При изучении чувствительности микроорганизмов к действию желчи перепелов установили, что воздействие желчи перепелов, изученных возрастных групп, существенно не отличалась, зоны задержки роста микроорганизмов E. coli составили от 11,9 до 17,6 мм (табл. 11).
Таблица 11
Результаты изучения чувствительности E. coli к желчи перепелов
Культуры микроорганизмов (источник выделения) | Зоны задержки роста, мм (M±m) | ||
Желчь перепелов | |||
10-ти сут. | 20-ти сут. | 30-ти сут. | |
Escherichiacoli О78:К80, № 000(референтный штамм) | 11,9±0,1 | 12,6±0,3 | 12,3±0,5 |
Escherichiacoli О2, № 000 (референтный штамм) | 16,9±0,3 | 17,1±0,5 | 17,6±0,3 |
Escherichiacoli О78, № 11(патматериал перепелов) | 12,4±0,4 | 12,6±0,8 | 12,1±0,6 |
Escherichiacoli О2, № 18 (патматериал перепелов) | 16,5±0,3 | 16,7±0,5 | 16,9±0,2 |
3. 5. Результаты изучения патогенных свойств Escherichia coli,
выделенных из патматериала перепелов
Для оценки патогенных свойств микроорганизмов исследуемые S-формы Escherichiacoliкультивировали на МПА при температуре 37 0С в течение 18-20 ч, смывали 0,85%-ным раствором хлорида натрия и доводили концентрацию бактерий до 1 млрд. бактериальных клеток в 1 мл в соответствии с оптическим стандартом мутности ГИСК им. Тарасевича. Патогенные свойства микроорганизмов оценивали с применением лабораторных моделей: 3-х суточные перепела породы Coturnix coturnix japonica; беспородные лабораторные мыши, массой 14-16 г; 11-суточные эмбрионы кур породы "Белый леггорн". При внутрибрюшинном заражении перепелам (n=12), мышам (n=12) вводили по 0,5 см3 взвеси культур микроорганизмов Escherichiacoli– опыт; аналогичной группе перепелов (n=3)и мышей (n=3) внутрибрюшинно вводили по 0,5 см3 0,85 %-го раствора NaCl– контроль. Было установлено, что изученные культуры микроорганизмов Escherichiacoliбыли патогенными (табл. 12).
Таблица 12
Результаты изучения патогенных свойств Escherichiacoli
Культуры микроорганизмов | Патогенные свойства | ||
(источник выделения) | Число перепелов | Число мышей | Число куриных эмбрионов |
Escherichiacoli О78:К80, № 000 (референтный штамм) | 3 \ 3 | 3 \ 3 | 3 \ 3 |
Escherichiacoli О2, № 000 (референтный штамм) | 3 \ 3 | 3 \ 3 | 3 \ 3 |
Escherichiacoli О78, № 11 (патматериал перепелов) | 3 \ 3 | 3 \ 3 | 3 \ 3 |
Escherichiacoli О2, № 18 (патматериал перепелов) | 3 \ 3 | 3 \ 3 | 3 \ 3 |
Условные обозначения: числитель – число зараженных; знаменатель – число погибших
При заражении 11-суточных эмбрионов кур породы "Белый леггорн" (n=12) в аллантоисную оболочку вводили бактериальную взвесьEscherichiacoliпо 0,2 см3 бактериальных клеток – опыт; аналогичной группе эмбрионов водили по 0,2 см3 0,85 %-го раствора NaCl(n=3) – контроль.
При учете результатов гибель 3 зараженных эмбрионов (табл. 12) наблюдалась через 24 часа после заражения. Как правило, у погибших эмбрионов выявлялись изменения сосудов зародышевых оболочек. На кожных покровах зародыша выявляли наличие цианоза, гиперемию и кровоизлияния, слизистые оболочки глаз, носовых отверстий и клоаки были гиперимированные. При препарировании кожи со стороны подкожной жировой клетчатки были выявлены кровоподтеки, а также наличие кровоизлияний в мышцах туловища и конечностей эмбрионов. При вскрытии грудной и брюшной полости выявлялись кровенаполнение сосудов сердечной мышцы, точечные и пятнистые кровоизлияния в области клапанов сердца на эпи - и эндокарде, наличие точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний в легких, катаральное воспаление слизистой оболочки кишечника, в брюшной полости выявляли серозный экссудат светло-желтого цвета. Печень была перерождена, глинистого цвета, на разрезе имела дряблую консистенцию, желчный пузырь был растянутым и заполнен темно-зеленым содержимым. Почки были увеличенными, дряблой консистенции, выражен венозный застой и явления дистрофии, под капсулой точечные кровоизлияния, на разрезе не выявляется четкая граница между корковым и мозговым слоем. Селезенка была увеличенной, наблюдались признаки застойной гиперемии.
При бактериологическом исследовании из патматериала(сердце, селезенка, печень, участок кишечника) эмбрионов были реизолированы культуры микроорганизмов Escherichiacoli.
Для оценки токсигенных свойств исследуемые S-формы культуры микроорганизмовEscherichiacoliкультивировали в жидкой среде Хоттингера в течение 24 ч при 370С, затем культуры микроорганизмов центрифугировали при 6000 об/мин, в течение 30 мин, полученную надосадочную жидкость вводили лабораторным животным (опыт), аналогичной группе животных вводили стерильный бульон Хоттингера (контроль).
При оценке токсигенных свойств Е.coli с применением лабораторной модели «кожнореактивный фактор» у морских свинок породы «Self»(n=24) массой 200–250 г, за 24 ч до начала опыта на спине тщательно выстригали волосы. Затем в участки депиляции (размеры 1,0 см3) внутрикожно шприцом с тонкой иглой срезом вверх под острым углом вводили испытуемый материал в объеме 0,1 мл, через 24 ч учитывали результаты изменений кожного покрова. Для оценки токсигенных свойств Е.coli с применением лабораторной модели «плантарный тест» надосадочную жидкость вводили белым беспородным мышам (n=7) в область плантарной поверхности лапы в дозе 0,1 мл. В качестве контроля использовали исходную среду, которую вводили параллельно в другую лапу в той же дозе. Учет результатов проводили через 24 ч, величину отека определяли по разности массы лапок мышей в контроле и опыте (табл. 13).
Таблица 13
Результаты оценки токсигенных свойств E.coli
Вид микроорганизмов | Токсигенные свойства | |
Кожнореактивный фактор* | Плантарный тест** | |
E.coli О78, № 11(патматериал перепелов) | 1,5 – 2,0 | 41,66+5,14 |
E.coli О2, № 18(патматериал перепелов) | 1,5 – 2,0 | 39,51+6,17 |
E.coli О78:К80, № 000 (референтный штамм) | 1,5 – 2,0 | 36,42+5,23 |
E.coli О2, № 000(референтный штамм) | 1,5 – 2,0 | 40,00+3,41 |
E.coliО138:К81, № 000 (референтный штамм) | 2,5 – 3,0 | 69,17+5,40 |
S.enteritidis,№ 000(референтный штамм) | 1,0–1,5 | 29,17+3,22 |
S.aureus, № 000(референтный штамм) | 0 | 1,66+1,27 |
Примечание: *наличие покраснения: 0 баллов – нетоксигенные; 1,0–1,5 балла слаботоксигенные; 1,5 – 2,0 балла – умеренно
токсигенные штаммы; 2,5 – 3,0 балла – высокотоксигенные штаммы
**средняя разность лапы: 15,00-34,00 – слаботоксигенные; 35,00-64,00 – умереннотоксигенные; 65 и более –
высокотоксигенные
При внутрикожной инъекции токсина Escherichiacoli в рыхлой волокнистой соединительной ткани подкожной клетчатке выявлялись признаки воспалительного процесса, что сопровождалось миграцией лейкоцитов в область посткапиллярных венул, периваскулярной и интерстициальной инфильтрацией. На первом этапе через 4-6 ч после инъекции, выявляли накопление преимущественно псевдоэозинофилов, на втором этапе через 7-8 ч наблюдалось усиленное накопление моноцитов.
Для оценки способности Е. coli к продукции токсинов апробировали тест-систему «VET-RPLA», основанную на методе обратной пассивной латексной агглютинации. Принцип действия заключается в том, что антитела реагируют с растворенным антигеном, при наличии токсина, латексные частицы соединяются, образуя комплекс специфического антигена с антителами (реакция агглютинации). При учете результатов сравнивали интенсивность агглютинации каждого образца по отношению к контролю. При наличии четко видимых агрегатов латексных частиц реакции агглютинации считали «положительными», что свидетельствовало о наличии токсина. При оценке токсигенных свойств Escherichiacoliбыли выявлены видимые агрегаты латексных частиц, что свидетельствовало о наличии токсина (табл. 14).
При оценке тест-системы в опытах с использованием смеси культур E.coli + S. enteritidis, E.coli +S.aureusвыявлялись видимые агрегаты латексных частиц в реакции агглютинации, что свидетельствовало о специфичности тест-системы. При отсутствии агрегатов латексных частиц реакции агглютинации считали «отрицательными», что было установлено в опытах с культурами микроорганизмов S. enteritidis, S.aureus. При оценке токсигенных свойств культур микроорганизмовEscherichiacoli, выделенных из патматериала перепелов, с применением тест-системы «VET-RPLA», основанной на методе обратной латекс-агглютинации, установлена корреляция результатов исследования с результатами, основанными на применении лабораторных моделей (r=0,89).
Таблица 14
Результаты оценкитоксигенных свойств E.coli
с применением тест-системы «VET-RPLA»
Вид микроорганизмов № штамма | Токсигенные свойства |
Тест-система «VET-RPLA» | |
E.coli О78, № 11(патматериал перепелов) | «++» |
E.coli О2, № 18(патматериал перепелов) | «++» |
E.coli О78:К80, № 000 (референтный штамм) | «++» |
E.coli О2, № 000(референтный штамм) | «++» |
E.coliО138:К81, № 000 (референтный штамм) | «+++» |
S. enteritidis,№ 000(референтный штамм) | «-» |
S. aureus, № 000(референтный штамм) | «-» |
Примечание: реакция агглютинации: «-», «+» – отсутствие токсина; «+», «++», «+++» – наличие токсина
ВЫВОДЫ
1. При экспериментальном воспроизведении эшерихиоза на перепелах установлено, что динамика патологических процессов при остром течении болезни обусловлена септицемией, при подостром течении – энтеротоксемией.
2. При гистологическом исследовании выявлялась множественная бактериальная эмболия кровеносных сосудов серозных оболочек, в паренхиматозных органах выявлялись многочисленные некротические очажки, инфильтрированные лейкоцитами. Признаки воспалительного процесса, сопровождающегося миграцией и интерстициальной инфильтрацией псевдоэозинофилов, развиваются через 4-6 ч, моноцитов– через 7-8 ч после заражения микроорганизмами E. coli.
3. Установлена эффективность применения хромогенных сред «ChromogenicE. coli/Coliformmediumagar» и «LMX Manafi&Osmer», позволяющих при подтверждении «теста на индол», дифференцировать микроорганизмы E. coliот таксономически сходных видов энтеробактерий в течение 24 ч.
4. Установлено, что количество энтеробактерий (КОЕ lg/г)слепых отростков кишечника перепелов составляла 4,19±0,15– 6,88±0,21 (опыт), 3,21±0,13–5,76±0,19(контроль); при экспериментальном эшерихиозе индекс колонизации (ИК) эшерихий у 10-ти суточных перепелов– 0,766; 20-ти суточных – 0,797; 30-ти суточных – 0,837.
5. При изучении чувствительности микроорганизмов к действию желчи перепелов установлено, что зоны задержки роста микроорганизмов E. coliсоставили 11,9-17,6 мм.
6. Культуры микроорганизмов E. coli,выделенные из патматериала перепелов, были чувствительными к антибиотикам группы аминогликозидов (амикацин, канамицин, неомицин, тобрамицин), фторхинолонов (байтрил, пефлоксацин, офлоксацин, ципрофлоксацин, энрофлон), цефалоспоринов (цефазолин, цефатоксим); умеренно чувствительными к группе макролидов (эритромицин, олеандомицин); устойчивыми к β-лактамным антибиотикам группы природных пенициллинов (ампицилин, бензилпенициллин, карбенциллин, оксациллин).
7. При оценке токсигенных свойств культур микроорганизмов Escherichiacoli, выделенных из патматериала перепелов, с применением тест-системы «VET-RPLA», основанной на методе обратной латекс-агглютинации, установлена корреляция результатов исследования с результатами, основанными на применении лабораторных моделей (r=0,89).
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
· Для использования в лабораториях и научно-исследовательских учреждениях разработан «Способ определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в пищевых продуктах" (Патент на изобретение № 2 от 01.01.01), основанный на определении количественного состава микроорганизмов, выделенных из пищевых продуктов, в том числе продукции птицеводства.
· При проведении бактериологической диагностики эшерихиоза птицрекомендуется использовать хромогенные среды «ChromogenicE. coli/Coliformmediumagar» и «LMX Manafi&Osmer», позволяющие при первичной идентификации дифференцировать микроорганизмы E. coliот таксономически сходных видов энтеробактерий в течение 24 ч.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
1. Мансурова механизма действия токсина энтеробактерий// , // Ветеринария. -2008. - №8.-С.60-64.
2. Мансурова показатели и водно-электролитный баланс при эшерихиозе //Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы VII международной научной конференции студентов и молодых ученых.- М.: МГУПБ, 2008.- С.262-263.
3. Мансурова -функциональная характеристика органов пищеварения птиц при экспериментальном моделировании инфекционного процесса // Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания: Материалы международной научной конференции студентов и молодых ученых. – М.: МГУПБ, 2009.- С.288-289.
4. Мансурова исследование взаимодействия микроорганизмов с клетками крови животных и птиц //Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы VIII международной научной конференции студентов и молодых ученых. – М.: МГУПБ, 2010.- С.246-248.
5. Мансурова изменений гематологических показателей при желудочно-кишечных болезней животных / , // Аграрная наука. – 2011.- №6.- С. 30-32.
6. Ленченко исследования при заражении птиц токсигенными эшерихиями / , // Аграрная наука. – 2012.- №4.- С.29-30.
Подписано в печать 20.05.2013. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ
МГУПП, Москва, .
. Москва, .
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
