Сочетанное воздействие всех тестируемых соединений с ПХТ вызывало изменения синусоидального русла и перицеллюлярных пространств (пространств Диссе). В ряде случаев отмечалось склерозирование пространств Диссе с разрастанием пучков коллагеновых волокон вокруг гепатоцитов. Склеротические процессы сопровождались появлением в просветах синусоидов и перисинусоидально звездчатых клеток с липидными включениями в цитоплазме. Повреждение гепатоцитов и активация медиаторами воспаления звездчатых клеток, приводящая к усилению синтеза коллагена, являются основными факторами, вызывающими нарушение архитектоники и уменьшение (или прекращение) транссинусоидального обмена ( и др., 2006; и др., 2008; и др., 2008).

Коллагенизацию пространств Диссе и «капилляризацию» синусоидов после проведения ПХТ и введения тритерпеноидов можно рассматривать в качестве компенсаторно-приспособительного ремоделирования печени в ответ на действие токсических соединений. Снижение транссинусоидального обмена в условиях повышенного содержания в крови цитопатических агентов способствует уменьшению повреждения гепатоцитов, но одновременно замедляет приток пластических веществ и факторов роста, необходимых для внутриклеточной и клеточной регенерации.

ПХТ и ее сочетания с исследуемыми химическими агентами вызывали существенное уменьшение объемной плотности метастазов в просветах синусоидов. Наиболее значительно объемная плотность метастазов уменьшалась после сочетания ПХТ с тритерпеноидами: после сочетания с БК – на 50%, после сочетания с МеБК и Ме β-алаБК – на 43% по сравнению с LLC (p<0,05). Как следствие, введение БК, МеБК и Ме β-алаБК на фоне ПХТ способствовало увеличению объемной плотности синусоидов со свободными просветами как по сравнению с LLC (на 5 – 11%), так и по сравнению только с ПХТ (на 33 – 40%).

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Влияние бетулоновой кислоты и ее производных на морфологию печени мышей с перевитой лимфомой RLS. Лимфома RLS является злокачественной неходжкинской крупноклеточной лимфомой, относительной резистентной к ЦФ. В печени всех животных выявлялись множественные метастазы, расположенные преимущественно перипортально. В центре и по периферии метастатических очагов наблюдались мелко - и крупноочаговые фибриноидные некрозы гепатоцитов, инфильтрированные мононуклеарами. Гепатоциты находились в состоянии дистрофии различной степени выраженности. Под влиянием комплекса цитостатиков в печени развивался гепатоз, сопровождавшийся ростом некротических повреждений гепатоцитов (на 28% по сравнению с контролем) (табл. 15). Объемная плотность синусоидов была снижена незначительно.

Таблица 15. Изменение объемной плотности структурных компонентов печени мышей с перевитой лимфомой RLS в результате курсового введения агентов на фоне и без ПХТ (M±m)

Экспериментальная группа

Дистрофические измененные гепатоциты

Некротически измененные гепатоциты

Синусоиды

RLS

0,58± 0,017

0,29± 0,036

0,11± 0,010

RLS + ПХТ

0,42± 0,040*

0,37± 0,017

0,095± 0,020

RLS + ПХТ + БК

0,49± 0,017

0,31± 0,026

0,11± 0,004

RLS + ПХТ + β-алаБК

0,53± 0,010#

0,19± 0,014#

0,13± 0,011

RLS + БК

0,45± 0,016*

0,31± 0,017

0,14± 0,008

RLS + β-алаБК

0,52± 0,024

0,26± 0,018

0,12± 0,009

Примечание. RLS – лимфома RLS, БК – бетулоновая кислота, АБК – амид бетулоновой кислоты, ПХТ – полихимиотерапия.* - p < 0,05 относительно животных с RLS; # - p < 0,05 относительно ПХТ.

Введение тритерпеновых соединений на фоне ПХТ вызывало снижение, по сравнению только с ПХТ, количества гепатоцитов в состоянии некроза. При этом выраженность дистрофических изменений существенно уменьшалась. Указанные положительные сдвиги проявлялись наиболее ярко у мышей, которым вводили β-алаБК. По данным морфометрического анализа (см. табл. 15), под действием аланинамидного производного БК достоверно снижалась объемная плотность некрозов (на 63%) по сравнению с ПХТ. В группе с введением БК аналогичные сдвиги были незначительными. В обеих группах отмечена тенденция к росту объемной плотности синусоидов (на 28% для β-алаБК, на 10% для БК).

В отсутствии ПХТ β-алаБК не оказывал достоверного влияния на объемную плотность некрозов и дистрофий. По сравнению с ним БК достоверно снижала объемную плотность дистрофий (на 24%), но также не влияла на некробиоз. БК способствовала также увеличению объемной плотности синусоидов.

Представленные данные свидетельствуют о том, что аланинамидное производное БК оказывает заметный гепатопротекторный эффект на мышей со злокачественной лимфомой, который выражается в уменьшении некробиотических повреждений паренхимы. БК на фоне ПХТ не оказывал заметного влияния на печень, хотя в отсутствии цитостатиков и вызывала сдвиги в отдельных показателях.

Результаты, полученные на животных с перевиваемыми опухолями, коррелируют с данными, установленными в модели экспериментальной полихимиотерапии на интактных крысах, которые свидетельствуют о снижении объемной плотности некрозов и дистрофий в печени под действием бетулоновой кислоты и ее аланиламидных производных. Наблюдаемое в условиях полихимиотерапии уменьшение метастатических поражений в синусоидах наряду с сокращением объемной плотности некрозов гепатоцитов, свидетельствует об активации тритерпеноидами апоптоза. Обнаруженная у этих соединений способность усиливать васкулопатию коррелировала с повышенной инфильтрацией синусоидов полинуклеарами. Возможно ремоделирование выстилки синусоидов связано с воздействием на нее продуктов секреции моноцитарных клеток, таких как цитокины, матриксные металлопротеиназы, коллагеназы, катепсин В (Mantovani A. Et al., 2008). Кроме того, нельзя исключить возможность активации под действием тритерпеноидов системы комплимента. Известно, что в результате повышения активности комплимента увеличивается продукция фактора С5а, который стимулирует нейтрофилы. Активированные нейтрофилы, накапливаясь в капиллярах, могут вызывать повреждение эндотелия путем выделения токсичных кислородных метаболитов ( и др., 2007).

Данные литературы свидетельствуют о том, что характер структурных и внутриклеточных изменений в тканях, наблюдаемых под действием лупановых тритерпеноидов, может быть непосредственно связан с их влиянием на продукцию реактивных кислородных соединений. На примере бетулиновой и некоторых производных олеоноловой кислот было показано, что в низких концентрациях тритерпеноиды оказывают цитопротекторное действие, уменьшая оксидативный стресс в клетках, а в высоких – способствуют накоплению реактивных продуктов окисления (Sporn M. B. et al., 2006; Liby K. et al., 2007). Последнее наблюдение непосредственно связано с механизмом их противоопухолевого действия. Известно, что тритерпеноиды запускают процессы гибели в опухолевых клетках внутренним путем апоптоза, связанным с нарушением проницаемости митохондриальной мембраны и последующим выходом апоптоз-стимулирующих факторов, которые, в свою очередь, сдвигают редокс-баланс в клетке в направлении оксидативного стресса.

Влияние бетулоновой кислоты и ее производных на морфологию почек мышей с перевитой LLC. В почках животных с LLC выявлены преимущественно морфологические изменения проксимальных канальцев в виде умеренно выраженных дегенеративно-некротических изменений эпителиоцитов. Изменения клубочков и интерстициальной ткани были минимальными. В отдельных клубочках выявлялись лишь незначительное расширение мезангиального матрикса и отложения фибрина в виде PAS-позитивной субстанции между петлями капилляров. Выявленные поражения почек у животных с перевитой опухолью (отсутствие метастазов, повреждение сосудов клубочков и интерстициальной ткани, минимальные патологические изменения в канальцах), позволяют сделать заключение о паранеопластическом характере нефропатии.

Введение комплекса цитостатиков по схеме CHOP привело к развитию у мышей тубулоинтерстициального нефрита в сочетании с мембранозной нефропатией. Основные патологические изменения выявлены в эпителиоцитах проксимальных канальцев: набухание цитоплазмы и фрагментация щеточной каймы, очаговая дистрофия и некрозы эпителиоцитов отдельных канальцев.

По данным морфометрического анализа, относительный объем эпителиоцитов с выраженными дистрофическими изменениями увеличился на 157%, на 77% уменьшилась доля эпителиоцитов со слабо выраженными дистрофическими процессами (табл. 16). На фоне ПХТ на 366% возрастала объемная плотность очагов некрозов эпителиоцитов. В просвете собирательных трубочек определялись гиалиновые цилиндры, в интерстициальной ткани развивались умеренное полнокровие и периваскулярный отек. Существенного изменения относительного объема интерстициальной ткани и просвета канальцев при проведении ПХТ не выявлено. ПХТ в данном эксперименте осложняла течение нефропатии и сопровождалась увеличением дегенеративно-некротических повреждений нефроцитов.

Введение БК, ее метилового эфира и двух β-аланиламидных производных БК снизило степень альтерации в проксимальных канальцах. Отмечено уменьшение объемной плотности эпителиоцитов в состоянии некроза (на 80 – 98%) и выраженной дистрофии (на 54 – 60%). Кроме того, увеличился объем эпителиоцитов с признаками слабо выраженной дегенерации на 170 – 180% (см. табл. 16). Под действием β-аланиламида БК и его метилового эфира просвет проксимальных канальцев увеличился на 50 – 75% вследствие уменьшения отека эпителиоцитов и щеточной каймы. Наиболее выраженная положительная динамика репаративных процессов наблюдалась на фоне введения β-аланиламида БК.

Таблица 16. Влияние бетулоновой кислоты и ее производных, вводимых на фоне полихимиотерапии, на объемную плотность структур почек мышей с карциномой легких Льюис (M±m)

Экспериментальная группа

Эпителиоциты

Интести-циальная ткань

Просвет канальцев

умеренная дистрофия

выраженная дистрофия

некрозы

LLC

0,54±0,01

0,19±0,02

0,015±0,003

0,14±0,004

0,11±0,01

LLC + ПХТ

0,18±0,015***

0,49±0,023***

0,07±0,011**

0,15±0,004

0,12±0,008

LLC + ПХТ + БК

0,50±0,007###

0,23±0,016###

0,012±0,005##

0,12±0,008

0,13±0,009

LLC + ПХТ + МеБК

0,46±0,016###

0,27±0,014###

0,009±0,004##

0,13±0,007

0,14±0,013

LLC+ПХТ+ β-алаБК

0,46±0,009###

0,19±0,011###

0,0026±0,001##

0,14±0,017

0,21±0,012###

LLC+ПХТ+ Ме-β-алаБК

0,42±0,004###

0,26±0,008###

0,017±0,003##

0,13±0,004

0,18±0,006##

LLC+БК

0,46±0,01**

0,23±0,018

0,007±0,004

0,14±0,005

0,17±0,004**

LLC+МеБК

0,48±0,007**

0,19±0,018

0±0**

0,14±0,009

0,17±0,004**

LLC+ β-алаБК

0,50±0,011**

0,22±0,017

0,0023±0,001*

0,11±0,011*

0,17±0,009*

LLC+ Ме-β-алаБК

0,47±0,006**

0,21±0,011

0,0021±0,001*

0,15±0,011

0,18±0,005**

Примечание. LLC – карцинома легких Льюис, ПХТ – полихимиотерапия, БК – бетулоновая кислота. *** - p < 0,001; ** - p < 0,01 - относительно V группы; ### - p < 0,001; ## - p < 0,01 – относительно VI группы.

В отсутствии ПХТ лупановые тритерпеноиды снижали у мышей выраженность паранеопластической нефропатии. В проксимальных канальцах отмечалось уменьшение в среднем на 56% объемной плотности некрозов эпителицитов (см. табл. 16). Доля эпителиоцитов с мелковезикулярной липидной инфильтрацией и фрагментированной щеточной каймой уменьшилась в среднем на 8 – 13% по сравнению с контролем. Во всех группах после введения тритерпеновых соединений отмечалось уменьшение отека эпителиоцитов проксимальных канальцев и щеточной каймы, в результате чего просвет канальцев увеличился на 54%. Кроме того, β-аланиламид БК несколько уменьшил (на 22%) отек интерстциальной ткани. Следует отметить, что БК и ее производные не оказали заметного влияния на состоянии гломерулярного аппарата, где по-прежнему сохранялись утолщение базальной мембраны клубочков и увеличение объема мезангиального матрикса.

Влияние бетулоновой кислоты и ее производных на морфологию почек мышей с перевитой лимфомой RLS. После инокуляции клеток опухоли, в почках подопытных животных развивались мелкоочаговые метастазы, располагавшиеся в петлях капилляров клубочков, по ходу кровеносных сосудов в корковом веществе, а также в интерстициальной ткани на границе коркового и мозгового вещества. Метастазы четко отграничены от окружающих тканей. В нефроцитах, эпителиоцитах дистальных, проксимальных канальцев, собирательных трубочек наблюдалось развитие дегенеративных и некротических процессов. Просвет канальцев был расширен и заполнен слущенными клетками, детритом щеточной каймы, фибрином. В интерстициальной ткани отмечался выраженный отек, слабо выраженная инфильтрация мононуклеарами, полнокровие сосудов.

Введение цитостатиков приводило к развитию у мышей тяжелого некротического нефроза, сопровождавшегося увеличением некротических повреждений нефроцитов (на 35% по сравнению с контролем) (табл. 17). Клетки канальцевого эпителия отечные, просвет проксимальных канальцев полностью заполнен некротизированной щеточной каймой и клеточным детритом. Отмечалось незначительное (на 28% по сравнению с контролем) уменьшение объема интерстициальной ткани, обусловленное сохранением отечности.

Таблица 17. Объемная плотность структурных элементов паренхимы почек мышей с лимфомой RLS (M±m)

Группа

Дистрофические изменения канальцевого эпителия

Некротические изменения канальцевого эпителия

Просвет канальцев

Интерстициальная ткань

RLS

49,0±1,08

17,0±3,5

14,0±0,7

10,0±1,0

RLS + ПХТ

49, 0±3,2

23,0±6,5

14,0±0,4

7,2±1,5

RLS + ПХТ + БК

56, 0±3,6

17,0±4,8

16,0±1,2

4,9±1,1

RLS + ПХТ + β-алаБК

75,0±1,5*#

4,0±0,4*#

8,0±0,4*

6,8±0,5*#

RLS + БК

58,0±6,6

22,0±4,6

12,0±1,7

6,6±0,3

RLS + β-алаБК

67,0± 4,2*

8,0±1,09*

10,0±0,7*

6,7±0,9

Примечание. БК – бетулоновая кислота, β-алаБК – амид бетулоновой кислоты, ПХТ – полихимиотерапия.* - p < 0,05 относительно контроля; # - p < 0,05 относительно ПХТ.

Под влиянием изучаемых соединений, вводимых на фоне ПХТ, снижалась выраженность структурных повреждений почек за счет уменьшения очагов некроза и отечности интерстициальной ткани. Отмеченные сдвиги наиболее ярко проявлялились при введении амида БК. В этой группе животных достоверно снижалось (на 77%) количество некротизированных нефроцитов и возрастало (на 53%) количество клеток со слабо выраженной дистрофией по сравнению с ПХТ. Введение амида БК вызывало также уменьшение на 43% просвета канальцев.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9