Модуляция активности транскрипционных регуляторов p53 и NF-kB в условиях микоплазменной инфекции как фактор, способствующий трансформации эукариотических клеток и опухолевой прогрессии (стр. 8 )

Рисунок 16. Определение IgG антител, специфичных к M. hominis в сыворотке крови пациентов с подозрением на рак простаты.

Образцы сыворотки крови от 118 пациентов с различными диагнозами были исследованы методом ИФА. Было обнаружено 10 позитивных пациентов с диагнозами ДГП/ПИН НС, 13 с диагнозом ПИН ВС и 13 с диагнозом рак простаты.

В большинстве случаев данные ИФА совпадали с результатами ПЦР в реальном времени. Для 75% пациентов проанализированных обоими методами были получены одинаковые результаты (положительные или отрицательные в отношении M. hominis). В 25% случаев результаты двух методов разнились, что, по-видимому, объясняется различиями биологических материалов, используемых для анализов, и разной чувствительностью методов.

Таким образом, полученные с использованием метода ИФА результаты подтверждают наличие микоплазменной инфекции у пациентов с опухолями простаты.

Работа выполнена совместно с сотрудниками кафедры урологии ММА им. д. м.н. д. м.н. , к. м.н. , и сотрудником лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИИЭМ им. » Минздравсоцразвития России к. б.н.
ВЫВОДЫ

1. Впервые была показана способность микоплазм ингибировать активность транскрипционного фактора р53.

2. Проведено полногеномное исследование изменения экспрессии генов в клетках HCT-116 инфицированных микоплазмой. Показано, что в этих клетках снижена экспрессия таких известных р53-респонсивных генов как BTG-2, p21 Cip1, TP53I3, MDM2, ATF3, Fas.

3. Впервые показана способность M.arginini активировать транскрипционный фактор NF-kB в результате взаимодействии со следующими сочетаниями Толл-подобных рецепторов 2/6, 2/CD14, 1/2.

4. Установлено, что TLR2-зависимая активация NF-kB микоплазмами и их структурными компонентами способствует подавлению апоптоза и увеличению выживаемости опухолевых клеток (на 25-30%) при действии на них химиотерапевтических препаратов.

5. Впервые показано, что TLR-зависимая активация NF-kB в инфицированных микоплазмой клетках является одной из причин снижения транскрипционной активности р53.

6. На модели мышиной миеломоноцитарной лейкемии WEHI-3B в эксперименте in vivo впервые была показана способность M.arginini и ее структурных компонентов (диациллипопептидов) повышать пролиферацию и устойчивость к действию химиотерапевтических препаратов опухолевых клеток, экспрессирующих Толл-подобный рецептор 2.

7. В результате полногеномного исследования изменения экспрессии генов определен возможный механизм опухолестимулирующего действия микоплазменных диациллипопептидов. Показано, что введение синтетического диациллипопептида микоплазм вызывает индукцию более 3000 генов, среди которых обнаружены гены MCP-1, MCP-3, Gro1, RANTES, IL-1, IL-6, ФНОа, S100A9, SAA1, SAA3, продукты которых обладают опухолестимулирующей активностью.

8. Проведено эпидемиологическое исследование, которое выявило взаимосвязь микоплазменной инфекции (M.hominis) с раком простаты. Показано, что M. hominis была детектирована в 3 раза чаще у пациентов с раком простаты по сравнению с пациентами, имеющими доброкачественные изменения в простате.

9. Впервые было изучено влияние микоплазменной инфекции на изменение метаболического профиля. Было показано, что в инфицированных микоплазмой клетках более чем в 2,5 раза снижается внутриклеточное содержание пролина.

Список опубликованных работ

1. Logunov DY, Ilyinskaya GV, Cherenova LV, Verhovskaya LV, Shmarov MM, Chumakov PM, Kopnin BP, Naroditsky BS. Restoration of p53 tumor-suppressor activity in human tumor cells in vitro and in their xenografts in vivo by recombinant avian adenovirus CELO-p53.//Gene Ther. – 20С.79-84

2. Д.Ю. Логунов, Л.В. Черенова, М.М. Шмаров, Е.В. Шашкова, Л.В. Верховская, К.К. Доронин, Б.С. Народицкий In vitro и in vivo доставка гена секретируемой плацентарной щелочной фосфатазы (SEAP) в составе рекомбинантного аденовируса птиц CELO. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.- 2002.- №3.- С.34-9

3. , , Народицкий транскрипционной активности опухолевого супрессора р53 в различных опухолевых клетках человека посредством рекомбинантных аденовирусов Ад-р53 и CELO-p53. // "Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы", 2004.-Т.8,- №2,-С.34

4. , , Воробьев Вакцины. //Вестник РАМН. – 2005. - №1- С.14-19

5. , , Гинцбург системы скрининга для определения специфичности и функциональной активности иммуномодуляторов. // Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней». – Москва.- 2006. – С.58

6. , , Гинцбург Толл-подобных рецепторов в повышении резистентности клеток млекопитающих, хронически инфицированных микоплазмой, к различным проапоптотическим стимулам. // Тезисы IX конгресса Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Москва - 2007. – С.114-115

7. , , . Молекулярно-генетические технологии защиты от патогенов. // Ремедиум. – 2007. - №3- С. 20-24.

8. DY. Logunov, OV. Zubkova, AS. Karyagina-Zhulina, MM Shmarov, EA. Shuvalova, AP. Karpov. Identification of HI-like loop in CELO adenovirus fiber for incorporation of receptor-binding motifs. // J. Virol. – 20С. 9641-52.

9. Logunov D., Scheblyakov D., Zubkova O., Shmarov M., Rakovskaya I., Gurova K., Tararova N., Burdelya L., Naroditsky B., Ginzburg A., Gudkov A. Mycoplasma infection suppresses p53, activates NF-κB and cooperates with oncogenic Ras in rodent fibroblast transformation. // Oncogene. – 20С.4521-31

10. , , Коноплянникова О, А, , , Гинцбург грам-положительных микроорганизмов и их продуктов на выживаемость гемопоэтических клоногенных клеток in vivo. // Бюллетень экспериментальной биологии и медициныТ.145. - №4. - С.441-446

11. , , В, Народицкий А. Л., В Микоплазменная инфекция (M. arginini) ведет к конститутивной активации NF-kB и подавлению апоптоза в клетках, экспрессирующих Толл-подобные рецепторы TLR2/6. //Молекулярная генетика, микробиология и вирусология.- 2008. - №4

12. , , и соавторы Липид-ассоциированные мембранные белки M. arginini активируют NF-kB, взаимодействуя с TLR2/1, TLR2/6 и TLR2/CD14. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусологияг. - №2. - С

13. ,,и соавторы. Стволовые клетки кишечного эпителия. Механизмы выживаемости и роль микробиоты. //Биомедицинская химия4) – С. 460-3.

14. , , Микоплазменная инфекция предстательной железы человека и ее возможная роль в патогенезе рака простаты. // Андрология и генетальная хирургия. – 2009. - №4.- С.18-22

15. , , . Оценка протективного действия рекомбинантной конструкции белка теплового шока с липополисахаридом против инфекции Salmonella typhimurium у мышей. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии№3.- С.38-41

16. , , . Новое о микоплазменной инфекции простаты и раке предстательной железы. // Тезисы Российской научной конференции с международным участием «Фундаментальные исследования в уронефрологии. - Москва - 2009. – С.23.

17. , , . Поиск эффективных молекулярных адъювантов с использованием эукариотической тест-системы, созданном на основе клеток, экпрессирующих различные наборы Толл-подобных рецепторов. // Тезисы докладов IV Российского симпозиума «Белки и пептиды». - Казань - 2009. – С. 353

18. , , . Toll-подобные рецепторы и их адапторные молекулы. // Биохимия – 2010. - Т.75 - С. 1224 – 1243

19. , , . Возможно ли влияние микоплазменной инфекции на патогенез рака предстательной железы. // Онкоурология. – 2010. – С. 128-32,

20. , , , . // Идентификация микоплазм у больных с подозрением на рак простаты. Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии. 2010. - №4. – С.81-85

21. , , . // Тoлл-подобные рецепторы (TLR) и их значение в опухолевой прогрессии. Acta naturae. - Т. 2 - № 3 С. 14-23

22. Tutykhina IL, Logunov DY, Shcherbinin DN, Shmarov MM, Tukhvatulin AI, Naroditsky BS, Gintsburg AL. // Development of adenoviral vector-based mucosal vaccine against influenza. J Mol Med. - 2010.