Практикум по биохимии (стр. 13 )

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Мальтольная реакция на стрептомицин

Принцип метода. Реакция основана на способности стрептомицина гидролизоваться щелочью с образованием мальтола (а-метил-р-оксипирона), дающего характерное окрашивание с ионами трехвалентного железа.

Реактивы: 1) стрептомицин, 1% раствор; 2) едкий натр, 10% раствор; 3) соляная кислота, 10% раствор; 4) хлорное железо, 1% раствор.

Ход работы: К 3 каплям раствора стрептомицина добавляют 1 каплю раствора едкого натра. Смесь кипятят на спиртовке в течение 5—10 с. Пожелтевшую и слегка мутную жидкость нейтрализуют 2 каплями раствора соляной кислоты. Нейтральная жидкость становится прозрачной и бесцветной. К ней добавляют 1—2 капли раствора хлорного железа. Появляется красно-фиолетовое окрашивание.

Результат: ______________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод______________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Реакция Сакагучи на гуанидиновую группировку стрептомицина

Реактивы: 1) стрептомицин, 1% водный раствор; 2) едкий натр, 10% раствор; 3) а-нафтол, 0,1% спиртовой раствор; 4) гипобромид натрия, 2% свежеприготовленный раствор.

Ход работы К 3 каплям раствора стрептомицина добавляют 3 капли раствора едкого натра, 3 капли сс-нафтола и 3—9 капель раствора гипобромида натрия. Жидкость окрашивается в красный или розово-красный цвет.

Вывод______________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Качественные реакции на тетрациклин

С хлорным железом. Тетрациклин с хлорным железом образует соединения типа фенолятов железа.

Реактивы:

1) раствор тетрациклина, 0,5% раствор; 2) хлорное железо, 5% раствор.

Ход работы К 10 каплям раствора тетрациклина прибавляют 1—2 капли раствора хлорного железа. Появляется коричневая окраска.

Вывод______________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

С концентрированной серной кислотой. При добавлении концентрированной серной кислоты к сухому препарату тетрациклина появляется красное окрашивание в результате ее водоотнимающего действия.

Реактивы: 1.тетрациклин, порошок; 2.концентрированная серная кислота.

Ход работы: к 5—10 мг порошка тетрациклина прибавляют 10 капель концентрированной серной кислоты. Жидкость окрашивается в красный цвет

Вывод______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Качественные реакции на кортизол

С солянокислым фенилгидразином. Благодаря наличию карбонильных групп кортизон, преднизолон, реагируя с фенилгидразином, образуют гидразон и озазон.

Реактивы: 1) фенилгидразин солянокислый (0,1 г фенил гидразина растворить в 100 мл охлажденной смеси из равных объемов концентрированной серной кислоты и воды. Раствор готовить перед употреблением); 2) преднизолон, 1 мг в 1 мл этилового спирта.

Ход работы

К 1 мл раствора преднизолона прибавляют 5 мл раствора фенилгидразина и нагревают на водяной бане. Через несколько минут появляется желтое окрашивание.

Вывод______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

С реактивом Феллинга. Кортизон и преднизолон способны восстанавливать закись меди из солей окиси.

Реактивы:

1)  реактив Феллинга;

2)  раствор преднизолона.

Ход работы К 1 мл раствора преднизолона прибавляют 1 мл реактива Феллинга, нагревают на спиртовке. Выпадает красный осадок закиси меди.

Вывод______________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________

Обнаружение пиридоксалевой кислоты в моче

Принцип метода. Витамин В6 выделяется в виде пиридоксалевой кислоты, лактон которой флюоресцирует синим цветом в ультрафиолетовых лучах.

Реактивы:

1) соляная кислота, 10% раствор; 2) едкий натр, 10% раствор; 3) тетраборат натрия, \% раствор; 4) моча.

Ход работы

В пробирку вносят 3 капли мочи и столько же раствора соляной кислоты. Затем пробирку с содержимым кипятят на водяной бане в течение 20 мин для получения лактона пиридоксалевой кислоты. После охлаждения добавляют 3 капли раствора едкого натра и раствор тетрабората натрия до 1/2 объема пробирки. В полученном растворе наблюдают синее свечение в флюороскопе.

Вывод______________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

	ВВЕДЕНИЕ
I. ТЕМА: Вводное занятие
	Правила техники безопасности в биохимической лаборатории:
II. ТЕМА: БЕЛКИ
	Качественные реакции на белки и аминокислоты
	Биуретовая реакция на пептидные связи
	Нингидриновая реакция на a-аминокислоты
	Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты
	Реакция Миллона на тирозин
	Реакция Фоля на цистеин
	Реакции осаждения белков
	Осаждение белков при кипячении
	Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
	Осаждение белков органическими кислотами
	Растворимость белков
	Очистка белков методом диализа
	Разделение белков и определение их молекулярной массы методом гель - хроматографии
III. ТЕМА: ФЕРМЕНТЫ
	Действие амилазы на крахмал
	Влияние температуры
	Влияние рН среды
	Проба на субстратную специфичность амилазы и сахаразы
	Изучение аллостерических свойств а-амилазы
IV. ТЕМА НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ
	Кислотный гидролиз нуклеопротеинов.
V. ТЕМА: БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОКИСЛЕНИЕ
	Обнаружение НАД в дрожжах
	Обнаружение каталазы в крови
	Сопоставление ОВП рибофлавина.
VI. ТЕМА: ОБМЕН УГЛЕВОДОВ
	Обнаружение фосфотриоз в мышечной ткани
	Обнаружение дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида
	Обнаружение молочной кислоты
	Проба Бенедикта на глюкозу
	Выделение гликогена из печени
	Качественные реакции на углеводы
	Реакция Фелинга на моносахариды
	Реакция Селиванова на фруктозу
	Реакция Фелинга на дисахариды
	Гидролиз сахарозы и определение продуктов гидролиза
	Реакция Фелинга с крахмалом
	Реакция крахмала с йодом.
VII. ГОРМОНЫ.
	Качественные реакции на гормоны
	Реакция на адреналин с хлорным железом
	Диазореакция на адреналин
	Флюоресценция продуктов окисления адреналина
VIII. ВИТАМИНЫ
	Качественные реакции на витамины.
	Реакция восстановления витамина В2.
	Биуретовая реакция и реакция Фоля на инсулин
	На витамин С
	Феррихлоридная проба на витамин В6.
	На витамин А
	На викасол
	На витамин D
	На витамин Е
IX. ОБМЕН ЛИПИДОВ
	Влияние желчи на активность липазы
	Эмульгирование жира
	Качественные реакции на холестерин
	Качественная реакция на кетоновые тела
	Качественные реакции на желчные кислоты
X. ТЕМА НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ
	Определение мочевой кислоты в моче
	Теоретические основы ПЦР
XI. ТЕМА СИНТЕЗ БЕЛКА
	Количественное определение ДНК колориметрическим методом
	Количественное определение РНК колориметрическим методом
	Спектрофотометрическое определение суммарного содержания нуклеиновых кислот
	Определение активности рибонуклеазы
	Определение активности дезоксирибонуклеазы
XII. ТЕМА ЧАСТНАЯ БИОХИМИЯ
	Бензидиновая проба на кровь
	Получение кристаллов гемина из гемоглобина (проба Тейхмана)
	Визуальное определение агрегации тромбоцитов
	Время свертывания по Ли-Уайту
	Выделение холестерина из мозговой ткани
	Выделение фосфатидов из мозговой ткани
	Оценка транспортной функции сывороточного альбумина
	Обнаружение пенициллина реакцией с гидроксиламином
	Нитропруссидная реакция на пенициллин
	Мальтольная реакция на стрептомицин
	Реакция Сакагучи на гуанидиновую группировку стрептомицина
	Качественные реакции на тетрациклин
	Качественные реакции на кортизол
	Обнаружение пиридоксалевой кислоты в моче