Морфология тимуса и плаценты у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела (стр. 1 )

На правах рукописи

Морфология тимуса и плаценты у плодов

и новорожденных с экстремально низкой массой тела

– анатомия человека

– патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой

степени доктора медицинских наук

Ярославль 2010

Работа выполнена в Федеральном Государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации»

Научные консультанты:
доктор медицинских наук, профессор	Шилкин Валентин Викторович
доктор медицинских наук, профессор	Перетятко Любовь Петровна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор	Алексина Людмила Арсентьевна
доктор медицинских наук, профессор	Карелина Наталья Рафаиловна
доктор медицинских наук, профессор	Шорманов Сергей Венедиктович

Ведущая организация	ГОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. (, стр.2)

Защита диссертации состоится ………………. в ……… на заседании диссертационного совета Д 208.119.02 при ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Росздрава» ( ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Росздрава» ( )

Автореферат разослан «……»…………… 20…

Ученый секретарь

диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Реабилитация новорожденных с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) является одной из актуальных проблем современной неонатологии, поскольку использование в практической работе разработанных и рекомен­дованных ВОЗ критериев живо - и мертворождения (приказ МЗ РФ № 000 от 04.1992г.) привело к увеличению числа регистрируемых новорожденных с массой тела от 500 до 999 г. (, Н, 2005; , , 2007). Несмотря на сравнительно небольшую долю (0,2–2%) среди всех новорождённых, глубоконедоношенные дети определяют 45-55% младенческой и 60-70% ранней неонатальной смертности (, , 2001; , 2002; , 2006). Леталь­ность детей с экстремально низкой массой тела при рождении составляет 18–64 % (, 2004; Г, 2008; Lemons J. A., Bauer C. R., 2001; Alekxander G. R, Kogan М. et al., 2003; Muhuri Р. К., Mac­dorman M. F., Menacker F., 2006).

Эффективность выхаживания новорожденных с экстремально низкой массой тела зависит от морфо – функциональной зрелости гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой и иммунной систем, обеспечивающих постнатальную адаптацию детей (, , 2000, 2005; , 2005; , 2007; de Felice С., Toti Р., Musarò М. et al., 2008). Незрелость регуляторных систем определяет и структуру заболеваемости у новорожденных с ЭНМТ. У выживших детей диагностируются инфекционные (34%), тяжелые церебральные (33,3%), эндокринные (28%) и легочные (20%) заболевания, приводящие на последующих этапах развития к инвалидности (, , 2004; и др., 2002, 2005; и др.; 2008; и др., 2008, Soothil Р. et. al., 1997; Bylund В., Cervin Т., Finnstrom О. et al., 1998; Bancalari Е, Mora Т., 2001). Неблагоприятные исходы различных заболеваний у выживших детей с массой тела при рождении от 500 до 750 г составляют 70-90%, а от 750 до 1000 г – 40-50% ( и др., 2005; , , 2006; , и др., 2008).

Одной из основных причин смерти глубоконедоношенных детей являются инфекционно-воспалительные заболевания, развитие которых тесным образом связано с особенностями иммунной системы (, , 2001;., 2004; , и др., 2008; и др., 2008). Известно, что развитие плода, в том числе и органов иммуногенеза, в онтогенезе корригируется и контролируется сложной функциональной системой “мать-плацента-плод” (, 1998; , 2000; , , 2002; , 2005; , , 2008). Трансплацентарное проникновение материнских IgG обеспечивает гуморальный иммунитет плода до созревания его иммунной системы ( Н, В, 2001; П, В, 2006).

Иммунная система плода развивается и функционирует в сложных условиях. С одной стороны, она поддерживает внутренний гомеостаза плода, а с другой, подвергаясь антигенному влиянию со стороны материнского организма, должна быстро адаптироваться и реагировать на эти воздействия (, и др. 2000; , 2005; , В., , 2006). Установлено, что такие процессы в иммунной системе, как пролиферация, дифференцировка, миграция, кооперация и апоптоз, генетически детерминированы (, 1999; Bodey В., Siegel S. E. , 1999; , , 2000; , , 2002; Muller S. M, 2005). В то же время морфоиммуногенез - это результат сложного взаимодействия клеток–предшественников и незрелых тимоцитов с различными структурными компонентами стромы, формирующими микроокружение для лимфоцитов (, и др., 1999; , 2001; , , И, , 2004). Основным компонентом ретикулярного каркаса тимуса являются полифункциональные эпителиальные клетки, снижение гормонопродуцирующей и цитокиновой функций которых служит структурной основой для развития иммунодефицитных состояний (, , 1992, 1999; , и др., 2004; , 2006; Aita М., Cocchia D., Minella А. В., 1994; Abonia J. P., Castells М. С., 2002).

Метаболизм, экспрессия рецепторов и продукция цитокинов создают оптимальный баланс популяций лимфоцитов и формируют полноценный ответ иммунной системы на воздействие патогенных факторов (, 1999; , В., и др., 2000; Т. Е., Зиновьева 2008). Перечисленные выше процессы достаточно подробно изучены в культуре клеток и крайне скудно описаны на системном и организменном уровнях.

В литературе достаточно подробно освещены вопросы клинической диагностики иммунной недостаточности у доношенных новорожденных и детей раннего возраста. Формирующиеся при этом структурные изменения в тимусе трактуются (, , и др. 1998; Aspinall R., Andrew D., 2000; , 2005; Yinon Y., Zalel Y., В. Weisz et al., 2007) как результат акцидентальной трансформации органа. При этом совершенно не учитываются гестационные особенности тимуса.

Реакция иммунной системы на антигенные, в том числе и инфекционные, агенты определяется морфофункциональной зрелостью органов данной системы (, , К, 1999; , , и др., 2004; и др., 2005). Однако морфологические аспекты зрелости органов иммунной системы, в первую очередь тимуса, у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела в литературных источниках отражены недостаточно и носят фрагментарный характер. Кроме того, следует подчеркнуть, что знание структурных особенностей развития тимуса в фетальном периоде онтогенеза, является одним из важных условий своевременной диагностики патологии иммунной системы в виде тканевых пороков развития, составляющих структурную основу иммунодефицитных состояний ( и др., 1996; , , 2001; , , 2004; и др., 2004; , , 2005).

С учетом актуальности темы и значимости для практического здравоохранения в ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. » Министерства здравоохранения и социального развития в рамках комплексной программы института «Разработка методов прогнозирования, диагностики, профилактики и коррекции нарушений здоровья новорожденных, находящихся в критическом состоянии или риске его развития» выполнена представленная работа.

Цель работы. Установить особенности развития плаценты и тимуса, разработать критерии гестационной зрелости и дисхроний развития центрального органа иммунной системы у плодов и новорожденных с экстремальной низкой массой тела при неосложненном течении и невынашивании беременности в 22-27 недель.

Задачи исследования

1.  Оценить особенности соматического развития плодов при неосложненном течении и невынашивании беременности в недель.

2.  Выявить структурные особенности тимуса и плаценты на органном, тканевом и клеточном уровнях организации у плодов и новорожденныхнедель гестации.

3.  Разработать морфологические критерии гестационной зрелости тимуса и плаценты у плодов и новорожденных 22-24 и 25-27 недель гестации.

4.  Обосновать варианты и разработать морфологические критерии нарушений развития центрального органа иммунной системы у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела.

5.  Сопоставить структурные изменения в плаценте и тимусе при рождении детей с массой – 999 г в сроки гестации 22-24 и 25-27 недель.

6.  Установить взаимосвязь между особенностями соматического развития плодов и морфологическими изменениями в тимусе и плаценте при неосложненном течении и невынашивании беременности в 22-27 недель.

Новизна научных исследований

Определены анатомические особенности соматического статуса и типы развития плодов и новорожденных при неосложненном течении и невынашивании беременности в 22 – 27 недель. Выявлены закономерности формирования тимуса у плодов и новорожденных 22-27 недель гестации, характеризующиеся гестационным снижением кортикально-медуллярного коэффициента, увеличением удельных объемов мозгового вещества и сосудистого компонента, плотности расположения клеточных элементов в коре, увеличением коэффициента экспрессии CD3 Т-лимфоцитов и количества лимфоцитарно-эпителиальных модулей в сочетании с гиперплазией митохондрий и цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума в эпителиальных клетках. Уточнены особенности дифференцировки лимфоцитов и зависимость этих процессов от состояния ретикулоэпителиальных клеток – одного из основных компонентов клеточного микроокружения. Впервые выделены критические периоды (22-24 и 25-27 недель) развития тимуса и разработаны критерии его гестационной зрелости. Установлена взаимосвязь между анатомическими особенностями соматического статуса и центрального органа иммунной системы у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела.

Впервые у плодов и новорожденных с массой тела от 500 до 999 г определена структурная основа ретардантного и диспластического типов дисхроний развития тимуса. Снижение тимико-весового коэффициента (до 0,002 ед.), удельных объемов коркового и мозгового вещества в сочетании с замедленной кортико-медуллярной дифференцировкой, сниженной экспрессией CD3 Т-лимфоцитов и плотностью расположения эпителиальных клеток в субкортикальной зоне коры являются морфологическими признаками ретардантного типа дисхронии развития тимуса.

Аномалии формы, эктопическая локализация и гипоплазия органа, двукратное уменьшение паренхиматозно-стромального коэффициента, отсутствие кортико-медуллярной дифференцировки в сочетании с резкой убылью тимоцитов во всех морфо-функциональных зонах тимуса и кистозной трансформацией телец Гассаля на фоне достоверного снижения их удельного объема составляют структурную основу диспластического варианта развития тимуса.

Доказано, что дисплазия и ретардантный тип дисхроний развития тимуса, патогенетически связанные с воздействием материнских и плацентарных факторов, составляют структурную основу патологии центрального органа иммунной системы у новорожденных с ЭНМТ.

Обоснована взаимосвязь структурных перестроек в плаценте и тимусе у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела, подтвержденная содружественностью изменений органометрических параметров этих органов и зависимостью структурных преобразований в органах иммунной системы от срока гестации и влияния плацентарных факторов.

Показано, что гипоплазия, аномалии формы плаценты и прикрепления пупочного канатика, а также поствоспалительная гиповаскуляризация, склероз стромы ворсин и деструктивные изменения ультраструктур синцитиотрофобласта на фоне недоразвития процессов адаптации и компенсации в 78,9% случаев сопровождаются дисхрониями развития центрального органа иммунной системы в виде дисплазии и ретардации. Впервые установлены патоморфологические особенности плацентарной недостаточности при дисхрониях развития тимуса у новорожденных с экстремально низкой массой тела.

Практическая значимость работы

Разработан алгоритм оценки соматического статуса и определены диагностические критерии типов соматического развития плодов и новорожденных при неосложненном течении и невынашивании беременности в 22-27 недель.

Предложен необходимый для практического здравоохранения алгоритм исследования органов иммунной системы у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела. На основании комплексного морфологического исследования тимуса плодов 22-27 недель гестации на различных уровнях структурной организации выделены критические периоды развития органа (22-24 и 25-27 недель) и разработаны критерии его гестационной зрелости как у плодов 22-27 недель, так и в критические периоды гестации 22-24 и 25-27 недель.

С морфологических позиций обоснованы варианты нарушения развития центрального органа иммунной системы и диагностические критерии ретардантного и диспластического типов дисхроний тимуса у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела. С учетом выявленных взаимосвязей между патоморфологическими особенностями плаценты и вилочковой железы разработаны критерии плацентарной недостаточности и определена роль плацентарных факторов в формировании дисхроний тимуса у плодов и новорожденных с массой тела от 500 до 999 г.

Положения, выносимые на защиту

1. Физиологический тип соматического развития плодов при неосложненном течении беременности в 22-27 недель характеризуется положительной гестационной динамикой весовых и линейных параметров плода как в целой группе, так и в подгруппах с двух-, трехнедельным интервалом. Максимальный прирост соматометрических параметров приходится на 26-27 недели гестации и совпадает с завершением формирования структурно-функциональных зон в тимусе. Снижение абсолютных показателей соматического статуса и неравномерное изменение окружности груди, длины верхней и нижней конечностей определяют ретардантый тип соматического развития, диагностируемый в 69,9% случаев при невынашивании беременности в 22-27 недель.

2. Положительная динамика линейно-весовых параметров тимуса плодов 22-27 недель гестации, дифференцировка клеточно-тканевых структур в морфо-функциональных зонах долек, преобладание фенотипически зрелых CD2, CD3 Т-лимфоцитов и увеличение количества тимических телец фазы морфо-функциональной зрелости отражают дифференцировку лимфоретикулоэпителиальных и мезенхимальных структур, обеспечивающих иммунологическую защиту организма на последующих этапах онтогенеза.

3. Формирование центрального органа иммунной системы при неосложненном течении беременности определяется сроком гестации и сопряжено с особенностями соматического развития плодов 22-27 недель гестации.

4. Структурная основа критических период развития тимуса у плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела определяется особенностями паренхиматозно-стромальных и лиифоцитарно-эпителиальных соотношений.

5. Реализующее действие патологических факторов на формирование тимуса зависит от морфо-функционального состояния плаценты - связующего звена функциональной системы «мать-плацента-плод».

6. Аномалии формы тимуса, замедление или отсутствие кортико-медуллярной и внутритимусной дифференцировки лимфоцитов составляют структурную основу дисхроний развития тимуса, относящихся в морфо-функциональном плане к тканевым порокам развития органа.

7. Гипоплазия плаценты, нарушения созревания ворсин, сочетание воспаления с хроническими расстройствами материнского и плодового кровообращения в плаценте сопровождаются дисхрониями развития тимуса.

8. Ретардантный и диспластический типы дисхроний тимуса патогенетические связанные с влиянием материнских и плацентарных факторов, являются структурной основой патологии тимуса у новорожденных с ЭНМТ в перинатальном и постнатальном периодах.

Апробация диссертации и публикации

Результаты научно-исследовательской работы доложены на республиканских семинарах «Новые технологии охраны здоровья семьи» (Иваново, 2000; 2001), «Актуальные проблемы лабораторной и функциональной диагностики в акушерстве, гинекологии и перинатологии (Иваново, 2002), «Иммунология репродукции» (Иваново, 2005), «Профилактика социального сиротства в Российской Федерации» (Иваново, 2008), на заседаниях научно-практического общества патологоанатомов (Иваново, 2006, 2008, 2009, 2010); III, IV съездах Российского общества детских патологоанатомов, (Санкт-Петербург, 2008; Выборг 2010); IV съезде акушеров-гинекологов России (Москва, 2008); III Международном конгрессе по перинатальной медицине (Москва, 2009); V Конгрессе по детской аллергологии и клинической иммунологии (Москва, 2009); Юбилейном Всероссийском научном форуме «Мать и дитя» (Москва, 2009); Всероссийской конференции к «100-летию Российского общества патологоанатомов» (Санкт-Петербург, 2009); VIII Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии (Москва, 2009); ХIV конгрессе педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2010); XI Всероссийском научном форуме «Мать и дитя» (Москва, 2010).

Основные материалы и положения диссертации отражены в 69 печатных работах, из них 46 - в центральной печати, 10 - в журналах, рекомендованных ВАК для публикации результатов докторских диссертационных работ.

Внедрение результатов работы в практику

Результаты диссертационного исследования вошли в монографию «Морфология плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела», (2005), в методические издания, утвержденные Управлением охраны здоровья матери и ребенка Министерства здравоохранения Российской Федерации,: «Морфо-функциональные параметры базальной децидуальной оболочки последа при невынашивании беременности и состояние плода и новорожденного», №96/180, (1996); «Морфологическая диагностика структурных нарушений нейроэндокринной, иммунной и дыхательной систем плода и новорожденного при невынашивании беременности», № 000/16, (2000); в медицинские технологии, утвержденные Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития,: «Алгоритм диагностики морфологических изменений в последе при невынашивании беременности иммунного генеза (22-27 недель)», ФС № - 2007/247 от 01.01.2001; «Диагностические критерии иммунодефицитных состояний у новорожденных с экстремально низкой массой тела», ФС № 000/063 от 03; в пособия для врачей и информационные письма: «Антропометрические и органометрические параметры плодов-выкидышей с массой тела до килограмма» (1991); «Морфологические критерии оценки зрелости плода и новорожденного» (1993); «Принципы построения патологоанатомического диагноза и оформления врачебного свидетельства о смерти в перинатологии» (1998);

Результаты научных исследований защищены двумя патентами РФ «Способ оценки жизнеспособности новорожденных с экстремально низкой массой тела по состоянию вилочковой железы» № 000 от 10, «Способ диагностики иммунодефицитных состояний у новорожденных с экстремально низкой массой тела» № 000 от 01.01.2001 г.

Внедрение результатов научных исследований в учебный процесс на кафедре анатомии человека, на кафедре патологической анатомии с секционным курсом ГОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия», на кафедре анатомии человека ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия», в работу патологоанатомических отделений различных регионов России подтверждено соответствующими актами внедрения..

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 245 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав с изложением результатов собственных исследований и их обсуждением, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 80 рисунками (фотографии - 75, графики - 7). Библиографический указатель содержит 208 отечественных и 115 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Характеристика материалов и методов исследования

В работе представлены результаты комплексного морфологического исследования тимуса и плаценты в рамках функциональной системы «мать-плацента-плод» с оценкой соматического статуса плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела.

Проанализированы особенности течения беременности и родов у 303 женщин, беременность которых завершилась преждевременными родами (188) в 22-27 недель либо прервана по медицинским показаниям путем операции малое кесарево сечение (115). Из исследуемых групп исключены женщины с многоплодной беременностью, изосерологической несовместимостью и с прерыванием беременности путем амниоцентеза..

Основную часть наблюдаемого контингента составили женщины в возрасте 20-35 лет (87%). По количеству беременностей преобладали повторнобеременные – 67,5 % (201), у которых в 36,8% случаев констатировано привычное невынашивание беременности. Настоящая беременность у,8%) женщин осложнилась в ранние сроки угрозой невынашивания, у 53-х (28,9%) - преждевременной отслойкой нормально и низкой расположенной плаценты, у, 7%) - имело место дородовое излитие околоплодных вод. Проведенные перед родами иммуноферментное исследование и полимеразная цепная реакция (ПЦР - диагностика) позволили установить у 113-ти женщин основной группы герпетическую (34,4%); хламидийную (23,4%), уреаплазменную (26,7%) и микоплазменную (15,5%) инфекции, которые в 47,3% случаев сочетались с бактериальной.

В группе последов (188) при преждевременных родах в 22-27 недель, в 32,4% случаев выявлены аномальные формы с патологическим (краевым и оболочечным) прикреплением (3,2%) пуповины, по ходу которой определялись ложные узлы (28,7%) с гипертрофией вартонова студня и извитым ходом сосудов в них. В 3 случаях диагностирована аплазия одной из артерий, в 9 –гипоплазия стенки пуповинной вены). Низкое прикрепление аномальных по форме последов в 11% осложнилось преждевременной их отслойкой с развитием кровотечения, послужившего причиной анте - и интранатальной гибели плодов. На материнской части последов в зонах локализации ретроплацентарных гематом, наряду с дефектами ткани визуализировались различные по количеству, размерам и срокам формирования геморрагические и ишемические инфаркты (34,5%).

От 188 женщин получено 118 анте - , интранатально погибших плодов и 70 новорожденных, смерть которых наступила в постнатальном периоде. Средняя продолжительность жизни 70 новорожденных, вошедших в исследуемую группу, составила в среднем 6 суток 12 часов. Непосредственной причиной смерти 31-го ребенка явилась врожденная пневмония вирусно-бактериальной этиологии, 22-х детей – сочетание врожденной пневмонии с внутрижелудочковыми кровоизлияниями II-III степени, а также врожденный сепсис (9), язвенно-некротический энтероколит (5) и лептоменингит (3).

Рис. 1. Структура заболеваемости новорожденных

с экстремально низкой массой тела

Группу сравнения составили 115 плодов и последов при индуцированном оперативном (малое кесарево сечение в нижнем сегменте матки) прерывании беременности по медицинским показаниям (миопия высокой степени, диспластический деформирующий артроз тазобедренных суставов, олигофрения, дети инвалиды в семье и др.)

Оценка соматического статуса плодов и новорожденных с ЭНМТ проводилась по основным (15) массо-ростовым параметрам: теменно-пяточная длина, масса тела при рождении, окружность головы, груди, дина ноги, руки, стопы, плеча, предплечья, бедра и голени, а также окружности составных частей верхней и нижней конечностей. С целью объективизации оценки рассчитывались массо-ростовой и плацентарно-плодовый коэффициенты.

Для диагностики этиологии воспаления использован метод прямой и непрямой иммунофлюоресценции мазков - отпечатков с плаценты, легких, печени и субэпендимальные зоны боковых желудочков головного мозга плодов. Антигены цитомегаловируса человека, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Herpes simplex II type определялись в мазках-отпечатках с помощью диагностических наборов научно-производственной фирмы «ЛАБдиагностика», содержащих видоспецифические антитела, меченные флюоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ).

Комплексная морфологическая оценка тимуса и плаценты осуществлялась на различных уровнях структурной организации, как в целом в группе, так и в подгруппах с трехнедельным интервалом, с применением органо-, гистометрии, обзорных гистологических, гистохимических и иммуногистохимических методов, а также трансмиссионной электронной микроскопии.

Аутопсийный материала для обзорных гистологических, гистохимических, иммуногистохимических, электронномикроскопических методик забирался не позднее 30 минут с момента смерти с последующей фиксацией в растворах Карнуа, Буэна, Беккера и 10% нейтральном забуференном формалине. Парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм окрашивались гематоксилином Эрлиха с докраской эозином, железным гематоксилином Вейгерта с докраской по Ван Гизон и по Маллори. Гликозаминогликаны (ГАГ) дифференцировали 0,1% раствором толуидинового синего на цитратно-фосфатном буфере при различных значениях pH (3,5-6,5) c контролем срезов бактериальной и тестикулярной гиалуронидазой. Оценка энергетического материала и мукопротеидов осуществлялась с помощью PAS – реакции по Мак-Манусу с ферментативным контролем амилазой и выявлением гликогена реакцией Беста. Содержание и распределение ДНК и РНК в клетках определяли методом Фельгена - Россенбека с гидролизом срезов в 0,1 N растворе соляной кислоты и методом Браше с инкубированием контрольных срезов в термостате в 5% растворе трихлоруксусной кислоты. Оценка результатов гистохимического исследования осуществлялась визульно по четырехбалльной системе. В зависимости от интенсивности окрашивания в 100 клетках каждого исследуемого образца определялся средний гистохимический коэффициент в условных единицах.

Для иммуногистохимического исследования с кусочков ткани тимуса и плаценты после 2-х часовой фиксации в 4% растворе параформальдегида готовились срезы на криостате MICROM НМ с последующим выявлением в них соответствующих антигенов. Фенотипическую характеристику лимфоцитов изучали с помощью моноклональных мышиных античеловеческих антител фирмы «DakoCytomation», оценивая наличие антигенов CD1а, CD2, CD3 в Т-лимфоцитах. На мембранах ретикулоэпителиальных клеток тимуса определяли антигены цитокератина. В качестве вторичных антител применяли биотинилированные антитела к иммуноглобулинам.

Результаты иммуногистохимических реакций оценивались количественным методом по модифицированному нами способу McCarthy и соавт. (1985). В десяти полях зрения микроскопа при увеличении х400 подсчитывалось до 100 клеток с различной интенсивностью окрашивания (от 0 до 3 баллов). Иммуногистохимический коэффициент (ИГК) изучаемых факторов определялся по формуле:

ИГК = ∑P(i)/100, где i - интенсивность окрашивания в баллах от 0 до 3;

P (i) процент клеток, окрашенных с разной интенсивностью.

В ряде случаев использовалась только качественная оценка и выражалась как отрицательная (-), слабо положительная (+), умеренно положительная (++) и сильно положительная (+++).

Стандартизированная морфометрия плаценты и тимуса с помощью 100- и 25- ти точечных сеток позволила оценить удельный объем основным структурных компонентов исследуемых органов. Использованные в работе морфологические методики выполнялись по прописям, изложенным в классических руководствах по гистологической технике и гистохимии (, 1990; , , 1996).

Образцы плаценты и тимуса для электронномикроскопического исследования фиксировали в 2,5% растворе глютаральдегида, осуществляли много - этапную проводку материала и заключали образцы в смесь эпоксидных смол. Полутонкие срезы (1мкм), приготовленные на ультрамикротоме «Leica Ultracut UCN», окрашивались метиленовым синим в сочетании с азур II и фуксином основным. Ультратонкие срезы контрастировали насыщенным раствором уранилацетата в 100% метиловом спирте. Ультраструктура тимуса и элементов ворсинчатого дерева изучалась в электронном трансмиссионном микроскопе ЭВМ – 100АК.

Полученный цифровой материал обработан методами вариационной статистики с помощью программного обеспечения «Statistica». Достоверность различий между вариационными рядами с нормальным типом распределения оценивали с помощью критерия Стьюдента. Осуществлялся корреляционный анализ с определением парных коэффициентов корреляции и оценкой силы связи по степеням.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В связи со значимостью плодового фактора в органо-, системогенезе и в формировании элементов функциональной системы «мать-плацента-плод», проведено сопоставление органометрических параметров и морфологических особенностей тимуса с 15 соматометрическими параметрами плодов 22-27 недель гестации при индуцированном прерывании беременности по медицинским показаниям. Анализ соматометрических параметров плодов и новорожденных при индуцированном и самопроизвольном прерывании беременности в 22-27 недель показал, что для неосложненного течения беременности характерно гармоничное и пропорциональное соматическое развитие. При данном типе соматического развития масса и длина тела, окружности головы, груди, длины плеча, бедра и весо-ростовой коэффициент увеличиваются равномерно и прямо пропорциональо сроку гестации (рис. 2).

Положительная динамика указанных выше соматометрических параметров выявлена как в целой группе, так и в подгруппах с двухнедельным интервалом: 22-23; 24-25 и 26-27 недель. Так, прирост массы плода в 24-25 недель составляет 173 г, внедель – 196 г. Длина тела (теменно-пяточный размер) каждые две недели увеличивается на 3-4 см. Положительная динамика теменно-пяточного размера напрямую связана с увеличением линейных параметров нижней конечности, в частности, бедра, длина которого в 26-27 недель в 1,5 раза превышает аналогичный параметр в 24-25 недель. Увеличение же линейных параметров голени в пределах рассматриваемых подгрупп статистически не достоверно.

Рис. 2. Динамика соматометрических параметров

плодов 22-27 недель гестации

Длина верхней конечности меняется в диапазоне от 1,1 до 1,5 см, при этом наиболее интенсивно растет плечо (0,6 - 0,8 см). Интенсивность роста верхних конечностей так же, как и нижних, стабилизируется с 26-27 недель гестации. Окружности плеча, предплечья, бедра и голени, характеризующие прирост мышечной массы и подкожной жировой клетчатки, изменяются в соответствии с увеличением гестационного срока, достигая максимальных цифр нанеделях гестации.

Неправомерно считать полным анализ антропометрических параметров без учета определенных коэффициентов. Массо - ростовой коэффициент на протяжении 22-27 недель гестации имеет тенденцию к прогрессивному увеличению, особенно нанеделях внутриутробного развития, что подтверждает положительную динамику весового и линейного параметров тела на данном этапе онтогенеза. Грудо-ростовой коэффициент составляет 0,55±0,04 и остается стабильным в пределах данного срока гестации, что свидетельствует о пропорциональном соматическом развитии плодов в среднефетальном периоде. Дополнительно пропорциональность развития плодов оценивалась с помощью таких коэффициентов, как отношение длины верхней и нижней конечностей к длине тела. Коэффициент (отношение длины руки к теменно-пяточной длине) так же, как и грудо-ростовой, изменялся статистически не достоверно и составил 0,37 ±0,012. Несколько иная динамика выявлена со стороны коэффициента – отношение длины нижней конечности к теменно-пяточной длине. На фоне стабильности данного параметра у плодов 22-23 и 24-25 недель гестации отмечается увеличение этого коэффициента кнеделям развития, что подтверждает усиленный рост нижней конечности на данном этапе онтогенеза.