Принцип метода При нагревании крови с ледяной уксусной кислотой гемоглобин распадается на гем и глобин. Если гидролиз крови проводить в присутствии уксусной кислоты, содержащей галогеновые соли, гем превращается в солянокислую соль — гемин, образующий характерные кристаллы ромбовидной формы. Проба Тейхмана используется в судебно-медицинской практике для доказательства наличия кровяных пятен.
Реактивы, исследуемый материал:
1) ледяная уксусная кислота, содержащая галогеновые соли; 2) кровь.
Ход работы
Стеклянной палочкой наносят на предметное стекло каплю крови, размазывая ее по стеклу. Полученный мазок не должен быть очень тонким, однако и не слишком толстым. Мазок сушат, держа предметное стекло высоко над пламенем горелки (если стекло с кровью держать над самим пламенем или внести в пламя, опыт не удастся). На высохший мазок наносят 2 капли уксусной кислоты, накрывают покровным стеклом и осторожно нагревают до закипания жидкости под стеклом (не. кипятить!). После этого вводят под стекло еще 2 капли уксусной кислоты и рассматривают препарат под микроскопом.
Кристаллы гемина под микроскопом имеют вид ромбовидных палочек, окрашенных в бурый цвет. Кристаллы гемина зарисовывают в тетради.
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
ВИЗУАЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ
Реактивы: АДФ (0,2 мг/мл) в изотоническом растворе; силиконизированные пипетки на 0,2 мл; пробирки; секундомер.
Ход работы: в пробирку с 0,2 мл плазмы добавляют 0,1 мл раствора АДФ и включают секундомер. Перемешивают. При появлении агрегатов (крупинки) секундомер останавливают. Проводится реакция при комнатной температуре. У здоровых людей образование агрегатов начинается через 17—20 с.
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
ВРЕМЯ СВЕРТЫВАНИЯ ПО ЛИ-УАЙТУ
Оборудование:
1. силиконизированные и несиликонизированные пробирки;
2. секундомер;
3. водяная баня на 37°С;
4. стеклянные палочки.
Ход работы: пробирки нагревают до 37 СС, В силиконизиро-ванную пробирку до метки 2 мл набирают кровь из вены. При появлении в пробирке первых капель крови включают секундомер. 1 мл из силиконизированной пробирки переливают без вспенивания в несиликонизированную пробирку до метки 1 мл. Через 2 мин, а затем через каждые 30 с пробирки легко наклоняют, не встряхивая, на 50—60° и следят, натекает ли кровь на стенки пробирки. Пока кровь не свернулась, она растекается по стенкам. Момент свертывания замечают по секундомеру и записывают.
Затем стеклянной палочкой отделяют сгусток от стенки пробирки. Компактный сгусток при наклоне пробирки легко скользит по ее стенкам.
В норме у людей от 15 до 60 лет время свертывания в несиликонизированновой пробирке при 37 °С 5—7 мин, при 20—25 °С — 6—11 мин, в силиконизированной — соответственно — 15—25 и 15—35 мин.
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выделение холестерина из мозговой ткани
Ход работы. Мозговую ткань в количестве 0,5 г растирают •в фарфоровой ступке с двойным по объему или тройным по весу количеством гипса. Полученную массу намазывают тонким слоем на стеклянную пластинку и высушивают на воздухе или в сушильном шкафу. Сухую массу снимают скальпелем и растирают в фарфоровой ступке до гомогенного порошка. Порошок переносят в сухую пробирку, добавляют 3 мл хлороформа и, закрыв пробирку корковой пробкой, взбалтывают 5—10 минут. По окончании встряхивания жидкость фильтруют через маленький складчатый фильтр, смоченный хлороформом. С фильтратом проделывают цветные реакции на холестерин
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Выделение фосфатидов из мозговой ткани
Ход работы. Мозговую ткань в количестве 0,5—1 г помещают в пробирку, добавляют 3—5 мл горячего спирта и нагревают на водяной бане при температуре 50—60° в течение 10—15 минут, тщательно перемешивая содержимое стеклянной палочкой. По окончании экстракции жидкость фильтруют в сухую пробирку и с фильтратом проделывают реакцию на лецитин.
В широкую пробирку наливают 10 капель спиртового раствора лецитина
и добавляют 10 или 20 капель 10% NaOH и кипятят 3-5 минут. В результате гидролиза лецитин распадается на составные части. Фиксируют запах.
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Оценка транспортной функции сывороточного альбумина
Принцип метода Определяют содержание альбумина в сыворотке крови и количество альбумина, связывающегося с раствором конго красного, после чего вычисляют процент альбумина, связанного с красителем. Альбумин является неспецифическим транспортером веществ, его связывающая способность важна для оценки фармакокинетики и фармакодинамики лекарств.
Реактивы, исследуемый материал:
1) кристаллический альбумин человека; 2) конго красный, 0,1% раствор; 3) №С1, насыщенный раствор; 4) №С1, 0,9% раствор.
Ход работы
1. Готовят реагенты для построения калибровочного графика связывания красителя со стандартным раствором альбумина, содержащим 100; 75; 50; 25; 6,25 и 3,125 г альбумина в 1 л 0,9% раствора N301. К 5 мл 0,1% раствора конго красного добавляют по 0,1 мл раствора альбумина из каждого разведения.
2. В 5 мл 0,1% раствора конго красного помещают 0,1 мл исследуемой сыворотки. Через 30 мин в пробирки добавляют по 5 мл насыщенного раствора №С1 и помещают на 24 ч в термостат при 37 "С. Затем содержимое пробирок фильтруют. К 0,1 мл фильтрата добавляют 5 мл воды и измеряют оптическую плотность при А, 530 нм в кювете толщиной 10 мм.
Строят график зависимости величины оптической плотности от концентрации альбумина, по которому определяют количество альбумина, связанного с красителем в исследуемой сыворотке. Отдельно определяют количество альбумина в данной сыворотке. Затем рассчитывают транспортную функцию альбумина. Например, количество альбумина в исследуемой сыворотке составило 60 г/л, а количество альбумина, связанного с красителем, — 25 г/л. Составляют пропорцию: 60 — 100%, а 25 — х%; х = 40%. У здоровых людей этот показатель, отражающий транспортную функцию альбумина, составляет 92%.
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Обнаружение пенициллина реакцией с гидроксиламином
Принцип метода. При нагревании пенициллина и гидроксиламина раскрывается лактамное кольцо пенициллина с образованием а-гидроксамовой кислоты, дающей с хлорным железом продукт конденсации красного цвета.
Реактивы: 1) пенициллин, 0,5% водный раствор; 2) гидроксиламин, 5% раствор; 3) хлорное железо, 5% раствор.
Ход работы К 5 каплям 0,5% водного раствора пенициллина добавляют 2 капли 5% раствора гидроксиламина. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения прибавляют 1 каплю 5% раствора хлорного железа. Появляется розовое или красное окрашивание.
Результат: ______________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Нитропруссидная реакция на пенициллин
Принцип метода. При щелочном гидролизе пенициллина происходит освобождение сульфгидрильных групп, взаимодействующих с нитропруссидом натрия с образованием нестойкого соединения красного цвета.
Реактивы: 1) пенициллин, 0,5% раствор; 2) едкий натр, концентрированный раствор; 3) нитропруссид натрия, 5% раствор.
Ход работы К 2 каплям раствора пенициллина добавляют 2 капли концентрированного раствора едкого натра и кипятят 1—2 мин. После охлаждения добавляют по каплям раствор нитропруссида натрия. Наблюдают появление красного окрашивания, переходящего в оранжевое и желтое.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 |
