Микроэкологические нарушения у матери и ребенка: диагностика, прогностическое значение (стр. 5 )

Характеристика кишечных лактобактерий, выделенных у здоровых детей грудного возраста.

Определение видового состава индигенных бактерий их антагонистической активности, антибиотикорезистентности в настоящее время является неотъемлемой частью исследований состава кишечной микрофлоры у людей разного возраста, проживающих в разных регионах мира. Результаты видовой идентификации кишечных штаммов лактобацилл, выделенных у детей грудного возраста г. Казани, показали, что доминирующими видами в данной возрастной группе являются L.fermentum и L.rhamnosus, которые обнаружены соответственно у 60% и 50% обследованных детей. Как известно, эти виды лактобацилл часто обнаруживаются в составе микрофлоры грудного молока. L.casei (25%), L. paracasei (15%) встречались только у детей, получавших прикормы. Ни у одного ребенка не обнаружены микробы видов L. acidophilus, L.plantarum и L.zeae. У детей, получавших искусственное вскармливание, выделялись преимущественно нетипированные в нашем исследовании виды лактобактерий. Для детей, получавших грудное вскармливание, а также прикормы на этом фоне, было характерно наличие ассоциаций 2-3 видов лактобактерий со стабильным присутствием L.fermentum и L.rhamnosus. Производственный штамм L.fermentum 90-4С (ГИСК) по данным ПЦР c видоспецифическими праймерами, проведенной в НИИЭМ им. (Москва), был отнесен к виду L.plantarum.

Выявлена различная степень антагонистической активности (АА) клинических изолятов лактобацилл по отношению к S.aureus и гемолизирующей E.сoli. 8 из 18 изученных клинических изолятов лактобактерий плохо подавляли рост S. aureus. 5 изолятов лактобактерий не подавляли рост, а 3 штамма имели низкую АА по отношению к гемолизирующей E.сoli. У всех клинических изолятов лактобактерий отсутствовала АА по отношению к штаммам Kl. рneumoniae, Kl.оxytoca, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Citrobacter freundii (рост культур сплошным газоном). Выявлено, что у детей, колонизированных лактобактериями с высокой АА к S.aureus, данный микроорганизм в составе фекальной микрофлоры обнаруживался реже, чем при колонизации лактобактериями с низкой АА (р≤0,02, F-критерий). В большинстве случаев дети были колонизированы теми видами Гр - энтеробактерий (Kl. pneumoniae, Kl.оxytoca, Proteus mirabilis), к которым лактобактерии не проявляли АА в эксперименте in vitro. Колонизация Гр - энтеробактериями у всех детей выявлялась на фоне нормального количественного содержания лактобактерий. Данный факт свидетельствует об относительности количественного критерия (определения популяционного уровня индигенных микроорганизмов) и необходимости исследования АА представителей облигатной микрофлоры для оценки колонизационной резистентности ЖКТ.

Среди изученных выявлены штаммы лактобактерий с потенциально пробиотическим эффектом: 5 штаммов лактобактерий, обладающие высокой АА по отношению к S. aureus и 4 штамма высокой АА по отношению гемолизирующей E.сoli. Наибольший интерес с этой точки зрения представляет штамм L. fermentum № 30/4, обладающий высокой АА в отношении обоих микроорганизмов.

Установлена высокая частота резистентности кишечных лактобактерий к наиболее часто используемым антибиотикам и химиопрепаратам. Все лактобактерии были полирезистентны и имели от 8 до 15 маркеров резистентности. Все штаммы кишечных лактобактерий были резистентны к фуразолидону, ципрофлоксацину, котримоксазолу, цефтриаксону, нитроксолину, метронидазолу. 75% штаммов проявляли резистентность к амикацину и ампициллину, 65% штаммов – к амоксиклаву и цефотаксиму. 70% штаммов были чувствительны к пенициллину и линезолиду, 60- 65% - к эритромицину и линкомицину. Таким образом, выявлен ряд региональных особенностей видового состава, антагонистической активности и антибиотикорезистентности кишечных лактобактерий у детей грудного возраста. Полученные данные следует учитывать при назначении детям антибактериальных препаратов по поводу интеркуррентных инфекций и выборе пробиотиков для коррекции состава кишечного микробиоценоза.

Особенности формирования кишечной микрофлоры и клинических проявлений дисбактериоза кишечника у детей, рожденных естественным путем и путем кесарева сечения

Мы оценили особенности кишечного микробиоценоза и клиническое значение дисбактериоза кишечника у детей рожденных естественным путем (ЕР) и путем кесарева сечения (КС) в процессе длительного наблюдения (3 года). Исследования показали, что процесс формирования кишечного биоценоза имеет существенные различия в этих группах больных. Дети, рожденные путем КС, в течение всего периода раннего детства, достоверно чаще имели различные варианты нарушения КМФ, чем дети, рожденные естественным путем. Эубиоз достоверно чаще имели дети из группы ЕР в возрасте от 6 месяцев до 3 лет (р=0,02-0,001; F-критерий) Так, нормальный состав кишечной микрофлоры выявлен в группе ЕР в возрасте 1-2 месяцa – в 4,9%, в 6-12 месяцев – в 15%, в 1-2 года – в 33,3% и в 2-3 года – в 66,6% случаев. У детей, рожденных путем КС, эубиоз выявлен в возрасте 1-2 месяцa – в 1,1%, в 6-12 месяцев – в 3,4%, в 1-2 года – в 9%, и в 2-3 года – в 25,8% случаев. До 2 лет жизни у них достоверно чаще, чем у детей из группы ЕР обнаруживался дефицит бифидобактерий (р=0,02-0,03; F-критерий), и (или) лактобактерий (р=0,003-0,04; F-критерий). E. Coli в количестве 7-8 lg КОЕ/г обнаруживались в обеих группах приблизительно с равной частотой. Энтерококки в количестве 5-7 lg КОЕ/г достоверно чаще обнаруживались у детей из группы ЕР в возрасте до 1 года (р=0,003).

В обеих группах детей, выявлена высокая частота колонизации кишечника УПМ (таблица 4). В возрасте старше 1 года УПМ у детей из группы КС обнаруживались чаще, чем у детей, рожденных естественным путем (р=0,01: F-критерий). Для детей, рожденных КС, было характерно более выраженное видовое разнообразие факультативной флоры и только у них в грудном возрасте обнаружены Serratia spp., Morganella morganii, P. aeruginosa. Дети из группы КС чаще были колонизированы ассоциациями УПМ в возрасте до 1 года. Персистенция УПМ выявлена у всех детей, рожденных КС и только в 54,7% случаев естественных родов (р<0,001, F-критерий), причем в 32% случаев у детей первой группы персистировали ассоциации микроорганизмов. Известно, что процесс персистенции УПМ лежит в основе развития затяжных и хронических воспалительных процессов, а также сенсибилизации организма ребенка ( и соавт., 2007; , , 2005, 2009). Выявленные особенности состава КМФ у детей, рожденных путем КС, мы связываем с тем, что, они не получают в родах индигенной флоры матери, поздно прикладываются к груди, длительно находятся в роддоме и вскармливаются на фоне антибактериальной терапии матери в послеоперационном периоде.

Особенности микробной колонизации детей, рожденных кесаревым сечением, несомненно, имеют клиническое значение. По данным литературы в этой популяции детей отмечается более высокая частота развития атопических заболеваний, кишечных инфекций, что связывается с нарушением процессов формирования КМФ и иммунной системы (Bager P., 2008; Decker E. et al., 2010). Мы проанализировали клиническую симптоматику дисбактериоза кишечника у 77 детей, рожденных путем КС, и 72 детей, рожденных естественным путем, и выявили, что у детей первой группы ДБК протекает с более выраженной клинической симптоматикой и имеет тенденцию к затяжному течению. Компенсированные формы ДБК были более характерны для детей из группы ЕР (20,8% и 9,1% соответственно, р≤0,02; F-критерий), а декомпенсированный ДБК достоверно чаще развивался у детей, рожденных путем КС (16,9% и 4,2%, р≤0,01; F-критерий).

Таблица 4

Частота колонизации детей условно-патогенными микроорганизмами при различном способе родоразрешения

Микроорганизмы	Число детей абс. (%)
1-2 мес	6-12 мес.	1-2 г.	2-3 г.
КС(n=91)	EР(n=82)	КС(n=87)	EР(n=60)	КС(n=69)	EР(n=50)	КС(n=31)	EР( n=33)
Частота колонизации УПМ	84 ( 92,3%)	75 (91,5%)	64 (73,6%)	40 (66,7%)	46 (66,7%)	22 (44%) Р*=0,01	17 (54,8%)	8 (24,2 %)
Частота выделения ассоциаций УПМ	66 (72,5%%)	41(50%) Р*<0,01	44 (50,6%)	13 (21,7%) Р*=0,005	22 (31,8%)	9 (18%) Р*=0,04	3 (9,6%)	0
S.aureus	43 47,3±5,2%	46 56,1±5,5%	45 52,1±5,4%	27 45±6,4%	25 36,2 ± 2,0%	10 20±5,7 % Р*=0,02	6 19,4±7,1%	4 12,1±5,7%
E.coli Hly +	23 25,3±5,1%)	15 18,3±4,3%	24 27,6±4,8%)	10 16,7±4,8%	16 23,2 ± 5,1%	6 12±4,6% Р*=0,03	7 22,6±7,5%	3 9,1±5,0%
Klebsiella spp > 3 lg КОЕ/г	37 40 ,6±5,1%	27 32,9±5,2%	35 40,3±5,3%	13 (21,7±5,3%) Р*=0,01	16 23,2 ± 5,1%	9 18,0±5,4%	6 19,4±7,1%	4 12,1±5,7%
Proteus spp.> 3 lg КОЕ/г	21 23,1±4,4%	17 20,7±4,5%	19 21,8±4,4%	10 16,7±4,8%	7 10,1± 4,6%	3 6,0±3,4%	3 9,7±5,3%	3 9,1±5,0%
Enterobacter spp.> 4 lg КОЕ/г	6 6,6±2,6%	3 3,6±2,1%	6 6,9±2,7%	3 5,0±2,8%	4 8,0±3,8%	3 6,0±3,4%	3 9,7±5,3 %	0
Citrobacter freundi> 4 lg КОЕ/г	3 3,3±1,8%	0	12 13,8±3,7%	7 10,4±3,9%	6 8,7 ± 2,2%	3 6±3,4%	1 3,2±3,1%	0
Clostridium spp.> 3 lg КОЕ/г	8 9,7±3,1%	2 (2,4±1,7%) Р*=0,03	7 8,0±2,9%	0	8 11,6± 2,2%	2 4 ± 2,7%	6 19,4±7,1%	2 6,1±4,2%
Candida spp.> 3 lg КОЕ/г	16 17,6±4,0%	8 9,8±3,3%	10 11,5±3,4%	2 (3,3±2,3%) Р*=0,03	12 17,4± 1,3%	5 10 ± 3,6%	6 19,4±7,1%	2 (6,1±4,2%) Р*=0,04
Serratia spp.> 3 lg КОЕ/г	3 (3,3±1,8%)	0	2 (2,3±1,6%)	0	1 (1,4 ± 1,2%)	0	0	0
S. epidermidis > 4 lg КОЕ/г	10 11,5±3,3%	5 6,1±2,6%	4 4,6±2,2%	2 3,3±2,3%	2 2,9 ± 1,7%	1 2±1,9%	1 3,2±3,1%	0
Morganella morganii> 3 lg КОЕ/г	1 (1,1±1,1%)	0	1 (1,1±1,1%)	0	0	0	0	0
P. aeruginosa	2 (2,2±1,5%)	0	0	0	0	0	0	0

* достоверность различий с аналогичными показателями у детей из группы КС того же возраста по F-критерию