпеноидов могут обеспечиваться их регулирующим влиянием на внутриклеточную сигнальную трансдукцию, а также на клеточные и гуморальные факторы иммунной системы, контролирующие процессы воспаления и оксидативного стресса.

Оценка политаргетного действия тритерпеноидов в условиях цитостатической

полихимиотерапии СНОР у животных с перевиваемыми опухолями

Влияние бетулоновой кислоты и ее производных на морфологию печени мышей с перевитой карциномой легких Льюис (LLC) на фоне ПХТ. В печени животных с перевитой карциномой Льюис выявлены морфологические изменения, связанные с общим и местным влиянием опухоли, а также изменения, обусловленные проведением ПХТ и введением изучаемых химических соединений. У мышей всех групп наблюдались очаговые клеточные метастазы, часто в просвете синусоидов с активным делением в них опухолевых клеток.

У мышей с LLC (контрольная группа) отмечались в разной степени выраженности проявления регенераторно-пластической недостаточности гепатоцитов (дистрофия, атрофия некоторых клеток). Ведущим типом поражения гепатоцитов была очаговая «опустошенность» цитоплазмы, ассоциированная с лизисом и секвестрацией гранул гликогена. В то же время вблизи портальных трактов отмечалась пролиферация гепатоцитов, появление небольших двуядерных клеток с ацидофильной цитоплазмой и гиперхромными ядрами. Появление мелких двуядерных гепатоцитов в условиях метастазирования свидетельствует о сохранении их регенераторного потенциала. Нарушения гемодинамики проявлялись в виде неравномерного полнокровия и частичной окклюзии просвета синусоидов. Стенки сосудов были PAS-положительными, толуидиновый синий вызывал их метахроматическое окрашивание, а при окраске по методу ван Гизона соединительная ткань в этих структурах не выявлялась. На полутонких срезах в просветах синусоидов обнаруживались звездчатые клетки и полинуклеарные лейкоциты.

ПХТ обусловливала массивную гибель гепатоцитов с формированием крупных очагов некроза. Во многих гепатоцитах отмечалась крупно - и мелкокапельная липидная инфильтрация цитоплазмы (размеры жировых капель иногда были сопоставимы или превышали размеры ядер). Гликоген в виде разной степени интенсивности PAS-положительных скоплений выявлялся преимущественно в гепатоцитах перипортальных зон; во многих гепатоцитах наблюдалось истощение запасов гликогена с формированием в этих участках «оптически» пустых пространств. Отмеченные морфологические изменения гепатоцитов характерны и для действия других лекарственных препаратов и расцениваются некоторыми авторами как стереотипные ( и др., 2008; и др., 2010). При проведении ПХТ на 88% возрастала доля моноцеллюлярных некрозов гепатоцитов в центролобулярных зонах (табл. 14). Доля синусоидов со свободными просветами уменьшалась на 21%.

Таблица 14. Стереологический анализ печени при введении бетулоновой кислоты и ее производных на фоне полихимиотерапии мышей с перевитой карциномой Льюис (M±m)

Группа

Объемная плотность, Vv, %

дистрофические измененные гепатоциты

некротически измененные гепатоциты

синусоиды

лейкоциты

метастазы

Контроль (LLC)

0,64±0,22

0,09±0,13

0,21±0,22

0,020±0,06

0,050±0,009

LLC + ПХТ

0,62±0,03

0,15±0,09**

0,15±0,06*

0,028±0,07

0,046±0,010

LLC + ПХТ + БК

0,59±0,04

0,09±0,09

0,21±0,02

0,06±0,02

0,03±0,010*

LLC +ПХТ + МеБК

0,62±0,01

0,12±0,01

0,21±0,01

0,024±0,005

0,034±0,008*

LLC +ПХТ+Ме-β-алаБК

0,63±0,01

0,12±0,02

0,17±0,01

0,036±0,008

0,034±0,008*

LLC +ПХТ +β-алаБК

0,61±0,03

0,07±0,01#

0,18±0,01

0,017±0,007

0,043±0,030

LLC +БК

0,64±0,04

0,11±0,05

0,19±0,03

0,023±0,005

0,038±0,030

LLC +МеБК

0,64±0,06

0,09±0,08

0,19±0,09

0,025±0,030

0,055±0,020

LLC +Ме-β-алаБК

0,64±0,05

0,09±0,07

0,16±0,08

0,024±0,020

0,051±0,030

LLC +β-алаБК

0,63±0,08

0,04±0,05**

0,27±0,05*

0,024±0,020

0,022±0,020*

Примечание. LLC – карцинома легких Льюис, ПХТ – полихимиотерапия; БК – бетулоновая кислота; МеБК – метиловый эфир БК. * – p < 0,05, ** – p < 0,01 – по сравнению с контролем; # – p < 0,05 – по сравнению с LLC+ ПХТ.

Введение тритерпеноидов на фоне ПХТ обусловливало изменения структуры гепатоцитов и синусоидов. При введении БК и β-алаБК доля дистрофически измененных гепатоцитов существенно не изменялась по сравнению с контролем и ПХТ, но выраженность изменений была меньше: в гепатоцитах практически отсутствовали зоны «опустошения» цитоплазмы и липидная инфильтрация, отмечалась незначительная субплазмалеммальная вакуолизация цитоплазмы. Доля моноцеллюлярных некрозов после введения БК и β-алаБК уменьшилась соответственно на 42 и 53% при сравнении с ПХТ, но не с контролем. Введение мышам МеБК и Ме β-алаБК на фоне ПХТ не приводило к существенному снижению объемной плотности некротически измененных гепатоцитов по сравнению с ПХТ.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9