Подтверждающая диагностика проводилась путем ультразвукового исследования надпочечников и определения в крови уровня электролитов (калий, натрий), кортизола, 17-ОНР.

С целью диагностики галактоземии определяли уровень общей галактозы (Гал) (галактоза + галактоза-1-фосфаты) флюоресцентным методом. Пороговым значением для выявления галактоземии считали уровень Гал >7,1 мг/дл.

В качестве материала для молекулярно-генетических исследований использовали образцы ДНК, выделенные из лейкоцитов цельной крови или пятен высушенной крови на фильтрах, с последующей амплификацией, анализом расщепления фрагментов ДНК ферментами рестрикции, детекцией на электрофорезе фрагментов ДНК в полиакриламидных гелях.

Для определения мутаций использовали наборы, разработанные в ГУ МГНЦ РАМН:

«PCU-8» - для определения 8 частых мутаций в гене ФАГ (I65T, IVS10nt546, IVS12nt1, R261Q, R252W, R408W, R158Q, P281L);

«CF-9» и «CF-5» - для диагностики 9 и 5 мутаций соответственно в гене CFTR (del21kb, delF508, delI507, 1677delTA, 2143delT, 2184insA, 394delTT, 3821delT, G542X; W1282X, N1303K, L138ins, R334W, 3849+10kbc->T).

Полученные результаты документировали с помощью программного обеспечения «Gel Imager» (Россия).

Генетико-эпидемиологические исследования проводились с использованием данных неонатального скрининга за период 1987-2007 гг. В ходе работы созданы компьютерные базы данных семей: с ФКУ (230 случаев ФКУ из 205 семей), с ВГ (170 случаев ВГ из 168 семей), с АГС (15 семей), МВ (10 семей), ГАЛ (6 семей). Полученные данные сравнивали с официальными демографическими данными по Краснодарскому краю (Основные итоги Всероссийской переписи населения 2002г. по Краснодарскому краю, 2003г.).

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Были проанализированы амбулаторные медико-генетические карты, разработанные нами анкеты на семьи с больными НБО.

Частоту гетерозиготных носителей фенилкетонурии в популяции рассчитывали на основании закона Харди-Вайнберга по формуле:

p2+2pq+q2=1,

где q - частота нормального гена,

p - частота мутантного аллеля.

Изучение интеллектуального уровня детей с ФКУ дошкольного возраста проводилось рисуночным тестом Гудиноф-Харриса, школьного возраста - с помощью компьютерной программы “Тест”, которая является адаптированным вариантом теста Д. Векслера. Определяли коэффициент интеллекта ОИП (общий интеллектуальный потенциал). За минимальное значение нормы принимали коэффициент ОИП =70. При подозрении на снижение интеллекта (ОИП=70 и ниже) ребенок консультировался детским психиатром.

Для диагностики психического развития детей с ФКУ применялись методы наблюдения и стандартные патопсихологические методики, адаптированные для каждого возрастного интервала.

Для оценки физического развития детей определяли массо-ростовой индекс (МРИ) по формуле:

МРИ =

М х 100

P

где М - отношение фактической массы тела к величине 50-го перцентиля этого показателя для данного возраста,

P - отношение фактической длины тела к величине 50-го перцентиля этого показателя для данного возраста.

За норму принимали МРИ от 90 до 99. При МРИ=89 и ниже диагностировали дефицит массы тела, при МРИ=100 и более - избыточную массу тела.

Результаты исследования обработаны методами вариационной статистики (, 1990; , 1996) с определением критерия Стьюдента, средней арифметической (М), стандартной ошибки (±m) и показателя достоверности различий (р).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Организация неонатального скрининга на наследственные болезни обмена в Краснодарском крае

Началом неонатального скрининга на НБО принято считать 1962г., когда в штате Массачусетс США было организовано тестирование новорожденных на фенилкетонурию. Скрининг широко распространился в мире. В рамках многих программ было начато тестирование и на другие наследственные дефекты. В настоящее время программы неонатального скрининга охватывают от 8 до 50 наследственных нарушений обмена.

В России массовое обследование новорожденных на ФКУ начало проводиться с 1985г., на врожденный гипотиреоз с 1993г. С 2006г. внедрен скрининг на муковисцидоз, адреногенитальный синдром и галактоземию.

В Краснодарском крае массовое обследование новорожденных на НБО (ФКУ) проводится с 1987г. С 1994г. новорожденные обследовались на два заболевания (ФКУ, врожденный гипотиреоз), с 2006г. – на 5 (ФКУ, ВГ, муковисцидоз, адреногенитальный синдром, галактоземию). Уровень охвата скринингом новорожденных края с 1997г. стабильно превышает 99,0% (таблица 1).

Таблица 1

Результаты скрининга новорожденных на наследственные болезни обмена в Краснодарском крае за период с 1987-2007гг.

Наследственное заболевание обмена веществ

Обследовано новорожден-ных

Выявлено больных

Частота заболевания в КК

Частота заболевания в РФ (, 2008)

фенилкетонурия

1 061 108 (92,4%)

111

1 : 8 376

1 : 7 697

врожденный гипотиреоз

680 786 (97,0%)

161

1 : 4 228

1 : 4 132

муковисцидоз

114 253 (99,7%)

10

1 : 11 425

1 : 11 585

адреногенитальный синдром

114 253 (99,7%)

15

1 : 7 617

1 : 8 662

галактоземия

116 041 (99,2%)

6

1 : 19 340

1 : 32 692

В организации неонатального скрининга в крае можно выделить несколько основных этапов, связанных с развитием медико-генетической службы:

1980 г.

Проведение селективного скрининга на фенилкетонурию среди контингентов повышенного риска с момента организации медико-генетической службы на Кубани.

1983 г.

Организация пилотного скрининга новорожденных на ФКУ в шести административных территориях края.

1987 г.

Организация неонатального скрининга на ФКУ на всей территории края.

1994 г.

Внедрение неонатального скрининга на врожденный гипотиреоз на базе существовавшего скрининга на ФКУ.

1997 г.

Разработка и внедрение компьютерной программы «Неонатальный скрининг».

2003 г.

Внедрение молекулярно-генетических методов диагностики фенилкетонурии.

2006 г.

Организация скрининга новорожденных на муковисцидоз, адреногенитальный синдром, галактоземию. Внедрение молекулярно-генетических методов диагностики муковисцидоза. Разработка и внедрение программного комплекса «Неоскрин».

По мере развития медико-генетической службы, внедрения новых технологий, более точных методов диагностики и лечения наследственной патологии, совершенствовались организация и алгоритмы проведения скрининга.

Расширение программы скрининга до пяти наследственных болезней обмена, необходимость диагностики адреногенитального синдрома и галактоземии до 10-12-го дней жизни детей обусловили разработку нового алгоритма (рис.1), в результате перехода на который мы добились стабильного забора крови на тест-бланки во всех родильных домах на 4-й день жизни, поступления бланков с кровью в МГК в среднем на 7-й день жизни, сообщения результатов первичного обследования новорожденных в ЛПУ края по электронной почте в среднем на 9-й день жизни.

День жизни
 

Внесение информации о новорожденном в компьютерную программу «Регистрация новорожденных в родильном доме», формирование файла «Список новорожденных»
 

1-й

Забор образцов крови на тест-бланки
 
 

4-й

Доставка тест-бланков в лабораторию неонатального скрининга вместе с файлом «Список новорожденных»
 
 

4-6-й

Проведение лабораторных исследований
 
 

5-7-й

 

Вызов детей с высокими результатами по электронной почте
 
 

8-9-й

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9