В условиях цитостатического воздействия были выявлены определенные сдвиги в количестве циркулирующих мононуклеаров. После введения ЦФ у крыс наблюдалось тенденциозное повышение моноцитов, а также небольшой лимфоцитоз, который компенсировался к 14-му дню опыта. На этом фоне β-аланиламид БК уже в ранние сроки нормализовал количество моноцитов (снижение в 1,6 раз), тогда как БК достигла такого же эффекта в конце эксперимента. Ведение тритерпеноидов в изолированном режиме не влияло на содержание моноцитов – оно было близко к норме в течение всего опыта. Содержание лимфоцитов в группах с введением БК и ее β-аланиламида в целом не имело достоверной разницы с контролем.
Таблица 7. Изменения показателей лейкоцитарной формулы на 4-й и 14-й дни опыта после введения БК и β-алаБК на фоне циклофосфана (M±m) | ||||||||||
Группа | Эозинофилы | Нейтрофилы | Моноциты | Лимфоциты | ||||||
палочкоядерные | сегментоядерные | |||||||||
4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | 4 | 14 | |
Контроль | 2±1 | 1,5±0,5 | - | - | 21,2±2,5 | 27±4,7 | 7,3±1,7 | 4,3±0,9 | 63±1,5 | 68±3,8 |
ЦФ | 1±0 | 1±0 | - | - | 6,3±0,9*** | 30,3±7,1 | 12±1,4 | 10±1,5 | 82±2,1*** | 59±6,1 |
ЦФ+БК | 1,5±0,5 | 4,7±1,5 | - | 2±0,6 | 15,5±2,4## | 27±3,7 | 11,3±1,2 | 6,4±0,7 | 73±1,9** | 63±4,3 |
ЦФ+ β-алаБК | - | 1±0 | - | 2±1 | 12,2±1,8*# | 48,3±9,7 | 7,3±1,3 | 7,7±1,7 | 74±5,9 | 42±9,5 |
БК | 1,8±0,5 | 1±0 | 1±0 | - | 19±2,2 | 23±2,0 | 8,5±1,1 | 6±0,7 | 72±3,1 | 71±1,5 |
β-алаБК | 1,5±0,3 | 5±0 | 1,5±0,5 | - | 16,2±2,4 | 22±4,6 | 9,3±1,1 | 6,8±0,6 | 74±2,4 | 70±5,8 |
Примечание. * - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001 относительно контроля; # - р<0,05, ## - р<0,01 относительно циклофосфана. | ||||||||||
Выявленная динамика изменения клеточного состава крови подтверждается литературными данными, описывающими состояние костномозгового кроветворения после введения ЦФ ( и др., 1999, и др., 2009). Известно, что через сутки после введения цитостатика в максимально переносимой дозе, происходит значительное угнетение гранулоцитарного ростка костного мозга, что сопровождается резким уменьшением количества гемопоэтических островков. К 5-м суткам количество нейтрофилов возрастает, достигая максимума к 8 – 12-му дню ( и др., 1999, и др., 2009). Эти данные согласуются с наблюдавшимся нами увеличением количества лейкоцитов в крови через 14 дней после введения цитостатика, существенно превышавшим их число в контроле. В то же время в крови сохранялись признаки угнетения эритрона.
Выявленные сдвиги в состоянии периферической крови, а также в массе селезенки и тимуса, вызванные действием ЦФ, в целом соответствовали описанной в литературе картине морфофункциональных изменений в системе кроветворения. Выраженность гематотоксического эффекта ЦФ в нашем опыте определялась введенной дозой препарата, которая составляла ½ от максимально переносимой. В этих условиях гемопротекторное действие БК и ее β-аланиламида было направлено преимущественно на гранулоцито-моноцитарный росток и выражалась в модуляции патологических сдвигов, вызванных ЦФ.
У аланиламида БК дополнительно было установлено протекторное действие в отношении тимуса и селезенки, которое выражалось в поддержании их нормальной массы в течение опыта. Это обстоятельство позволяет предположить сохранение под действием β-алаБК клеточного пула Thy1,2+, и сделать вывод о иммунопротекторном действии агента. Кроме того, сохранение функциональной активности тимуса могло способствовать активизации процессов дифференцировки предшественников в костном мозге, что не потребовало дополнительной стимуляции кроветворной функции селезенки. БК не оказала корректирующего влияния на депрессивный эффект ЦФ в отношении как тимуса, так и селезенки.
Морфологические изменения печени через 3 сут после введения ЦФ проявлялись в виде мелкоочаговых некрозов паренхимы, распространявшихся от портальных трактов. Отмечались нарушения гемодинамики – неравномерное полнокровие синусоидов, центральных и портальных вен. В расширенных просветах синусоидов находились многочисленные мононуклеарные клетки, преимущественно клетки Купфера. К гепатотоксическим эффектам ЦФ следует отнести и выраженную субплазмалеммальную «вакуолизацию» цитоплазмы гепатоцитов. Регенераторные реакции гепатоцитов проявлялись в усилении их митотической активности, особенно в перипортальной зоне, где возрастало количество двуядерных гепатоцитов.
К 14-м суткам после введения ЦФ происходило нарастание воспалительноклеточной инфильтрации, развивался тромбоз и обтурирование (особенно клетками Купфера) просветов синусоидов, центральных и портальных вен. Регенераторные реакции гепатоцитов в этот срок проявлялись в усилении цитокинеза двуядерных клеток (уменьшении их числа) и увеличении популяции «мелких» одноядерных гепатоцитов, направленных на восстановление общей численности гепатоцитов. Некробиотические изменения гепатоцитов и стимуляция их регенераторных реакций были наиболее выраженными в перипортальных зонах. Портальный и перипортальный склероз, выявляемый в более поздние сроки после введения ЦФ, свидетельствовал о наиболее выраженных повреждениях цитотоксическими агентами клеточных популяций портальных зон печени.
В печени животных после введения ЦФ и БК отмечалось уменьшение степени полнокровия как в крупных сосудах, так и в синусоидах. В гепатоцитах как центролобулярных, так и перипортальных зон выявлялась очаговая дистрофия. Отмечались некрозы отдельных гепатоцитов. После введения ЦФ и амида БК сохранялось более выраженное, по сравнению с ЦФ и БК, полнокровие сосудов. По всей паренхиме выявлялись коагуляционные некрозы отдельных гепатоцитов. В то же время регистрировались гепатоциты, находившиеся на разных фазах митотического цикла, и двуядерные клетки. В группах животных получавших БК и амид БК в режиме изолированного введения гистологическое строение печени существенно не отличалось от контроля. Однако при введении амида БК отмечалась более значительная активация эндотелиоцитов синусоидов, чем при БК. К признакам корректорного влияния амида на фоне ЦФ можно отнести усиление регенераторных процессов в печени в виде повышения митотической активности гепатоцитов и увеличения количества двуядерных клеток.
По данным ультраструктурного анализа, внутриклеточная реорганизация гепатоцитов после однократного введения ЦФ определялась выраженными изменениями тонкой структуры митохондрий, транзиторными изменениями гранулярной цитоплазматической сети (расширениями профилей и частичной дегрануляцией), значительной редукцией гладкой цитоплазматической сети, гиперплазией и гипертрофией структурных элементов комплекса Гольджи. Характерной особенностью внутриклеточной реорганизации гепатоцитов обеих зон через 3 сут после введения ЦФ были лизис и секвестрация гранул гликогена, которые регистрировались во всех клетках, но различались по интенсивности. В наибольшей степени эти процессы были выражены в гепатоцитах перипортальной зоны.
Значительным изменениям подвергалось микроциркуляторное русло печеночной дольки. Через 3 сут после введения ЦФ регистрировалась гетерогенность эндотелиоцитов синусоидных капилляров, которая была обусловлена преимущественно присутствием в эндотелиальной выстилке активированных форм клеток и некробиотически измененных клеток. Через 14 сут после введения ЦФ ультраструктурные изменения гепатоцитов усиливались. В первую очередь это касалось тонкого строения митохондрий и скоплений гранул гликогена. Тонкая структура митохондрий была значительно изменена, они содержали, как правило, электронно-плотный матрикс, но кристы в них практически не различались; отмечалась «осмиофильная» дегенерация митохондрий с образованием остаточных телец. Выстилка синусоидов была представлена как активированными, так и дегенеративными формами эндотелиоцитов. Важной особенностью поражения печени после введения ЦФ можно считать массивную обтурацию синусоидов клетками Купфера и лимфоцитами с образованием тромботических масс, носивших распространенный характер.
При изолированном введении БК и ее амида отмечались сходные изменения ультраструктуры гепатоцитов. Через 3 сут ультраструктура гепатоцитов в обоих случаях была близка к норме, но отмечалось нарушение тонкой структуры митохондрий. Митохондрии, как правило, были с электронно-плотным матриксом, в котором плохо различались кристы. При этом усиливалась эндоцитозная и трансцитозная функции гепатоцитов: на синусоидальном полюсе регистрировалось большое количество эндоцитозных (пиноцитозных) везикул, на билиарном полюсе – многочисленные везикулы гладкой цитоплазматической сети, гипертрофированный комплекс Гольджи. Желчные капилляры, как правило, были расширенными, в них присутствовали небольшие осмиофильные структуры. Вблизи желчных капилляров часто встречались остаточные тельца с мелкой осмиофильной зернистостью.
Повышенная эндоцитозная (пиноцитозная) активность также была характерна для активированных форм эндотелиоцитов и клеток Купфера. В синусоидах часто располагались переходные формы моноцитов – клетки с большим бобовидным ядром, электронно-прозрачной цитоплазмой, в которой присутствовали многочисленные укороченные трубочки гранулярной цитоплазматической сети, первичные лизосомы, комплекс Гольджи, небольшие митохондрии и вакуоли с гомогенным содержимым; плазмалемма формировала множественные эндоцитозные/пиноцитозные везикулы. Усиление эндоцитозной (пиноцитозной) активности гепатоцитов, эндотелиоцитов и клеток Купфера (моноцитов) было наиболее манифестным при действии амида БК. После введения БК практически во всех клетках Купфера содержалось большое количество фагосом с осмиофильной зернистостью, эти же мельчайшие частицы диффузно распределялись по цитоплазме клеток и представляли собой фагоцитированные частицы БК.
В то же время при действии обоих тритерпеноидов отмечался некроз и некробиоз отдельных гепатоцитов и эндотелиоцитов, преимущественно в перицентральной зоне, формирование пристеночных скоплений клеточного детрита.
Через 14 сут после введения БК и ее амида ультраструктура гепатоцитов была близка к норме. Хорошо была развита гладкая цитоплазматическая сеть, везикулы которой встречались как на билиарном, так и на синусоидальном полюсах. В гепатоцитах присутствовали небольшие поля гликогена, отмечалась его умеренная секвестрация. В некоторых клетках отмечалось неравномерное расширение профилей гранулярной цитоплазматической сети и межмембранного околоядерного пространства. Во всех гепатоцитах сохранялась выраженная эндоцитозная активность синусоидальной плазмолеммы. Для амида БК характерным было появление в некоторых гепатоцитах крупных митохондрий с просветленным матриксом. Эндотелий синусоидов был представлен в основном активированными формами, но после введения амида БК отмечалось также появление некротизированных эндотелиоцитов. В обоих случаях наблюдалась значительная обтурация просветов синусоидов мононуклерами.
Через 3 сут после введения ЦФ и БК ультраструктура гепатоцитов была сходна с таковой после введения только одного ЦФ. В гепатоцитах присутствовало большое количество гликогена, который был подвержен лизису и секвестрации, субплазмалеммально локализовались липидные включения и вакуоли с осмиофильным содержимым. Профили гранулярной цитоплазматической сети были неравномерно расширены, гладкая цитоплазматическая сильно редуцирована. Изменения тонкой структуры митохондрий касались частичной редукции крист. На билиарном полюсе часто регистрировались вторичные лизосомы и остаточные тельца с мелкой осмиофильной зернистостью. В этот срок эксперимента в просветах синусоидов и перисинусоидально располагалось большое количество клеток Купфера с многочисленными фагосомами с мелкой осмиофильной зернистостью. В отличие от введения только одного ЦФ в данном случае отмечалась выраженная эндоцитозная активность синусоидальной плазмолеммы гепатоцитов.
Через 3 сут после введения ЦФ и амида БК ультраструктура гепатоцитов была близка к норме. Отмечался выраженный полиморфизм митохондрий, которые были представлены часто крупными формами с разрыхленным матриксом. В гепатоцитах часто выявлялись везикулы гладкой цитоплазматической сети, преимущественно на билиарном полюсе. Отмечались гиперплазия и гипертрофия структурных элементов комплекса Гольджи. Желчные капилляры, как правило, были расширенными и содержали осмиофильную субстанцию. Отмечалась высокая эндоцитозная активность гепатоцитов и клеток Купфера.
Через 14 сут после введения ЦФ и БК отмечалась нормализация ультраструктуры одних гепатоцитов и усиление повреждения – других. В первых при этом сохранялись изменения тонкой структуры митохондрий, но появлялись везикулы гладкой цитоплазматической сети. Во вторых отмечались субплазмалеммальные скопления вакуолеобразных остаточных телец и выраженная секвестрация гликогена. Наблюдался некроз отдельных гепатоцитов. В некоторых случаях регистрировалось нарушение плотных контактов между соседними гепатоцитами, формирование апоптотических телец, которые попадали в просветы синусоидов, где резорбировались макрофагами. Через 14 сут после введения ЦФ и амида БК ультраструктура гепатоцитов была близка к норме. Отличительной чертой ультраструктурной организации гепатоцитов при действии амида БК было присутствие большого количества крупных митохондрий с неравномерно расширенными кристами. Биологические эффекты обоих тритерпеноидов проявлялись в усилении эндоцитозной активности как гепатоцитов, так и эндотелиоцитов и клеток Купфера. В обоих случаях сохранялся тромбоз части синусоидов мононуклеарами.
Морфологические изменения миокарда через 3 сут после введения ЦФ заключались в увеличении количества кардиомиоцитов с контрактурными повреждениями. Наблюдались умеренный интерстициальный отек и диффузная инфильтрация стромы мононуклеарами. Через 14 сут в этой группе животных мозаичность повреждений сохранялась, нарастало количество кардиомиоцитов с литическими изменениями цитоплазмы. Усиливалась фенотипическая гетерогенность кардиомиоцитов – встречались как атрофированные, так и гипертрофированные клетки. Последнее обстоятельство способствовало восстановлению массы сердца. Сохранялись гемодинамические расстройства, в некоторых случаях происходило усиление интерстициального и периваскулярного отека. Абсолютная численность кардиомиоцитов через 3 сут после введения ЦФ существенно не изменялась, что свидетельствовало о сохранении клеточной формы регенерации кардиомиоцитов. В то же время следует отметить заметное уменьшение (на 31%) доли одноядерных кардиомиоцитов и увеличение (на 10%) доли двуядерных клеток. В миокарде крыс в этот срок эксперимента появлялись кардиомиоциты, в которых происходило митотическое деление ядер.
Через 14 сут после введения ЦФ нарушения гемодинамики сохранялись. Практически у всех животных кровеносные сосуды и капилляры кроме форменных элементов крови содержали плазму, наблюдались также явления плазморрагии. Количество кардиомиоцитов с литическими и вакуолеобразными изменениями цитоплазмы возрастало. В то же время общее количество кардиомиоцитов через 14 сут после введения ЦФ возрастало на 50%, при этом доля одноядерных клеток также возрастала, но оставалась уменьшенной (на 13%) по сравнению с контролем.
При введении ЦФ и БК в миокарде животных через 3 сут более выраженной была мозаичность повреждений кардиомиоцитов, чем при введении только ЦФ. Возрастало количество клеток с контрактурными повреждениями. Как и при введении ЦФ, отмечались выраженные нарушения гемодинамики. Через 14 сут сохранялась мозаичность повреждений миокарда. Возрастало количество кардиомиоцитов с литическими изменениями цитоплазмы (у некоторых животных их доля составляла 30 – 40%). Количественные изменения популяции кардиомиоцитов через 3 сут после введения ЦФ и последующего введения БК были такими же, как и после введения ЦФ. Через 14 сут эксперимента в миокарде животных в отличие от группы крыс, которым вводили только ЦФ, изменений в количественном соотношении одно - и двуядерных кардиомиоцитов не происходило.
При введении ЦФ и амида БК через 3 сут эксперимента также манифестировали контрактурные и литические повреждения кардиомиоцитов. Одновременно присутствовали кардиомиоциты, в саркоплазме которых наблюдались многочисленные вакуолеобразные расширения. Через 14 сут усиливались проявления некробиоза и атрофии одних кардиомиоцитов и гипертрофия других; сохранялась мозаичность повреждения мышечных сегментов. Нарушения гемодинамики манифестировали, выраженность отека стромы варьировала. Наблюдалась диффузная инфильтрация стромы мононуклеарами, количество которых возрастало также в адвентиции интрамуральных артерий. Выявлено уменьшение общей численности кардиомиоцитов (на 26%) через 3 сут эксперимента при сохранении соотношения одно - и двуядерных клеток. К 14-м суткам эксперимента происходило восстановление общей численности кардиомиоцитов в сердце, но при этом уменьшалась (на 35%) доля одноядерных клеток и возрастала (на 19%) доля двуядерных клеток.
В группе с изолированным введением БК и амида БК через 3 сут наблюдались сходные изменения кардиомиоцитов: сочетание контрактурных и литических повреждений. Через 14 сут в миокарде животных, получавших БК, отмечено увеличение количества атрофированных и некробиотически измененных кардиомиоцитов при одновременном увеличении количества гипертрофированных клеток. Гемодинамические нарушения сопровождались умеренной диффузной инфильтрацией стромы миокарда мононуклеарами; у некоторых животных отмечался мелкоочаговый кардиосклероз. Через 14 сут после введения амида БК происходило усиление литических повреждений отдельных кардиомиоцитов. Отмечалось развитие диффузного и мелкоочагового кардиосклероза. Введение крысам БК и ее аланинового амида не вызывало заметного изменения общей численности кардиомиоцитов в сердце во все сроки эксперимента. Однако через 3 сут после введения амида БК выявлено увеличение на 92% доли одноядерных кардиомиоцитов и уменьшение доли дву - и многоядерных клеток. Через 14 сут после введения БК и ее амида происходило достоверное уменьшение доли одноядерных кардиомиоцитов соответственно на 39 и 28%.
По данным электронно-микроскопического анализа, введение ЦФ вызывало через 3 сут эксперимента умеренно выраженный преимущественно очаговый лизис миофибриллярных пучков, расширение везикул гранулярной и агранулярной саркоплазматической сети и деструкцию митохондрий с образованием миелиноподобных остаточных телец. При действии ЦФ в кардиомиоцитах сохранялось большое количество гликогена, наблюдалась его секвестрация. Ультраструктурные изменения ядер кардиомиоцитов проявляются преимущественно в изменении их формы, значительных инвагинациях ядерной оболочки и транслокации в субсарколеммальную зону. Через 14 сут после однократного введения ЦФ происходило восстановление ультраструктуры большинства кардиомиоцитов.
БК и ее амид при изолированном введении вызывали сходные с ЦФ, но менее выраженные изменения ультраструктуры кардиомиоцитов. К наиболее значимым повреждениям ультраструктуры относились лизис саркоплазматического матрикса, особенно в околоядерной зоне, умеренный лизис миофибриллярных пучков, расширения везикул агранулярной саркоплазматической сети. Литические изменения миофибриллярных пучков были незначительными, в этих участках всегда локализовались полисомы, наблюдалось новообразование миофиламентов. Важно отметить, что при действии БК отмечалось формирование сарколеммой эндоцитозных везикул и кавеол. К особенностям амида БК относится его способность вызывать в некоторых клетках значительные повреждения тонкой структуры митохондрий (диффузный лизис митохондриального матрикса, редукцию крист и нарушение их упаковки), которые манифестировали на протяжении всего эксперимента. Следует отметить, что эти изменения были наиболее выраженными также в первые 3 сут эксперимента, восстановление ультраструктуры кардиомиоцитов при использовании тритерпеноидов происходило быстрее, чем после воздействия ЦФ.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 |
